Билет №1

Цели и задачи микробиологии, вирусологии.

Микробиология – это наука, изучающая микроорганизмы, их биологические признаки, систематику, экологию и взаимоотношение с др организмами.

Цель: глубокое изучение структуры и важнейших св-в патогенных микроорганизмов; взаимоотношение их с организмом человека в опр условиях природной и социальной среды; совершенствование методов микробиологической диагностики; разработка новых, более эффективных леч-ых и прф-их препаратов; решение такой важной проблемы,как ликвидация и предупреждение инф болезней.

Установление этиологической роли различных микроорганизмов в патологии человека. На этом строится диагностика инфекционных заболеваний.

Разработка методов диагностики и профилактики инфекционных заболеваний.

Изучение болезнетворных свойств патогенных микроорганизмов с целью определения клинической и эпидемиологической значимости того или иного микроорганизма.

Контроль за эффективностью лечебных и профилактических мероприятий.

Изучение асептики, антисептики, дезинфекции, стерилизации.

Изучение механизмов распространения микроорганизмов во внешней среде, в основном в питьевой воде, пище, воздухе.

Изучение вопросов охраны внешней среды.

Главная задача медицинской микробиологии – ликвидация инфекционных болезней.

Понятие об иммунитете. Виды и формы иммунитета.

Иммунитет – невосприимчивость ор-ма к болезнетворным микробам и в-вам неинф природы.

I. Естественный: врожденный, приобретенный, пассивный иммунитет новорожденных

II. Искусственный: пасивный, активный

Врожденный – самая прочная форма иммунитета, которая обусловлена врожденными биологическими особенностями данного вида.

Приобретенный иммунитет возникает после того, ка человек перенес инф болезнь, поэтому его также называют постинф-ым.

Приобретенный иммунитет индывидуален и потомству не передается, он спецефичен т к предохраняет организм только от перенесенных зб

Длительный ПИ возникает после: БТ, холеры, ветр оспы, дифтерии, сыпном тифе,сиб язвы.

При большинстве ИЗ р-тие иммунитета к данному в-лю идет паралельно освобождению ор-ма от микробов и после выздоровления человек освобождается от в-ля. Такой иммунитет назыв стерильным.

Существует также нестерильный иммунитет. Он закл-ся в том, что невосприимчивость ор-ма к повторному заражению микробом связано с наличием в ор-ме того же в-ля. Как только ор-м от него осв-ся человексново становится восприимчивым к данному зб

Пассивный иммунитет новорожденного обусловлен передачей антител из ор-ма матери плоду через плаценту или через молоко матери новорожденномую.

Активный ИИ создают для человека при введении ему прпаратов, которые получаю из убитых или ослабленных микробов(вакцины) либо обезвреженных токсинов в-ля (анатоксин).

Пасивный Ии возникает при введении в ор-м человека спец защитных в-в, которые получили название иммунных антител. Они создаются в сыворотках переболевших людей. антитела можно получить специально иммунизируя животных определенными видами в-лей.

Вирусы гепатита А. Эпидемиология гепатита А (источник заражения, механизм и пути передачи инфекции). Лабораторная диагностика гепатита. Лечение и профилактика гепатита А.

Мелкий РНК содержащие с кубическим типом симметрии. Не имеет суперкапсид мой оболочки

Эпидемиология

Источник инфекции больной человек

Механизм заражения:

Алиментарный

Путь передачи

Микробиологическая диагностика

Серологический метод :

1)ИФА Для определения в сыворотке иммуноглобулина м к вирусу гепатита А на ранних стадиях болезни

2) ИФА- Для определения иммуноглобулина G в парных пробах сыворотки крови к HAV. Диагностическим является четырехкратная нарастание титра антител

Специфическая профилактика и лечение

Активная : инактивированная культуральная вакцина

Пассивная: иммуноглобулин нормальный человеческий

Билет №2

Значение микробиологии в деятельности медицинской сестры.

Медицинская микробиология изучает микроорганизмы, патогенные для человека, их морфологию и физиологию, устойчивость к различным химическим веществам, процессы взаимодействия микробов и макроорганизма, те инфекцию и иммунитет. Микроорганизмы являются возбудителями инфекционнных болезней, которые часто встречаются в практике. Для того чтобы правильно поставить диагноз инфекционного заболевания, необходимо хорошо знать морфологию микробов, их основные формы, уметь различать их под микроскопом. Каждый медперсонал должен владеть методом микроскопии, для чего необходимо знать устройство микроскопа и правила работы с ним.

Факторы неспецифической резистентности организма.

Неспецифическая резистентность осуществляется клеточными и гуморальными факторами, тесно взаимодействующими в достижении кончного эффекта – катаболизма чужеродной субстанции: макрофагами, нейтрофилами, комплементом и другими клетками и растворимыми факторами. К гуморальныи факторам неспец резистентности принадлежат лейкины – вещества, полученные из нейтрофилов, проявляющие бактериоцидное действие в отношении ряда бактерий; эритрин- вещество, полученное из эритроцитов, бактериоцидное в отношении дифтерийной палочки. Факторами неспец резистентности также являются кожа и слизистые оболочки организма-первая линия защиты, где вырабатваются в-ва оказывающие бактериоцидное действие.

Факторы неспецифической резистентности организма

В неспецифической защите от микробов и антигенов важную роль, как указывалось выше, играют три барьера: механический, фи­зико-химический и иммунобиологический. Основными защитными факторами этих ба­рьеров являются кожа и слизистые оболочки, ферменты, фагоцитирующие клетки, комп­лемент, интерферон, ингибиторы сыворотки крови.

9.2.1. Кожа и слизистые оболочки

Многослойный эпителий здоровой кожи и слизистых оболочек обычно непроница­ем для микробов и макромолекул. Однако при малозаметных микроповреждениях, вос­палительных изменениях, укусах насекомых, ожогах и травмах через кожу и слизистые могут проникать микробы и макромолекулы. Вирусы и некоторые бактерии могут прони­кать в макроорганизм межклеточно, чреск-леточно и с помощью фагоцитов, перенося­щих поглощенных микробов через эпителий слизистых оболочек. Свидетельством этому является инфицирование в естественных ус­ловиях через слизистые верхних дыхательных путей, легких, желудочно-кишечного тракта и урогенитального тракта, а также возможность пероральной и ингаляционной иммунизации живыми вакцинами, когда вакцинный штамм бактерий и вирусов проникает через слизис­тые оболочки желудочно-кишечного тракта и дыхательных путей.

9.2.2. Физико-химическая защита

На чистой и неповрежденной коже обычно содержится мало микробов, так как потовые и сальные железы постоянно выделяют на ее поверхность вещества, обладающие бактери­цидным действием (уксусная, муравьиная, молочная кислоты).

Желудок также является барьером для про­никающих перорально бактерий, вирусов, ан­тигенов, так как последние инактивируются и разрушаются под влиянием кислого содер­жимого желудка (рН 1,5-2,5) и ферментов. В кишечнике инактивирующими факторами служат ферменты и бактериоцины, образуе­мые нормальной микробной флорой кишеч­ника, а также трипсин, панкреатин, липаза, амилазы и желчь.

9.2.3. Иммунобиологическая защита

9.2.3.1. Фагоцитоз

Фагоцитоз (от греч. phages - пожираю, cytos - клетка), открытый и изученный И. И. Мечниковым, является одним из ос­новных мощных факторов, обеспечивающих резистентность организма, защиту от ино­родных веществ, в том числе микробов. Это наиболее древняя форма иммунной защиты, которая появилась уже у кишечнополостных.

Механизм фагоцитоза состоит в поглоще- нии, переваривании, инактивации инород­ных для организма веществ специализиро­ванными клетками - фагоцитами.

И. И. Мечников к фагоцитирующим клет­кам отнес макрофаги и микрофаги. В на­стоящее время все фагоциты объединены в единую мононуклеарную фагоцитирующую систему. В нее включены тканевые макрофаги (альвеолярные, перитонеальные и др.), клет­ки Лангерганса и Гренстейна (эпидермоциты кожи), клетки Купфера (звездчатые ретику-лоэндотелиоциты), эпителиоидные клетки, нейтрофилы и эозинофилы крови и некото­рые другие.

Основные функции фагоцитов. Функции фа­гоцитов очень обширны: 1) удаляют из ор­ганизма отмирающие клетки и их структуры

(эритроциты, раковые клетки); 2) удаляют не-метабилизируемые неорганические вещества, попадающие во внутреннюю среду организма тем или иным путем (например, частички угля, минеральную и другую пыль, проника­ющую в дыхательные пути); 3) поглощают и инактивируют микробы (бактерии, вирусы, грибы), их останки и продукты; 4) синтези­руют разнообразные биологически активные вещества, необходимые для обеспечения ре­зистентности организма (некоторые компо­ненты комплемента, лизоцим, интерферон, интерлейкины и др.); 5) участвуют в регу­ляции иммунной системы; 6) осуществляют «ознакомление» Т-хелперов с антигенами, т. е. участвуют в кооперации иммунокомпе-тентных клеток.

Следовательно, фагоциты являются, с од­ной стороны, своеобразными «мусорщика­ми», очищающими организм от всех ино­родных частиц независимо от их природы и происхождения (неспецифическая функ­ция), а с другой стороны, участвуют в про­цессе специфического иммунитета путем представления антигена иммунокомпетент-ным клеткам (Т- лимфоцитам) и регуляции их активности.

Стадии фагоцитоза. Процесс фагоцитоза, т. е. поглощения инородного вещества клетка-ми, имеет несколько стадий: 1) приближение фагоцита к объекту поглощения (хемотаксис); 2) адсорбция поглощаемого вещества на по­верхности фагоцита; 3) поглощение вещества путем инвагинации клеточной мембраны с об­разованием в протоплазме фагосомы (вакуоли, пузырьки), содержащей поглощенное вещест­во; 4) слияние фагосомы с лизосомой клетки с образованием фаголизосомы; 5) активация лизосомальных ферментов и переваривание вещества в фаголизосоме с их помощью.

Особенности физиологии фагоцита. Для осу­ществления своих функций (рис. 9.2) фаго­циты располагают обширным набором ли-тических ферментов, а также продуцируют перекисные и NO ион-радикалы, которые могут поражать мембрану (или стенку) клетки на расстоянии или после фагоцитирования. На цитоплазматической мембране находятся

рецепторы к компонентам комплемента, Fc-фрагментам иммуноглобулинов, гистамину, а также антигены гистосовместимости I и II класса. Внутриклеточные лизосомы содержат до 100 различных ферментов, способных «пе­реварить» практически любое органическое вещество.

Фагоциты имеют развитую поверхность и очень подвижны. Они способны активно пе­ремещаться к объекту фагоцитоза по гради­енту концентрации особых биологически ак­тивных веществ - хемоаттрактантов. Такое передвижение получило название хемотаксис (от греч. chymeia - искусство сплавления

металлов и taxis - расположение, построе­ние). Это АТФ-зависимый процесс, в кото­ром участвуют сократительные белки актин и миозин. К числу хемоаттрактантов относятся, например, фрагменты компонентов компле­мента (СЗа и С5а), лимфокины ИЛ-8 и др.. продукты распада клеток и бактерий.

Адсорбция вещества на поверхности фа­гоцита осуществляется за счет слабых хи­мических взаимодействий и происходит ли­бо спонтанно, неспецифически, либо путем связывания со специфическими рецепторами (к иммуноглобулинам, компонентам компле­мента). «Захват» фагоцитом вещества вызыва­ет выработку большого количества перекис-ных радикалов («кислородный взрыв) и N0". которые вызывают необратимые, летальные повреждения как цельных клеток, так и отде­льных молекул.

Поглощение адсорбированного на фаго­ците вещества происходит путем эндоцито-за. Это энергозависимый процесс, связан­ный с преобразованием энергии химических связей молекулы АТФ в сократительную ак­тивность внутриклеточного актина и мио­зина. Окружение фагоцитируемого вещества бислойной цитоплазматической мембраной и образование изолированного внутриклеточ­ного пузырька - фагосомы напоминает «за­стегивание молнии». Внутри фагосомы про­должается атака поглощенного вещества активными радикалами. После слияния фа­госомы и лизосомы и образования в цитоп­лазме фаголизосомы происходит активация лизосомальных ферментов, которые разру­шают поглощенное вещество до элементар­ных составляющих, пригодных для дальней­шей утилизации для нужд самого фагоцита. Непереваренные остатки вещества «хоронят­ся» вместе с погибшим от старости фагоци­том. Ферментативное расщепление вещества может также происходить внеклеточно при выходе ферментов за пределы фагоцита.

Фагоциты, как правило, «переваривают» за­хваченные бактерии, грибы, вирусы, осущест­вляя таким образом завершенный фагоцитоз. Однако в ряде случаев фагоцитоз носит неза­вершенный характер: поглощенные бактерии (например, иерсинии) или вирусы (например, возбудитель ВИЧ-инфекции, натуральной ос-

пы) блокируют ферментативную активность фагоцита, не погибают, не разрушаются и да­же размножаются в фагоцитах. Такой процесс получил название незавершенный фагоцитоз.

Небольшой олигопептид может быть эндо-цитирован фагоцитом и после процессинга (т. е. ограниченного протеолиза) включен в состав молекулы антигена гистосовметимос-ти II класса. В составе сложного макромоле-кулярного комплекса олигопептид выставля­ется (экспрессируется) на поверхности клетки для «ознакомления» с ним Т-хелперов.

Фагоцитоз активируется под влиянием антител-опсонинов, адъювантами, компле­ментом, иммуноцитокинами (ИЛ-2) и дру­гими факторами. Механизм активирующего действия опсонинов основан на связывании комплекса антиген-антитело с рецепторами к Fc-фрагментам иммуноглобулинов на по­верхности фагоцитов. Аналогичным образом действует комплемент, который способствует связыванию на специфических для него ре­цепторах фагоцита (С-рецепторах) комплекса антиген-антитело. Адъюванты укрупняют мо­лекулы антигена и таким образом облегчают процесс его поглощения, так как интенсив­ность фагоцитоза зависит от величины погло­щаемой частицы.

Активность фагоцитов характеризуется фа­гоцитарными показателями и опсоно-фагоци-тарным индексом. Фагоцитарные показатели оцениваются числом бактерий, поглощенных или «переваренных» одним фагоцитом в еди­ницу времени, а опсонофагоцитарный индекс представляет отношение фагоцитарных пока­зателей, полученных с иммунной, т. е. содер­жащей опсонины, и неиммунной сывороткой. Эти показатели используются в клинической практике для определения иммунного статуса индивидуума.

9.2.3.2. Тромбоциты

Тромбоциты также играют важную роль в иммунитете. Они возникают из мегакариоци-тов, пролиферацию которых усиливает ИЛ-11. Тромбоциты имеют на своей поверхности ре­цепторы к IgG и IgE, к компонентам компле­мента (С1 и СЗ), атакже антигены гистосовмес-тимости I класса. На тромбоциты оказывают влияние образующиеся в организме иммунные

комплексы антиген + антитело (АГ+АТ), акти­вированный комплемент. В результате такого воздействия тромбоциты выделяют биологи­чески активные вещества (гистамин, лизоцим, |3-лизины, лейкоплакины, простагландины и др.), которые принимают участие в процессах иммунитета и воспаления.

9.2.3.3. Комплемент

Природа и характеристика комплемента. Комплемент является одним из важных фак­торов гуморального иммунитета, играющим роль в защите организма от антигенов. Он был открыт в 1899 г. французским имму­нологом Ж. Борде, назвавшим его «алекси­ном». Современное название комплементу дал П. Эрлих. Комплемент представляет со­бой сложный комплекс белков сыворотки крови, находящийся обычно в неактивном состоянии и активирующийся при соедине­нии антигена с антителом или при агрега­ции антигена. В состав комплемента входят 20 взаимодействующих между собой белков, девять из которых являются основными ком­понентами комплемента; их обозначают циф­рами: С1, С2, СЗ, С4... С9. Важную роль играют также факторы В, D и Р (пропердин). Белки комплемента относятся к глобулинам и отличаются между собой по ряду физико-химических свойств. В частности, они сущес­твенно различаются по молекулярной массе, а также имеют сложный субъединичный состав: C1-C1q, C1r, Cls; СЗ-СЗа, СЗb; С5-С5а, С5b и т. д. Компоненты комплемента синтези­руются в большом количестве (составляют 5-10 % от всех белков крови), часть из них образуют фагоциты.

Функции комплемента многообразны: а) участвует в лизисе микробных и других клеток (цитотоксическое действие); б) обладает хемо-таксической активностью; в) принимает учас­тие в анафилаксии; г) участвует в фагоцитозе. Следовательно, комплемент является компонен­том многих иммунолитических реакций, направ­ленных на освобождение организма от микробов и других чужеродных клеток и антигенов (на­пример, опухолевых клеток, трансплантата).

Механизм активации комплемента очень сложен и представляет собой каскад фер­ментативных протеолитических реакций, в

результате которого образуется активный ци-толитический комплекс, разрушающий стен­ку бактерии и других клеток. Известны три пути активации комплемента: классический, альтернативный и лектиновый (рис. 9.3). По классическому пути комплемент активирует­ся комплексом антиген-антитело. Для этого достаточно участия в связывании антигена одной молекулы IgM или двух молекул IgG. Процесс начинается с присоединения к ком­плексу АГ+АТ компонента С1, который рас­падается на субъединицы Clq, Clr и Cls. Далее в реакции участвуют последовательно активированные «ранние» компоненты ком-

племента в такой последовательности: С4, С2, СЗ. Эта реакция имеет характер усиливающе­гося каскада, т. е. когда одна молекула пре­дыдущего компонента активирует несколько молекул последующего. «Ранний» компонент комплемента СЗ активирует компонент С5, который обладает свойством прикрепляться к мембране клетки. На компоненте С5 путем последовательного присоединения «поздних» компонентов С6, С7, С8, С9 образуется лити-ческий или мембраноатакующий комплекс, который нарушает целостность мембраны (образует в ней отверстие), и клетка погибает в результате осмотического лизиса.

Альтернативный путь активации комплемен­та проходит без участия антител. Этот путь характерен для защиты от грамотрицательных микробов. Каскадная цепная реакция при аль­тернативном пути начинается с взаимодействия антигена (например, полисахарида) с протеи­нами В, D и пропердином (Р) с последующей активацией компонента СЗ. Далее реакция идет так же, как и при классическом пути - образу­ется мембраноатакующий комплекс.

Пектиновый путь активации комплемента также происходит без участия антител. Он ини­циируется особым маннозосвязывающим белком сыворотки крови, который после взаимодейс­твия с остатками маннозы на поверхности мик­робных клеток катализирует С4. Дальнейший каскад реакций сходен с классическим путем.

В процессе активации комплемента обра­зуются продукты протеолиза его компонен­тов - субъединицы СЗа и СЗЬ, С5а и С5Ь и дру­гие, которые обладают высокой биологической активностью. Например, СЗа и С5а принимают участие в анафилактических реакциях, являют­ся хемоаттрактантами, СЗЬ - играет роль в оп-сонизации объектов фагоцитоза, и т. д. Сложная каскадная реакция комплемента происходит с участием ионов Са 2+ и Mg 2+ .

9.2.3.4. Лизоцим

Особая и немаловажная роль в естествен­ной резистентности принадлежит лизоциму, открытому в 1909 г. П. Л. Лащенко и выделен­ному и изученному в 1922 г. А. Флемингом.

Лизоцим - это протеолитический фермент мурамидаза (от лат. mums - стенка) с моле­кулярной массой 14-16 кДа, синтезируемый макрофагами, нейтрофилами и другими фаго­цитирующими клетками и постоянно поступа­ющий в жидкости и ткани организма. Фермент содержится в крови, лимфе, слезах, молоке, сперме, урогенитальном тракте, на слизистых оболочках дыхательных путей, ЖКТ, в мозге. Отсутствует лизоцим лишь только в спинно­мозговой жидкости и передней камере гла­за. В сутки синтезируется несколько десятков граммов фермента. Механизм действия лизо-цима сводится к разрушению гликопротеидов (мурамилдипептида) клеточной стенки бакте­рий, что ведет к их лизису и способствует фаго­цитозу поврежденных клеток. Следовательно,

лизоцим обладает бактерицидным и бактери-остатическим действием. Кроме того, он акти­вирует фагоцитоз и образование антител.

Нарушение синтеза лизоцима ведет к сни­жению резистентности организма, возник­новению воспалительных и инфекционных заболеваний; в таких случаях используют для лечения препарат лизоцима, получаемый из яичного белка или путем биосинтеза, так как он продуцируется некоторыми бактериями (например, Bacillus subtilis), растениям семейс­тва крестоцветных (редис, репа, хрен, капуста и т. д.). Химическая структура лизоцима извес­тна, и он синтезирован химическим способом.

9.2.3.5. Интерферон

Интерферон относится к важным защитным белкам иммунной системы. Открыт в 1957 г. А. Айзексом и Ж. Линдеманом при изучении интерференции вирусов (лат. inter - меж­ду и ferens - несущий), т. е. явления, когда животные или культуры клеток, инфициро­ванные одним вирусом, становились нечувс­твительными к заражению другим вирусом. Оказалось, что интерференция обусловлена образующимся при этом белком, обладаю­щим защитным противовирусным свойством. Этот белок назвали интерфероном. В насто­ящее время интерферон достаточно хорошо изучен, известны его структура и свойства, и он широко используется в медицине как ле­чебное и профилактическое средство.

Интерферон представляет собой семейство белков-гликопротеидов с молекулярной мас­сой от 15 до 70 кДа, которые синтезируются клетками иммунной системы и соединитель­ной ткани. В зависимости от того, какими клетками синтезируется интерферон, выделя­ют три типа: а, beta и gama-интерфероны.

Альфа-интерферон вырабатывается лейко­цитами и он получил название лейкоцитар­ного; бета- интерферон называют фиброблас-тным, поскольку он синтезируется фиброб-ластами - клетками соединительной ткани, а гамма-интерферон - иммунным, так как он вырабатывается активированными Т-лимфо-цитами, макрофагами, естественными килле­рами, т. е. иммунными клетками.

Интерферон синтезируется в организме постоянно, и его концентрация в крови де­ржится на уровне примерно 2 МЕ/мл (1 меж­дународная единица - ME - это количество интерферона, защищающее культуру клеток от 1 ЦПД 50 вируса). Выработка интерферона резко возрастает при инфицировании виру­сами, а также при воздействии индукторов интерферона, например РНК, ДНК, сложных полимеров. Такие индукторы интерферона получили название интерфероногенов.

Помимо противовирусного действия интер­ферон обладает противоопухолевой защитой, так как задерживает пролиферацию (размноже­ние) опухолевых клеток, а также иммуномоду-лирующей активностью, стимулируя фагоцитоз, естественные киллеры, регулируя антителооб-разование В-клетками, активируя экспрессию главного комплекса гистосовместимости.

Механизм действия интерферона сложен. Интерферон непосредственно на вирус вне клетки не действует, а связывается со спе­циальными рецепторами клеток и оказыва­ет влияние на процесс репродукции вируса внутри клетки на стадии синтеза белков.

Действие интерферона тем эффективнее, чем раньше он начинает синтезироваться или пос­тупать в организм извне. Поэтому его использу­ют с профилактической целью при многих ви­русных инфекциях, например гриппе, а также с лечебной целью при хронических вирусных инфекциях, таких как парентеральные гепати­ты (В, С, D), герпес, рассеянный склероз и др. Интерферон дает положительные результаты при лечении злокачественных опухолей и забо­леваний, связанных с иммунодефицитами.

Интерфероны обладают видоспецифичнос-тью, т. е. интерферон человека менее эффек­тивен для животных и наоборот. Однако эта видоспецифичность относительна. Получают интерферон двумя способами: а) путем инфи­цирования лейкоцитов или лимфоцитов кро­ви человека безопасным вирусом, в результате чего инфицированные клетки синтезируют интерферон, который затем выделяют и конс­труируют из него препараты интерферона; б) генно-инженерным способом - путем выра­щивания в производственных условиях ре-комбинантных штаммов бактерий, способных продуцировать интерферон. Обычно исполь-

зуют рекомбинантные штаммы псевдомонад, кишечной палочки со встроенными в их ДНК генами интерферона. Интерферон, получен­ный генно-инженерным способом, носит на­звание рекомбинантного. В нашей стране ре-комбинантный интерферон получил офици­альное название «Реаферон». Производство этого препарата во многом эффективнее и дешевле, чем лейкоцитарного.

Рекомбинантный интерферон нашел ши­рокое применение в медицине как профилак­тическое и лечебное средство при вирусных инфекциях, новообразованиях и при имму-нодефицитах.

9.2.3.6. Защитные белки сыворотки крови

К защитным белкам сыворотки крови отно­сится ряд протеинов, принимающих участие в защите организма от микробов и других анти­генов: белки острой фазы, опсонины, пропер-дин, бета-лизин, фибронектин и др.

К белкам острой фазы относятся С-реактив-ный белок, противовоспалительные и другие белки, которые вырабатываются в печени в ответ на повреждение тканей и клеток. С-реактивный белок способствует опсонизации бактерий и является индикатором воспаления.

Маннозосвязывающий белок - нормальный протеин сыворотки крови. Способен прочно связываться с остатками маннозы, находя­щимися на поверхности микробных клеток, и опсонизировать их. Способствует фагоцитозу, активирует систему комплемента по лектино-вому пути.

Пропердин - представляет собой гамма-глобулин нормальной сыворотки крови. Способствует активации комплемента по аль­тернативному пути и таким образом участвует во многих иммунологических реакциях,

Фибронектин - универсальный белок плаз­мы и тканевых жидкостей, синтезируемый макрофагами. Обеспечивает опсонизацию ан­тигенов и связывание клеток с чужеродными веществами, например фагоцитов с антигенами и микробами, экранирует дефекты эндотелия сосудов, препятствуя тромбообразованию.

Бета-лизины - белки сыворотки крови, синтезируемые тромбоцитами. Оказывают повреждающее действие на цитоплазматичес-кую мембрану бактерий.

Защитные механизмы полости рта

Выделяют неспецифические факторы и специфические факторы резистентности. В свою очередь, неспецифические факторы делятся на клеточные и гуморальные, специфические аналогично - на клеточные и гуморальные.

Гуморальные факторы неспецифической резистентности

Ротовая жидкость имеет выраженную антибактериальную и противовирусную активность благодаря наличию в ней факторов неспецифической защиты. Они секретируются клетками слизистой оболочки, железистых образований полости рта, глотки, нейтрофилами и макрофагами.

К ним относятся лизоцим, лактоферин, интерферон, комплемент, пропердин и большое количество других веществ, которые имеют выраженные неспецифические ингибирующие, инактивирующие, лизирующие и другие свойства, пагубно действующие на микроорганизмы.

Лизоцим - катионный белок, имеющий ферментативный потенциал, гидролизующий составные компоненты клеточной стенки. Он поступает из слюнных желез, где находится в свободном и связанном состоянии в ацинусах и протоках. Фермент выявлен также в макрофагах и нейтрофилах. Поскольку эти клетки всегда присутствуют в десневой жидкости, поступление фермента в слюну возможно и этим путем. Активность фермента вызывает лизис бактериальной стенки большинства грамположительных микроорганизмов либо дезагрегацию цепочек стрептококков с последующим снижением потенциала их роста. Лизоцим как катионный белок может являться агглютинирующим агентом и вызывать аутолизис бактерий. В результате действий лизоцима на мукополисахариды бактерий образуются гликопептиды, которые стимулируют продукцию антител и защитные реакции гиперчувствительности замедленного типа, влияют на фагоцитоз.

Лактоферин также принимает активное участие в защите органов полости рта от возбудителей различной инфекции и в то же время контролирует функционирование нормальной микрофлоры. Защитное действие этого белка основано на конкуренции с микроорганизмами за присоединение железа. Известно, что при избытке железа вирулентность некоторых видов микроорганизмов (стрептококк и кандида) резко возрастает. Происхождение лактоферина в полости рта мало изучено.

Большое значение в формировании неспецифичной противоинфекционной резистентности слизистой оболочки полости рта, противовирусной, принадлежит интерферону. Следует отметить, что интерферон может угнетать реакции гиперчувствительности замедленного типа. Синтезируется интерферон лимфоцитами, макрофагами и фибробластами. При вирусной инфекции клетки синтезируют интерферон и секретируют его в межклеточное пространство, где он связывается со специфическими рецепторами соседних непораженных клеток.

Результат действия интерферона состоит в образовании барьера из неинфицированных клеток вокруг очага вирусной инфекции с целью ограничения ее распространения. Интерфероны играют важную роль в борьбе с вирусами, а не в предотвращении вирусной инфекции. В последнее время получены данные, свидетельствующие о том, что интерфероны, как антагонисты онкобелка, ингибируют пролиферативную активность клеток.

К числу факторов неспецифической защиты слизистой оболочки полости рта можно отнести комплемент (С) - сложный комплекс белков. Комплемент в полости рта в основном находится в зубодесневой жидкости и обуславливает острую воспалительную реакцию тканей десны, уничтожение микробов и повреждение тканей.

Кроме общих факторов неспецифической защиты, важную протективную роль играют ферменты слюны, такие как амилаза, щелочная и кислая фосфатаза, РНК-аза, ДНК-аза, протеолитические ферменты и ингибиторы протеолиза. К активу защитных факторов полости рта имеет смысл отнести эндогенные пирогены, которые выделяются фагоцитирующими макрофагами при вирусных заболеваниях, а также систему пропердина.

Таким образом, слюна представлена практически полным набором ферментов, способных разрушать практически все виды простых биологических субстратов (белки, жиры, углеводы).

Факторы неспецифической резистентности (защиты), которые обеспечивают неселективный характер ответа на антиген и являются наиболее стабильной формой невосприимчивости, обусловлены врожденными биологическими особенностями вида. Они реагируют на чужеродный агент стереотипно и независимо от его природы. Основные механизмы неспецифической защиты формируются под контролем генома в процессе развития организма и связаны с естественно-физиологическими реакциями широкого спектра - механическими, химическими и биологическими.

Среди факторов неспецифической резистентности выделяют:

ареактивность клеток макроорганизма к патогенным микроорганизмам и токсинам, обусловленную генотипом и связанную с отсутствием на поверхности таких клеток рецепторов для адгезии патогенного агента;

барьерную функцию кожи и слизистых оболочек, которая обеспечивается отторжением клеток эпителия кожи и активными движениями ресничек мерцательного эпителия слизистых оболочек. Кроме того, она обусловлена выделением экзосекретов потовых и сальных желез кожи, специфических ингибиторов, лизоцима, кислой средой желудочного содержимого и другими агентами. Биологические факторы защиты на этом уровне обусловлены губительным воздействием нормальной микрофлоры кожи и слизистых покровов на патогенные микроорганизмы;

температурную реакцию, при которой прекращается размножение большинства патогенных бактерий. Так, например, устойчивость кур к возбудителю сибирской язвы (В. anthracis) обусловлена тем, что температура их тела находится в пределах 41-42 °С, при которой бактерии не способны к самовоспроизводству;

клеточные и гуморальные факторы организма.

В случае проникновения патогенов в организм включаются гуморальные факторы, к которым относятся белки системы комплемента, пропердин, лизины, фибронектин, система цитокинов (интерлейкины, интерфероны и др.). Развиваются сосудистые реакции в виде быстрого локального отека в очаге повреждения, что задерживает микроорганизмы и не пропускает их во внутреннюю среду. В крови появляются белки острой фазы - С-реактивный протеин и маннансвязывающий лектин, которые обладают способностью взаимодействовать с бактериями и другими возбудителями. В этом случае усиливаются их захват и поглощение фагоцитирующими клетками, т. е. происходит опсонизация патогенов, а эти гуморальные факторы играют роль опсонинов.

К клеточным факторам неспецифической защиты относятся тучные клетки, лейкоциты, макрофаги, естественные (натуральные) киллерные клетки (NK-клетки, от англ. «natural killer»).

Тучные клетки - это большие тканевые клетки, в которых находятся цитоплазматические гранулы, содержащие гепарин и биологически активные вещества типа гистамина, серотонина. При дегрануляции тучные клетки выделяют особые вещества, являющиеся медиаторами воспалительных процессов (лейкотриены и ряд цитокинов). Медиаторы повышают проницаемость сосудистых стенок, что позволяет комплементу и клеткам выходить в ткани очага поражения. Все это сдерживает проникновение патогенов во внутреннюю среду организма. NK-клетки представляют собой крупные лимфоциты, не имеющие маркеров Т- или В-клеток и способные спонтанно, без предварительного контакта убивать опухолевые и вирусинфицированные клетки. В периферической крови на их долю приходится до 10 % от всех мононуклеарных клеток. NK-клетки локализованы главным образом в печени, красной пульпе селезенки, слизистых оболочках.

Фагоцитоз - биологическое явление, основанное на узнавании, захвате, поглощении и переработке чужеродных веществ эукариотической клеткой. Объектами для фагоцитоза являются микроорганизмы, собственные отмирающие клетки организма, синтетические частицы и др. Фагоцитами являются полиморфно-ядерные лейкоциты (нейтрофилы, эозинофилы, базофилы), моноциты и фиксированные макрофаги - альвеолярные, перитонеальные, купферовские клетки, дендритные клетки селезенки и лимфатических узлов, клетки Лангерганса и др.

В процессе фагоцитоза (от греч. phago - пожираю, cytos - клетки) различают несколько стадий (рис. 15.1):

Приближение фагоцита к чужеродному корпускулярному объекту (клетке);

Адсорбция объекта на поверхности фагоцита;

Поглощение объекта;

Разрушение фагоцитированного объекта.

Первая фаза фагоцитоза осуществляется за счет положительного хемотаксиса.

Адсорбция происходит путем связывания чужеродного объекта рецепторами фагоцита.

Третья фаза осуществляется следующим образом.

Фагоцит обхватывает адсорбированный объект своей наружной мембраной и втягивает (инвагинирует) его внутрь клетки. Здесь образуется фагосома, которая затем сливается с лизосомами фагоцита. Формируется фаголизосома. Лизосомы представляют собой специфические гранулы, содержащие бактерицидные ферменты (лизоцим, кислые гидролазы и др.).

Специальные ферменты участвуют в образовании активных свободных радикалов О 2 и Н 2 О 2 .

На заключительном этапе фагоцитоза происходит лизис поглощенных объектов до низкомолекулярных соединений.

Такой фагоцитоз протекает без участия специфических гуморальных факторов защиты и получил название доиммунного (первичного) фагоцитоза. Именно этот вариант фагоцитоза впервые описан И. И. Мечниковым (1883) как фактор неспецифической защиты организма.

Результатом фагоцитоза является либо гибель чужеродных клеток (завершенный фагоцитоз), либо выживание и размножение захваченных клеток (незавершенный фагоцитоз). Незавершенный фагоцитоз представляет собой один из механизмов длительной персистенции (переживания) патогенных агентов в макроорганизме и хронизации инфекционных процессов. Такой фагоцитоз чаще протекает в нейтрофилах и завершается их гибелью. Незавершенный фагоцитоз выявлен при туберкулезе, бруцеллезе, гонорее, иерсиниозах и других инфекционных процессах.

Повышение скорости и эффективности фагоцитарной реакции возможно при участии неспецифических и специфических гуморальных белков, которые получили название опсонинов. К ним относят белки системы комплемента СЗb и С4b, белки острой фазы, IgG, IgM и др. Опсонины имеют химическое сродство к некоторым компонентам клеточной стенки микроорганизмов, связываются с ними, а затем такие комплексы легко фагоцитируются потому, что фагоциты имеют специальные рецепторы для молекул опсонинов. Кооперация различных опсонинов сыворотки крови и фагоцитов составляет опсонофагоцитарную систему организма. Оценку опсонической активности сыворотки крови проводят путем определения опсонического индекса или опсонофагоцитарного индекса, которые характеризуют влияние опсонинов на поглощение или лизис микроорганизмов фагоцитами. Фагоцитоз, в котором принимают участие специфические (IgG, IgM) белки-опсонины, называют иммунным.

Система комплемента (лат. complementum - дополнение, средство пополнения) - это группа белков сыворотки крови, которые принимают участие в реакциях неспецифической защиты: лизиса клеток, хемотаксиса, фагоцитоза, активации тучных клеток и др. Белки комплемента относятся к глобулинам или гликопротеинам. Они вырабатываются макрофагами, лейкоцитами, гепатоцитами и составляют 5-10% всех белков крови.

Система комплемента представлена 20-26 белками сыворотки крови, которые циркулируют в виде отдельных фракций (комплексов), различаются по физико-химическим свойствам и обозначаются символами С1, С2, С3 ... С9 и др. Хорошо изучены свойства и функция основных 9 компонентов комплемента.

В крови все компоненты циркулируют в неактивной форме, в виде коэнзимов. Активация белков комплемента (т. е. сборка фракций в единое целое) осуществляется специфическими иммунными и неспецифическими факторами в процессе многоступенчатых превращений. При этом каждый компонент комплемента катализирует активность следующего. Этим обеспечиваются последовательность, каскадность вступления компонентов комплемента в реакции.

Белки системы комплемента участвуют в активации лейкоцитов, развитии воспалительных процессов, лизисе клеток-мишеней и, прикрепляясь к поверхности клеточных мембран бактерий, способны опсонизировать («одевать») их, стимулируя фагоцитоз.

Известно 3 пути активации системы комплемента: альтернативный, классический и лектиновый.

Наиболее важным компонентом комплемента является СЗ, который расщепляется конвертазой, образующейся при любом пути активации, на фрагменты СЗа и СЗb. Фрагмент СЗb участвует в образовании С5-конвертазы. Это является начальным этапом формирования мембранолитического комплекса.

При альтернативном пути комплемент может активироваться полисахаридами, липиполисахаридами бактерий, вирусами и другими антигенами без участия антител. Инициатором процесса является компонент СЗb, который связывается с поверхностными молекулами микроорганизмов. Далее при участии ряда ферментов и белка пропердина этот комплекс активирует компонент С5, который прикрепляется к мембране клетки-мишени. Затем на нем образуется мембраноатакующий комплекс (МАК) из компонентов С6-С9. Процесс завершается перфорацией мембраны и лизисом микробных клеток. Именно этот путь запуска каскада комплементарных белков имеет место на ранних стадиях инфекционного процесса, когда специфические факторы иммунитета (антитела) еще не выработаны. Кроме того, компонент СЗb, связываясь с поверхностью бактерий, может выполнять роль опсонина, усиливая фагоцитоз.

Классический путь активации комплемента запускается и протекает с участием комплекса антиген-антитело. Молекулы IgM и некоторые фракции IgG в комплексе антиген-антитело имеют специальные места, которые способны связать компонент С1 комплемента. Молекула С1 состоит из 8 субъединиц, одна из которых является активной протеазой. Она участвует в расщеплении компонентов С2 и С4 с образованием СЗ-конвертазы классического пути, которая активирует компонент С5 и обеспечивает формирование мембраноатакующего комплекса С6-С9, как при альтернативном пути.

Лектиновый путь активации комплемента обусловлен присутствием в крови особого кальцийзависимого сахаросвязывающего протеина - маннансвязывающего лектина (МСЛ). Этот протеин способен связывать остатки маннозы на поверхности микробных клеток, что приводит к активации протеазы, расщепляющей компоненты С2 и С4. Это запускает процесс формирования лизирующего мембрану комплекса, как при классическом пути активации комплемента. Некоторые исследователи рассматривают этот путь как вариант классического пути.

В процессе расщепления компонентов С5 и СЗ образуются малые фрагменты С5а и С3а, которые служат медиаторами воспалительной реакции и инициируют развитие анафилактических реакций с участием тучных клеток, нейтрофилов и моноцитов. Эти компоненты получили название анафилатоксинов комплемента.

Активность комплемента и концентрация отдельных его компонентов в организме человека могут увеличиваться или уменьшаться при различных патологических состояниях. Могут быть и наследственные дефициты. Содержание комплемента в сыворотках животных зависит от вида, возраста, сезона и даже времени суток.

Наиболее высокий и стабильный уровень комплемента отмечен у морских свинок, поэтому в качестве источника комплемента используют нативную или лиофилизированную сыворотку крови этих животных. Белки системы комплемента очень лабильны. Они быстро разрушаются при хранении при комнатной температуре, действии света, ультрафиолетовых лучей, протеаз, растворов кислот или щелочей, удалении ионов Са++ и Mg++. Прогревание сыворотки при 56 °С в течение 30 мин приводит к разрушению комплемента, и такая сыворотка называется инактивированной.

Количественное содержание компонентов комплемента в периферической крови определяют как один из показателей активности гуморального иммунитета. У здоровых лиц содержание компонента С1 составляет 180 мкг/мл, С2 - 20 мкг/мл, С4 - 600 мкг/мл, СЗ - 13 001 мкг/мл.

Воспаление как важнейшее проявление иммунитета развивается в ответ на повреждение тканей (прежде всего покровных) и направлено на локализацию и уничтожение микроорганизмов, которые проникли в организм. В основе воспалительной реакции лежит комплекс гуморальных и клеточных факторов неспецифической резистентности. Клинически воспаление проявляется покраснением, отеком, болью, локальным повышением температуры, нарушением функции поврежденного органа или ткани.

Центральную роль в развитии воспаления играют сосудистые реакции и клетки системы мононуклеарных фагоцитов: нейтрофилы, базофилы, эозинофилы, моноциты, макрофаги и тучные клетки. При повреждении клеток и тканей, кроме того, высвобождаются различные медиаторы: гистамин, серотонин, простагландины и лейкотриены, кинины, белки острой фазы, в том числе С-реактивный белок, и др., которые играют важную роль в развитии воспалительных реакций.

Бактерии, проникшие в организм при повреждении, и продукты их жизнедеятельности активируют свертывающую систему крови, систему комплемента и клетки макрофагально-мононуклеарной системы. Происходит образование сгустков крови, что предупреждает распространение возбудителей с кровью и лимфой и препятствует генерализации процесса. При активации системы комплемента образуется мембрано-атакующий комплекс (МАК), который лизирует микроорганизмы или опсонизирует их. Последнее усиливает способность фагоцитирующих клеток поглощать и переваривать микроорганизмы.

Характер течения и исход воспалительного процесса зависят от многих факторов: природы и интенсивности действия чужеродного агента, формы воспалительного процесса (альтеративное, экссудативное, пролиферативное), его локализации, состояния иммунной системы и др. Если воспаление не завершается в течение нескольких дней, оно становится хроническим и тогда развивается иммунное воспаление с участием макрофагов и Т-лимфоцитов.

АНТИТЕЛА (ИММУНОГЛОБУЛИНЫ) Антитела - это особый вид белков, называемых иммуноглобулинами (Ig), который вырабатывается под влиянием антигенов и обладает способностью специфически реагировать с ними. При этом антитела могут нейтрализовать токсины бактерий и вирусы (антитоксины и вируснейтрализующие антитела), осаждать растворимые антигены (преципитины), склеивать корпускулярные антигены (агглютинины), лизировать бактерии, другие клетки, например эритроциты (лизины), повышать фагоцитарную активность лейкоцитов (опсонины), связывать антигены, не вызывая каких-либо видимых реакций (блокирующие антитела). Структура антител. Электронно-микроскопические исследования показали, что молекула иммуноглобулина имеет форму буквы «игрек». Состоит она из четырех полипептидных цепей, связанных друг с другом дисульфидными мостиками (рис. 3). Две из них длинные и посередине изогнутые, как хоккейные клюшки, а две прямые и почти в 2 раза короче, прилегают снаружи к каждой длинной цепи. Молекулярная масса длинных цепей 50000-70000, коротких - 20000-25000. Ввиду этого длинные полипептидные цепи иммуноглобулина называют тяжелыми или Н-цепями (англ. heavy - тяжелый), а короткие - легкими или Ц-цепями (англ. light - легкий). Рис. 3. Строение иммувоглобулина G Обе цепи иммуноглобулина по порядку расположения в них аминокислот делятся на две части. Одна из них, С-область, у всех цепей иммуноглобулина независимо от их специфичности константна, т.е. имеет одинаковую последовательность аминокислот. Другая - V-область - представляет собой вариабельную часть полипептидных цепей, в которой последовательность расположения аминокислот меняется в зависимости от вида антигена, вызвавшего образование антитела. При этом на концах V-областей молекулы иммуноглобулина, между тяжелыми и легкими цепями, формируются два антигенсвязывающих центра, или как их сейчас называют по механизму взаимодействия с антигеном антидетерминантами или паратопами. Антигенсвязывающие центры иммуноглобулинов имеют зеркальную конфигурацию детерминантной группы того антигена, под воздействием которого вырабатывались. Вследствие этого распознавание антигена соответствующим антителом происходит не по химической структуре, а по общей конфигурации гаптена, благодаря взаимной комплементарности с антигенсвязывающим центром. Классы. В зависимости от строения константных областей тяжелых цепей все иммуноглобулины разделяют на пять классов: IgG, IgE, IgD, IgM и IgA (рис. 4). Рис. 4. Классы иммуноглобулинов Первые три класса иммуноглобулинов являются мономерами, т. е. бивалентными, содержащими два антигенсвязывающих центра: IgM - полимер, состоит из пяти мономерных молекул, связанных в области Fc-фрагментов особыми j -цепями. Валентность IgA различна. В сыворотке крови IgА, как и IgG, имеет мономерную структуру, а в секретах слизистых оболочек, межтканевой жидкости - в виде димеров (двух мономерных молeкул). Эти так называемые секреторные IgAS связаны особым полипептидом, который защищает димеры от воздействия протеолитических ферментов. Физико-химические свойства Ig. По физико-химическим свойствам иммуноглобулины G, Е, D и А представляют собой белки с молекулярной массой 150000-350000, обозначаемые по константе седиментации как 7S (IgG, IgE, IgD, IgА), 7,7-8,0 S (IgА), 9-12 S (IgАS). Макроиммуноглобулины М имеют молекулярную массу 900000 и константу седиментации 19 S. Биологические свойства Ig. Касаясь биологических свойств иммуно-глобулинов, нужно отметить, что содержание их в крови непостоянно и колеблется от 0,3-0,4 мг% (IgЕ) до 50-420 мг% (IgА и IgМ) и 800-1680 мг% (IgG). На первичное введение в организм антигена вырабатываются IgM. Отличаются они выраженной авидностью (жадностью), т. е., обладая 10 антигенсвязывающими центрами, образуют прочные соединения с антигенами, несущими множественные эпитопы, вызывают агглютинацию и лизис клеток, обеспечивают устойчивость к бактериальным инфекциям. Сохраняются IgМ, однако, недолго, и период их полувыведения не превышает 5 дней. При повторном попадании антигена происходит бурная выработка IgG, обеспечивающих нейтрализацию бактериальных токсинов и вирусов. Связываясь с микроорганизмами, IgG активируют образование комплемента, вызывают хемотаксис нейтрофилов. Микрофаги быстро поглощают бактерии, обработанные IgG и комплементом, так как имеют рецептoры к Fс-фрагменту иммуноглобулина и С3-фракции комплемента. IgG легко проникает через барьеры, в частности сквозь плаценту, попадая в кровь новорожденных. В последующем титр их пополняется при кормлении грудью, что обеспечивает иммунитет младенца в первые недели жизни. Период полувыведения IgG равен 24 дням. Иммуногло6улины А, АS, Е вырабатываются как на первичное, так на вторичное воздействие антигена. При этом сывороточные IgА накапливаются в крови. Секреторные IgАS продуцируются в слизистых оболочках кишечника, верхних дыхательных и мочевыводящих путей, содержатся в глазной жидкости, слюне, молоке и обеспечивают местный иммунитет тканей. Период полувыведения равен 6 дням. IgE - цитофильный иммуноглобулин, в частности связывается с тучными клетками и базофилами крови. При реагировании с антигенами (микробами, веществами) в результате образования на их поверхности иммунных комплексов высвобождаются медиаторы воспалительной реакции. Иммуноглобулин класса D находится на поверхности В-лимфоцитов вместе с мономерными IgМ составляет их рецепторы. Взаимодействие иммуноглобулинов с антигенами. IgG, IgM, IgА реагируют с детерминантами антигенов всеми имеющимися в их молекуле антигенсвязывающими центрами. Вследствие этого в растворах о6разуются крупные конгломераты веществ. Антитела, вызывающие видимые реакции, называют полными. В противоположность этому некоторая часть IgE и IgG реагирует с антигеном лишь одним активным центром, видимых реакций не дает и поэтому называется неполными антителами. Если реакция взаимодействия этих антител происходит в крови и не вызывает каких-либо нарушений в организме, их называют антителами-свидетелями. Последние блокируют антиген, а нередко одновременно связывают комплемент, вследствие чего называются блокирующими и комплементсвязывающими. Реагирование IgE с антигенами на поверхности клеток приводит к развитию аллергий. При незначительных, бесследно исчезающих проявлениях аллергии на кожных покровах антитела называют реагинами, а при ярко выраженных повреждениях клеток кожи- агрессинами или кожно-сенсибилизцрующими антителами. ПРОЦЕСС АНТИТЕЛООБРАЗОВАНИЯ Образование антител как иммунная реакция на антигены происходив в лимфоидной ткани периферических органов иммунитета, главным образом в лимфатических узлах и белой пульпе селезенки. Продуцентами антител являются плазмоциты. Общая иммунная реакция на антиген. Начинается синтез антител с захвата антигенов макрофагами и появления в корковой зоне лимфатических узлов центров размножения (вторичных фолликулов) с большим количеством митотически делящихся лимфоцитов и плазматических клеток. В первые сутки после введения антигена резко снижается выход лимфоцитов из лимфатических узлов, а в последующие 3-4 дня, наоборот, значительно возрастает и ведет к интенсивной миграции (расселению) стимулированных лимфоцитов через кровь во все лимфоидные ткани и органы. Фазы антителообразоваиия. В динамике образования антител различают две фазы - индуктивную (латентную) и продуктивную, или репродуктивную. Индуктивной фазой называют отрезок времени между введение антигена и появлением следов антител или первых плазмоцитов. В этой фазе происходит распознавание антигена. Он фагоцитируется (пиноцтируется) макрофагами или же связывается гастиоцитами. Если вслед за этим антиген полностью разрушается, то антитела не вырабатываются. Антителогенез происходит лишь при частичной деградации антигена. В таком случае в лимфоидной ткани, где происходит связывание антиген отмечаются массовая гибель и параллельно пролиферация клеток, появляется большое количество фагоцитов, увеличивается содержание в ней гистамина, гепарина, серотонина и других веществ, усиливающих воспаление. На фоне воспаления в конце индуктивной фазы начинается кооперация (взаимодействие) между макрофагами, на мембране которых находится измененный антиген, Т- и В-лимфоцитами, в результате чего молодые В-лимфоциты получают сигнал к пролиферации и дифференцируются в плазмоциты. Индуктивная фаза длится примерно 20 ч. Она очень лабильна. Начавшийся процесс антителообразования в этой фазе можно приостановить воздействием неблагоприятных для организма факторов. Наиболее легко это удается с помощью радиации, вследствие чего индуктивную фазу антителогенеза называют радиочувствительной. В продуктивной фазе происходит интенсивный синтез антител. остановить его нельзя даже облучением и поэтому продуктивную фазу можно назвать радиорезистентной. В этой фазе иммунного ответа кооперация иммунокомпетентных клеток, темп деления В-лимфоцитов резко усиливаются. В частности, на смену молодым клеткам типа плазмобластов (иммунобластов) в лимфоидной ткани появляются вначале юные, а затем зрелые плазматические клетки. При первичном иммунном ответе максимальное количество плазмоцитов в селезенке и лимфатических узлах появляется на седьмые сутки. Это совпадает с самым высоким титром антител в крови. Повторное введение чужеродного антигена сопровождается необычно интенсивным процессом антителообразования. При этом плазмоциты появляются через 48 ч, а максимальный титр антител - на 3-4-есутки. Это связано с наличием у иммунизированных индивидуумов специальных клеток иммунологической памяти, которые являются, по сути, юными плазмоцитами с незаконченным циклом трансформации. Естественно, что при повторном воздействии антигена они, проделав несколько делений, в считанные часы превращаются в зрелые плазмоциты. Продуктивная фаза антителообразования сравнительно непродолжительна. Применительно к одному клону она длится около 10 суток, но по отношению ко многим из них может увеличиться до нескольких недель, однако через 2-3 месяца титр антител в крови переболевших инфекционными заболеваниями резко снижается. Функциональные особенности плазмоцитов. Касаясь функциональных особенностей плазмоцитов, следует подчеркнуть, что они могут рассматриваться как своеобразные одноклеточные 6елковые железы. Как правило, плазмоциты образуют антитела одной иммунологической специфичности, например Н- или О-антитела к соответствующим жгутиковым и соматическим антигенам бактерий, Более того, при наличии в молекуле антигена двух разных детерминант плазмоцит вырабатывает антитела против одной из них. Только 0,01 % плазмоцитов продуцирует оба антитела. Первичный иммунологический ответ о6ычно начинается с синтеза IgМ. При вторичном ответе на антиген образуются микроглобулины IgG. Развитие клона плазмоцитов, начиная от плазмобласта до зрелой формы, занимает 5-6 суток. Жизненный цикл плазмоцитов, продуцирующих тот или иной вид антител, не превышает 48 ч. При этом вырабатывающиеся клоном плазмоцитов антитела представляют собой широкий спектр иммуноглобулинов, отличающихся по специфичности к различным детерминантам антигена. АЛЛЕРГИЯ (ГИПЕРЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ) Под аллергией понимают неадекватный по силе иммунный ответ организма на определенное вещество-агент (аллерген), связанный с повышенной к нему чувствительностью (гиперчувствительностью). Аллергия специфична и возникает при повторном контакте с аллергеном, вызвавшим изменение иммунореактивности организма. Аллергия свойственна теплокровным животным и особенно человеку. Ее формирование в большей мере обусловлено способностью млекопитающих вырабатывать аллергические (анафилактические) IgЕ. Природа и классификация аллергенов. Аллергию вызывают многочисленные факторы окружающей среды, но чаще всего химические вещества, обладающие свойствами иммуногенов и гаптенов. По резервуару их образования все аллергены делят на экзоаллергены, попадающи извне, и эндоаллергены, образующиеся в самом организме. Экзоаллергены, с которыми контактирует человек, в свою очередь подразделяют на аллергены неинфекционного и инфекционного происхождения. Среди неинфекционных аллергенов различают бытовые, эпидермальные (перхоть, шерсть, волосы), лекарственные (пенициллин, сульфаниламиды и др.), промышленные (формалин, бензол), пищевые. Отдельно выделяют поллинозы, вызываемые цветочной пыльцой растений (лат: ро11еп - пыльца). Наиболее сильными сенсибилизирующими свойствами среди аллергенов инфекционного происхождения обладают аллергены патогенных грибков, бактерий и вирусов. Типы аллергических реакций. Аллергии - это иммунные гуморально-клеточные реакции сенсибилизированного организма на повторное воздействиё аллергенов. В настоящее время различают реакции гиперчувствительности немедленного типа (ГНТ) и реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ). К ГНТ относят анафилактический шок, сывороточную болезнь, бронхиальную астму, сенную лихорадку, крапивницу, непереносимость к пищевым и лекарственным веществам. Столь же многочисленна группа реакций ГЗТ. К этой категории гиперчувствительности, в частности, относят инфекционную аллергию на бактерии, вирусы и грибы; аллергию на антибиотики и химические вещества; воспалительные реакции при отторжении трансплантата. Механизм и общая характеристика реакций ГНТ. В основе возникновения реакций ГНТ лежит процесс взаимодействия между IgE и аллергеном. При этом нужно иметь в виду, что молекулы IgЕ фиксированы на тучных и других клетках тканей, базофилах крови, а у сенсибилизированных лиц (особей) они в большом количестве обнаруживаются в крови. В развитии ГНТ различают три фазы: иммунологическую, патохимическую и патофизиологическую. В иммунологической фазе аллерген реагирует с цитофильными и свободноплавающими в крови и межтканевой жидкости антителами. В патохим.ической. фазе, наступающей вслед за образованием иммунных комплексов на внешних мембранах туч»ых клеток и базофилов, высвобождаются биологически активные вещества, которые повышают проницаемость капилляров и слизистых оболочек, способствуют всасыванию аллергенов и развитию 6ыстрой воспалительной реакции. Реагирование аллергенов со свободноплавающими IgЕ (по старой терминологии - с анафилаксинами) сопровождается 6ыстрsм связыванием комплемента, изменением коллоидного состава и свертываемости крови. В патофизиологической фазе при различных реакциях ГНТ отмечаются отек слизистых оболочек, покраснение и зуд кожных покровов (крапивница, сенная лихорадка), удушье в результате спазма гладкой мускулатуры бронхов (астма), припухлость и болезненность суставов (сывороточная болезнь), другие местные воспалительные реакции, а при резких нарушениях деятельности сердечно-сосудистой системы -внезапно возникающий анафилактичесуий шок. Реакции ГНТ проявляются в ближайшие 15 -20 мин после воздействия специфического аллергена; вызываются аллергенами антигенной и неантигенной природы; являются следствием взаимодействия аллергенов с аллергическими антителами. Реакции передаются пассивным путем, посредством введения сывороток сенсибилизированных животных. В 6ольшинстве случаев состояние гиперчувствительности к аллергену можно легко снять путем десенси6илизации. Механизм и общая характеристика реакций ГЗТ. Реакции ГЗТ обусловлены взаимодействием Т-лимфоцитов с соответствующим аллергеном. В развитии ГЗТ выделяют те же три фазы реакции. В иммунологической фазе аллерген реагирует с неиммунными лимфоцитами, которые в результате бласттрансформации превращаются в зрелые эффекторные тимоциты, способные узнавать «свой» аллерген. В патохимической фазе сенсибилизированные лимфоциты выделяют лимфотоксины , факторы, которые обусловливают хемотаксис и усиливают фагоцитоз, защищают фагоциты от повреждения и ингибируют миграцию макрофагов и др. Патофизиологическая фаза проявляется выраженной реакцией воспаления в разных тканях и органах. Реакции ГЗТ развиваются в течение многих часов или нескольких суток после контакта с аллергеном; вызываются после длительного воздействия инфекционных аллергенов и химических веществ; протекают в самых разнообразных тканях с явлением,альтерации (повреждения) клеток сенсибилизированными лимфоцитами; пассивная передача сыворотками сенсибилизированных животных невозможна и достигается введением взвеси Т-лимфоцитов; десенсибилизировать ГЗТ, как правило, не удается. В заключение следует подчеркнуть, что провести резкую грань между реакциями ГНТ и ГЗТ невозможно. Вначале, по-видимому, формируется ГЗТ как Т-клеточная реакция организма на аллерген, а после выработки иммуноглобулинов проявляется в виде ГНТ. Возможно, обе реакции развиваются параллельно и независимо одна от другой. В ответ на повторное воздействие аллергена у разных животных возникает то ГНТ, то ГЗТ либо обе реакции гиперчувствительности одновременно. ПАТОГЕНЕЗ И ХАРАКТЕР ПРОЯВЛЕНИЯ АНАФИЛАКСИИ И ИНФЕКЦИОННОЙ АЛЛЕРГИИ В возникновении различных типов аллергий ведущее значение принадлежит индивидуальной иммунной реактивности организма человека Однако есть аллергии, доминирующую роль в развитии которых играет характер аллергена. К ним относят анафилактический шок и инфекционную аллергию. Анафилаксия. Анафилаксия (греч. aha - обратное и jilakziz -действие или беззащитность) представляет собой реакцию гиперчувствительности немедленного типа, которая чаще всего возникает при повторном парентеральном введении чужеродной сыворотки или пенициллина. Виды анафилаксии. По признаку генерализации различают общую и местную анафилаксии, а по способу приобретения - активную и пассивную. Общая анафилаксия проявляется как системная реакция, нарушающая жизнедеятельность всего организма, а местная - как локальная, ограниченная определенным участком кожи, ткани, органа. Активная анафилаксия является следствием выработки антител под влиянием аллергена, а пассивная - результатом пассивной передачи иммунных сывороток (иммуноглобулинов) от сенсибилизированных до норов. Характеристика и проявление анафилактического шока. Самой тяжелой формой о6щей анафилаксии является анафилактический шок. Легче всего его вызвать у морских свинок, сенсибилизируя их лошадиной сывороткой. Вводят ее подкожно, внутрибрюшинно, внутривенно. Отмечено, что сенсибилизация животных происходит тем быстрее, чем меньше доза антигена. Эффективным является даже 0,000001 мл сыворотки. Готовность животных отвечать анафилактическим шоком возникает спустя 9-12 дней инкубации и совпадает с моментом появления антител в крови. Реализуется шок при соблюдении двух условий: 1) повторная или разрешающая доза сыворотки должна превышать сенсибилизирующую в 10-100 раз и быть не меньше 0,1 мл; 2) для развития шока разрешающую дозу антигена необходимо вводить в кровоток (внутривенно или внутрисердечно). У морской свинки при возникновении анафилактического шока вначале появляются возбуждение, одышка, затрудненное дыхание, далее, после конвульсивных прыжков, животное падает и погибает, выделяя кал и мочу. При вскрытии павших животных отмечаются резкая эмфизема легких вследствие спазма гладкой мускулатуры бронхов, кровоизлияния в слизистые и серозные оболочки. У человека при возникновении анафилактического шока учащается пульс, повышается температура, возникает одышка, появляются судороги, отеки, боли в суставах, высыпания, резко нарушается деятельность сердечно-сосудистой системы. Смерть анафилаксии наступает редко. В патогенезе анафилактического шока различают обычные для аллергической реакции ГНТ три стадии. Местная анафилаксия возникает в коже, подкожной клетчатке и в органах при многократных инъекциях чужеродной сыворотки. При этом развивается гиперергическое воспаление с резко выраженным отеком и квоизлиянием в ткани, заканчивающееся их некрозом. Впервые активный тип гиперергической реакции с образованием глу6оких незаживающих язв в коже и подкожной клетчатке описал Н. Артюс у кроликов, которым 5-7 раз через 5 - 6 дней подкожно вводили лошадиную сыворотку. Феномен Артюса сравнительно легко передается пассивно путем парентерального введения сыворотки сенсибилизированного донора с последующей подкожной инъекцией реципиенту разрешающей дозы сыворотки. В основе развития местной анафилаксии лежит альтерация клеток иммунными преципитатами, связывающими комплемент. Пассивная анафилаксия - это передача интактному животному состояния анафилаксии посредством введения сыворотки сенсибилизированного донора. Сенсибилизированный реципиент через несколько часов после фиксации в его тканях антител приобретает способность реагировать на введение соответствующего аллергена анафилактический шоком или местной анафилаксией. Пассивно переданная гиперчувствительность к аллергену сохраняется в организме морской свинки от 3-4 недель до 2 месяцев и полностью исчезает после разрушения введенных антител. Инфекционная аллергия. Развитие инфекционной аллергии и природу ее иммунологической сущности описал Р. Кох. Повторно заражая морскую свинку микобактериями туберкулеза, он обнаружил необычно бурную на них реакцию больного животного. На месте подкожного введения суперинфицирующей дозы в считанные дни возникала язва и вместе с некротической тканью удалялись бактерии туберкулеза, что предупреждало их, распространение в регионарные лимфатические узлы и через кровь - во внутренние органы свинки. Подобное состояние гиперчувствительности характерно для многих инфекционных заболеваний, но интенсивность проявления этой аллергической реакции не имеет столь яркого характера, как при туберкулезе. Этот тип ГЗТ выявляют с помощью диагностических проб, в которых используются аллергены. Готовятся они из фильтратов бульонных культур, взвесей убитых микроорганизмов или их экстрактов. Вводят аллергены в организм человека накожно или внутрикожно. Накожныё пробы проводят с помощью скарификатора, которым через каплю аллергена, нанесенную в нижней трети предплечья, делают две параллельные поверхностные насечки кожи длиной 5 мм, избегая повреждения сосудов и появления крови. Внутрикожно аллерген вводится туберкулиновым шприцем в количестве 0,05-0,1 мл. Следует подчеркнуть, что скарификационные пробы более специфичны, чем внутрикожные, но последние во стократ чувствительнее первых. При положительных реакциях на месте введения аллергена спустя 24 - 48 ч возникает инфильтрат, состоящий преимущественно из лимфоцитов моноцитов и макрофагов, что визуально проявляется покраснением и припухлостью диаметром более 10 мм. Оценивая аллергические пробы, нео6ходимо учитывать возможность получения ложноположительных реакций у людей с повышенной чувствительностью кожи или же из-за из6ыточного введения аллергена и нарушения техники их производства. Положительные, но не диагностические аллергические пробы могут регистрироваться у привитых лиц (поствакцинальные), переболевших (анамнестические) или же у больных другим инфекционным заболеванием, возбудитель которого имеет сходные групповые аллергены. В о6щем говоря, положительные аллергические пробы свидетельствуют об инфицированности людей. С учетом этих оговорок они нашли широкое применение в экспресс-диагностике туберкулеза и микобактериозов, лепры, бруцеллеза, туляремии, сапа, актиномикоза, токсоплазмоза, дерматомикозов и др. ИММУНОПРОФИЛАКТИКА И ИММУНОТЕРАПИЯ ВАКЦИНЫ Вакцины - это биологические препараты, предназначенные для создания у людей, животных и птиц иммунитета к инфекционным заболеваниям или реже - к ядам. Имеются корпускулярные и некорпускулярные вакцины. Корпускулярные вакцины содержат аттенуированные (осла6ленные) или убитые микро6ы, некорпускулярные - продукты их химического расщепления (химические вакцины), о6езврежениые экзотоксины бактерий или яды животного и растительного происхождения (анатоксины). По числу антигенов, входящих в вакцину, различают моно- и поливакцины (ассоциированные), по видовому составу – бактериальные, риккетсиозные, вирусные. Живые вакцины - это, как правило, моновакцины. Одни из них содержат ослабленные бактерии (бруцеллезная, туляремийная, чумная, сибироязвенная, туберкулезная вакцины), другие - вирусы (против натуральной оспы, желтой лихорадки, 6ешенства, полиомиелита, кори, эпидемического паротита). Живые вакцины наиболее иммуногенны и обычно создают напряженный и длительный иммунитет, вследствие того, что измененные штаммы (мутанты) сохраняют свойство размножаться (репродуцироваться) в привитом организме, вызывая миниатюрную вакцинную инфекцию, сжатую в сроках течения и сглаженную по тяжести проявления. Например, противооспенная и туляремийная вакцины обеспечивают устойчивость на протяжении 5-7 лет. Исключение составляет, пожалуй, только антигриппозная вакцина, создающая выраженный иммунитет на 6-8месяцев. К недостаткам живых вакцин относится то, что они очень, реактогенны (энцефалитогенны), обладают аллерргическими свойствами, за счет остаточной вирулентности могут вызывать серьезные осложнения, вплоть до генерализации вакцинного процесса и развития менингоэнцефалита. Убитые вакцины (брюшнотифозная, паратифозная А и В, дизентерийная, холерная, коклюшная, лептоспирозная, сыпнотифозная, против гриппа, полиомиелита, клещевого энцефалита) используются в виде моно- и поливакцин. Некоторые из них (лептоспирозная, антигриппозная), лючающие несколько разновидностей (сероваров) возбудителя, называются поливалентными. Убитые вакцины слабоиммуногенны и создают непродолжительнЬш иммунитет сроком до года, по-видимому, потому, что в процессе их изготовления происходит денатурация антигенов. Химцческие вакцины - это препараты, состоящие из полных антигенов микробных культур и очищенные от балластных веществ. Применяются для профилактики брюшного тифа, паратифов А и В (вакцина TABte со столбнячным анатоксином), коклюша, туберкулеза. Разрабатывается метод получения вакцин из протективных антигенов и рибосом. Реактогенность хорошо очищенных вакцин незначительна. По профилактической эффективности химические вакцины превосходят убитые корпускулярные. Анатоксины (столбнячный, дифтерийный, гангренозные, ботулинический, стафилококковый) относительно мало реактогенны, создают напряженный и длительный иммунитет до 4-5 лет и более. В настоящее время в арсенале средств борьбы с инфекционными (заболеваниями насчитывается около 30 вакцинальных препаратов против бактериальных, вирусных, риккетсиозных инфекций. Общая характеристика вакцин будущего. Синтетические вакцины - безбалластные вакцины, содержащие естественные или искусственно синтезированные микробные (вирусные) протективные антигены, не обладающие побочным токсическим действием. Для усиления иммунного ответа они конъюгируются со специально подобранными Т-зависимыми носителями и введены в адъюванты (иммуномодуляторы), которые стимулируют образование высоких титров антител. Рекомбинантные вакцины - искусственно созданные вакцины, содержащие рекомбинантные вирусы или микробы-химеры, в геномы которых введены гены других микробных видов, кодирующие один или несколько специфических антигенов. Таким путем, в частности, уже создан, рекомбинантный вирус оспенной вакцины, синтезирующий поверхностный HBs-антиген вируса гепатита В; кодирующий гемагглютинин вирус гриппа А; гликопротеины вирусов простого герпеса и везикулярного стоматита. Экспрессия HBs-антигена осуществлена также в дрожжевых клетках, отличающихся необычайно высокой иммуногенностью и полной безвредностью. Цели применения. Вакцины предназначаются для создания активного индивидуального и коллективного иммунитета. Чаще всего они используются для профилактики инфекционных заболеваний, реже для лечения (гонококковая, стафилококковая, спиртовая дизентерийная вакцины, Vi - антиген брюшнотифозной палочки, бруцеллезная вакцина). Способы изготовления. Для получения вакцин применяют физические, химические, биологические факторы. Живые вакцины обычно получают, пассируя патогенные микробы через организм невосприимчивых животных, куриный эмбрион, культуры клеток, добиваясь резкого снижения вирулентности. Убитые бактериальные вакцины гртовят по методу Колле, для чего микробы выращивают на плотных средах, смывают, стандартизируют, обезвреживают нагреванием (гретые вакцины) или воздействием химических соединений (формолвакцины, фенолвакцины, ацетоновые и т. п.). Анатоксины получают по методу Рамона, который для детоксикации бактериальных экзотоксинов предложил прибавлять к ним 0,3-0,8 % формалина с последующим выдерживанием на протяжении 3-4 недель при температуре 37-42 "С. Пути введения вакцин. Вакцины вводят в организм накожно, внутрикожно, подкожно, через рот и нос. В последние годы широкое распространение получил метод массовой вакцинации с помощью безыгольных, инъекторов. С той же целью разрабатывается аэрогенный способ одновременной аппликации вакцины на слизистые оболочки верхних дыхательных путей, глаз и носоглотки. Схема вакцинации. Живые вакцины, кроме полиомиелитной, применяются однократно, убитые корпускулярные, химические вакцины и анатоксиньг вводятся два-три раза с интервалами от 7-10 до 25-40 дней. Ввиду того что многократная вакцинация не обеспечивает высокого охвата населения прививками, применяются депо-вакцины. В качестве депонирующих веществ используют минеральные коллоиды, чаще всего гели гидроксида или фосфата алюминия, масла, которые как адсорбенты обеспечивают постепенное длительное воздействие антигенов на организм, а некоторые на них, например сложные адъюванты типа Фрейнда, неспецифически стимулируют антителогенез. Плановые прививки. Вакцинацию проводят в плановом порядке и по эпидемическим показаниям (при возникновении заболеваний). Проведение прививок регулируется государственными законами и является общественной мерой борьбы с инфекциями. В настоящее время принят четкая программа иммунизации детей. На первом году жизни ребенка прививают против туберкулеза (в роддоме на 5-7-й день), полиомиелита (в 3 мес.), коклюша, дифтерии и столбняка (в 4 - 5 мес.), а по достиженм года иммунизируют антикоревой вакциной. ИММУННЫЕ СЫВОРОТКИ (ГАММА-ГЛОБУЛИНЫ) Сывотортка – жидкая часть крови, лишенная фибриогена. Она образуется при свертывании крови и отделении плазмы от сгустка и форменных элементов. Классификация. Сыворотки бывают нормальные и иммунные с повышенным титром иммуноглобулинов; гомологичные, полученные от человека, и гетерологичные, или чужеродные, полученные от специально иммунизированныx животных. Иммунные сыворотки по целевому назначению подразделяют на лечебно-профилактические и диагностические, а по характеру содержащихся в них антител - на антитоксические и антимикробные. Диагностические сыворотки, как уже было сказано, используются для идентификации патогенных микробов. С помощью лечебно-профилактических сывороток создается пассивный иммунитет. Надобность в нем возникает при инфицировании (серопрофилактика) или заболевании (серотерапия). Антитоксические сыворотки нейтрализуют бактериальные экзотоксины и применяются для лечения и профилактики токсинемических инфекций. К ним относятся противодифтерийная, противостолбнячная, антистафилококковая, против анаэробной инфекции, противоботулиническая сыворотки. Антимикробные сыворотки обезвреживают бактерии и вирусы. Лучшими из них являются вируснейтрализующие сыворотки, в частности антикоревая, противооспенная, антирабическая, противоэнцефалитная, противополиомиелитная и противогриппозная. Лечебно-профилактическая эффективность антибактериальных сывороток низка, они используются главным образом для профилактикй коклюша и лечения чумы, сибирской язвы, лептоспироза. Титрование антитоксических лечебных сывороток. Антитоксические сыворотки титруются в антитоксических или международных единицах (AЕ или МЕ). За 1 АЕ принимают минимальное количество сыворотки, предохраняющее определенный вид животных от гибели при заражений специально подобранной дозой токсина. Так, 1 АЕ антидифтерийной сыворотки - это наименьшее количество сыворотки, которое на протяжении 4 суток предохраняет от смерти морскую свинку массой 250 г, инфицированную 100 ДLМ дифтерийного токсина. Антибактериальные и антивирусные сыворотки не титруются и вводятся по клиническим показаниям в миллилитрах. При определении их лечебной дозы учитываются тяжесть, день заболевания и возраст больного. Методы получения сыворотки. Лечебные и профилактические гетерологичные сыворотки получают путем иммунизации лошадей, поскольку эти животные более реактогенны, чем другие, и дают большой выход антител. Кроме того, лошадиный белок наименее анафилактогенен. Для получения антитоксических сывороток лошадей вначале иммунизируют анатоксином, а после создания базисного иммунитета - возрастающим дозами токсина. Антибактериальные сыворотки получают путем введения животным убитых или живых микробов. Нередко для лечения и профилактики инфекционных болезней используются гомологичные сыворотки здоровых доноров, пере6олевших людей или препараты плацентарной крови. Гамма-глобулины. В целях концентрации иммуногло6улинов, снижения токсичности и уменьшения аллергического действия сыворотки освобождают от балластных белков. При этом используют методы фракционирования сывороток с помощью спирто-водных смесей при температуре 0 "С, ультрацентрифугирования, электрофореза, ферментативного гидролиза (метод диаферм). Очищенные и концентрированные препараты гамма-глобулиновой фракции сывороточных 6елков, содержащие высокие титры антител, называют иммуноглобулинами, а в практике - гамма-глобулинами. В сравнении с нативной сывороткой они более авидны, быстрее реагируют и прочно связываются с антигеном. Применение гамма-гло6улинов снизило количество и тяжесть осложнений, возникающих при введении гетерологичных сывороток. Важно и то, что современная технология изготовления человеческого гамма-глобулина гарантирует полную ги6ель вирусов гепатита. Способы введения. Сыворотки и гамма-гло6улины вводят в организм различными путями: подкожно, внутримышечно, внутривенно или в спинномозговой канал. После введения иммунной сыворотки пассивный иммунитет возникает спустя несколько часов и продолжается 8-15 дней. . Специфическая десенсибилизация (гипосенсибилизация) анафилаксий. У сенсибилизированных чужеродной сывороткой животных анафилактическое состояние сохраняется в течение многих месяцев, а у человека - практически всю жизнь. В целях предупреждения анафилаксий у человека А. М. Безредка предложил вводить сыворотку небольшими дозами многократно, постепенно связывая анафилактические антитела Этот способ профилактики анафилактического шока называют специфической десенсибилизацией. Проводя ее, предварительно определяют чувствительность организма к белку. С этой целью в сгибательную поверхность предплечья внутрикожно вводят 0,1 мл чужеродной сыворотки разведенной 1:100. При отрицательной реакции, проявляющейся с образованием папулы диаметром 9 мм с небольшим ободком покраснения, через 20-30 мин поочередно вводят 0,1 мл и 0,2 мл цельной сыворотки, а спустя 1 -1,5 ч всю остальную дозу. При положительной внутрикожной пробе с инфильтратом более 10 мм десенсибилизация вначале проводится разведенной 1:100 сывороткой в дозах 0,5, 1,0, 2,0, 5 мл с интервалами в 20 мин, а затем с теми же промежутками 3 раза цельной - 0,1, 0,2, оставшийся объем. Состояние десенсибилизации непродолжитёльно и через 5-14 дней вновь появляется исходная гиперчувствительность. Гомологичные сыворотки (сыворотки человека) анафилактических реакций не вызывают. При нео6ходимости лечебную дозу этих сывороток вводят одновременно. Так, гамма-глобулин из сыворотки человек для профилактики кори вводят внутримышечно в количествё 1,5-З мл. , Для лечения и профилактики инфекционных заболеваний сыворотки и гамма-глобулины должны вводиться как можно раньше после заражения или заболевания. Например, противостолбнячную сыворотку следует использовать в первые 12 ч от момента ранения, а противодифтерийную - не позднее 2-4 ч после постановки диагноза. СЕРОЛОГОЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ ИММУНИТЕТА Серологическими называют такие реакции, для постановки которых используют сыворотку (serum), содержащую антитела. Серологические реакции применяют: а) для идентификации микроорганизмов, токсинов, любого другого антигена с помощью известного антитела (иммунная диагностическая сыворотка); б) для определения природы антитела в сыворотке крови с помощью известного антигена (диагностикум). Основными серологическими реакциями являются реакции агглютинации, преципитации, связывания комплемента, иммунофлюоресценции, нейтрализации вирусов на культурах клеток, куриных эмбрионов и животных, реакция торможения гемагглютинации. Общие закономерности серологических реакций: 1) реакции ставятся in vitro; 2) проявляются при иммунологическом соответствии (гомологичности) антигена и антитела, в оптимальных температурных условиях и рН среды; 3) протекают в две фазы: а) взаимодействие антигена с антителом, или специфическая фаза; 6) образование видимого невооруженным глазом иммунного комплекса антитело-антиген, или неспецифическая фаза. Для определения родовой, видовой и типовой принадлежности микробов иммунные диагностические сыворотки получают путем многократного введения животным в нарастающих дозах убитых или живых микроорганизмов, продуктов их распада, токсинов и анатоксинов Иногда для активации антителообразования применяют адъюванты "как стимуляторы иммуногенеза. После определенного цикла иммунизации животных проводят пробное кровопускание и определяют титр антител. Если в сыворотке содержится достаточное количество антител, делают массивное кровопускание или тотальное обескровливание животного. Кровь, собранную в стерильную посуду, сначала помещают в термостат при температуре 37° С на 4-6 для ускорения свертывания, затем -на сутки в ледник. Полученную прозрачную сыворотку отсасывают в стерильную посуду, добавляют консерванты (мертиолат, хинозол), проверяют на стерильность и разливают в ампулы. К диагностическим сывороткам относятся: 1) агглютинирующие бактерии (корпускулы); 2) преципитирующие, предназначенные для выявления некорпускулярных антигенов; 3) гемолитическая, используемая в реакции связывания комплемента; 4) антитоксические и антивирусные, используемые для типирования токсинов и вирусов в реакции нейтрализации. Выпускают также люминесцентные сыворотки, иммуноглобулины которых метятся флюорохромами. Применяются они для ускоренной диагностики инфекционных болезней. В качестве антигенов в серологических реакциях используют взвеси живых и убитых бактерий, продукты их расщепления, токсины, экстракты тканей животных. РЕАКЦИЯ АГГЛЮТИНАЦИИ Агглютинацией называется склеивание бактерий при действии на нх специфических антител в присутствии электролита. Ее используют: 1) для определения вида и серовара выделенных бактерий (серотипаж); 2) для обнаружения антител в сыворотке крови больного (серодиагностика). Для постановки реакции агглютинации (РА) необходимы три компонента: антиген (агглютиноген), антитело (агглютинин) и электролит (изотонический раствор натрия хлорида). В качестве антигена в РА применяют взвеси живых и убитых бактерий (диагностикумы). Для получения агглютинирующих сывороток обычно иммунизируют кроликов. При этом им 5-7 раз подкожно, а затем внутривенно с интервалами 2-7 суток в возрастающих дозах вводят взвесь убитых, а в конце - 2-3 раза живых бактерий. Через неделю после иммунизации определяют титр сыворотки, или максимальное ее разведение, которое агглютинирует гомологичный микроорганизм. Если титр сыворотки недостаточен, иммунизацию продолжают. Полученные таким образом агглютинирующие сыворотки называются неадсорбированными, поскольку содержат групповые агглютинины и могут в небольших разведениях склеивать родственные в антигенном отношении бактерии. Поэтому для определения вида бактерий надо ставить развернутую реакцию с сывороткой, разведенной от 1:100 до ее титра. Сыворотка соответствует микроорганизму в том случае, если как минимум агглютинирует его до половины титра. Более достоверные результаты при определении вида или серовар бактерий дают адсорбированные (монорецепторные или типоспецифические) сыворотки , которые не имеют групповых агглютининов, вследствиечего нет необходимости разводить их. Реакцию агглютинации в нихставят на предметном стекле. Ориентировочная, или пластинчатая реакция агглютинации. Ориентировочную РА выполняют перед постановкой развернутой реакции для того, чтобы отобрать на среде агглютинирующиеся в сыворотке колонии бактерий (культуры) и исключить из дальнейших исследований неагглютинирующиеся. Ставят ее при комнатной температуре на предметном стекле (рис. 5, а). Для этого на его поверхность пастеровской пипеткой раздельно наносят 2-3 капли различных сывороток в разведениях 1:10-1:20 и каплю 0,5 % раствора хлорида натрия (контроль РА). В каждую каплю за исключением контрольной вносят подозрительные колонии (петлю культуры) и тщательно перемешивают до равн