Помощь по Теле2, тарифы, вопросы

Страница 38 из 91

ЧАСТНАЯ МЕДИЦИНСКАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ
ПАТОГЕННЫЕ КОККИ
К патогенным коккам, вызывающим разнообразные по своим клиническим проявлениям заболевания у человека, относятся: 1) стафилококки, 2) стрептококки, 3) пневмококки, 4) менингококки и 5) гонококки.
По тинкториальному признаку (окрашиваемости) их можно разделить на две подгруппы: грамположительные кокки (стафилококки, стрептококки и пневмококки), грамотрицательные кокки (менингококки и гонококки).
Характерной особенностью всех патогенных кокков является способность вызывать гнойные воспалительные процессы, почему их называют также пиогенными (гноеродными) кокками.
Наиболее резко и постоянно гноеродные свойства выражены у стафилококков.
СТАФИЛОКОККИ
Морфология и тинкториальные свойства. Стафилококки- Staphylococcus (впервые выделены Пастером в 1880 г.) имеют форму правильных шаров со средним диаметром 0,8-0,9 мк. В мазке из чистой культуры стафилококки располагаются в виде кучек и скоплений, напоминая гроздь винограда (рис. 60). В гною и другом патологическом материале нередко можно встретить единичных кокков, парных и даже короткие цепочки. Они хорошо красятся основными анилиновыми красками, грамположительны, спор, капсул не образуют, неподвижны.
Культуральные и биохимические свойства. Стафилококки хорошо растут на обычных питательных средах как в присутствии, так и в отсутствии свободного кислорода. Температурный оптимум 37°.

Рис. 60. Стафилококк (а) и стрептококк (б) в чистой культуре.

Рис. 61. Колонии стафилококка на мясопептонном агаре. Ув. 20.

Рис. 62. Посев уколом в желатину.

Отдельные колонии на поверхности агара представляют собой округлые диски средней величины, выпуклые, влажные, непрозрачные, гомогенной или мелкозернистой структуры (см. рис. 01). Цвет колоний зависит от пигмента, который вырабатывают стафилококки и может быть золотистым (Staphylococcus aureus), лимонно-желтым (Staphylococcus citreus) и белым (Staphylococcus albus). При посеве штрихом на скошенный агар образуется обильный рост стафилококка, пигментированный.
Пигменты стафилококка относятся к липохромам, нерастворимы в воде и окрашивают только культуру, но не питательную среду. Образование пигмента идет интенсивно, когда микроорганизмы выращиваются в присутствии кислорода, при комнатной температуре, на свету.
При посеве уколом в желатину на 2-3-й день роста на поверхности среды заметна зона разжижения. По мере разжижения культура падает на дно в виде хлопчатого осадка (рис. 62).
На бульоне стафилококки дают обильный рост. Через 24 часа пребывания в термостате бульон мутнеет, и на дне пробирки образуется осадок.
Стафилококки быстро створаживают молоко, сообщая ему кислую реакцию.
Ферментируют (без газа) лактозу, глюкозу, мальтозу, маннит. Способность расщеплять маннит обычно характеризует патогенные штаммы стафилококка.
Патогенные стафилококки на чашках с кровяным агаром образуют колонии, окруженные зоной гемолиза, и свертывают плазму цитратной крови.
Резистентность. Стафилококк относится к числу весьма стойких микробов. Температура 80° убивает его во влажном состоянии в течение 10 минут. Температуру 70° стафилококки выдерживают до 1 часа. Карболовая кислота (3-5% раствор) убивает их в течение 15- 30 минут. В гною стафилококк сохраняется длительное время.
Токсины, ферменты стафилококков, патогенность их для животных. Патогенные стафилококки продуцируют ряд токсинов и ферментов. Стафилококковый гемолихин растворяет эритроциты. Этот токсин термолабилен (разрушается при 55°), относится к экзотоксинам и при иммунизации им животных можно получить антитоксин. Фильтрат культур стафилококка обладает также некротическим и летальным действием. В настоящее время доказано, что гемолизин, некротоксин и летальный токсин являются составными частями единого стафилококкового экзотоксина. Эти токсины неотделимы друг от друга, и обнаружение одного из них служит доказательством патогенности выделенного стафилококка. Некоторые из гемолитических штаммов золотистого стафилококка вырабатывают энтеротоксин, вызывающий явления острого гастроэнтерита. В фильтратах культур стафилококка часто обнаруживается лейкоцидин - яд, разрушающий лейкоциты. Из ферментов патогенные стафилококки выделяют: 1) плазмокоагул а з у - свертывающую плазму, 2) фибринолизин - растворяющий сгустки фибрина, 3) гиалуронидазу - растворяющую гиалуроновую кислоту, вещество склеивающее элементы соединительной ткани, 4) пенициллиназу - инактивирующую пенициллин и 5) лецитиназу - образует зону помутнения вокруг колоний на желточно-солевом агаре (среда Чистовича).
Из лабораторных животных наиболее чувствительны к стафилококку кролики и в меньшей степени морские свинки и мыши. У кроликов при внутрикожном введении культуры появляется резко выраженный некроз, при подкожном - развиваются абсцессы, а заражение высоковирулентными штаммами стафилококка приводит к сепсису и гибели животных. К стафилококковому энтеротоксину наиболее чувствительны котята-сосунки и молодые мыши.
Классификация стафилококков. Старая классификация стафилококков по выделяемому ими пигменту (золотистый, белый и лимонно-желтый) не дает возможности правильно определить их патогенность. Поэтому в настоящее время считают наиболее верной классификацию стафилококков, предложенную Гроссом. Согласно этой классификации, все стафилококки разделяются на три группы: патогенные, слабопатогенные и непатогенные.
Первая группа - патогенные стафилококки:
а) на чашках с 5% кровяным агаром образуют четкую зону гемолиза;
б) при внутрикожном введении кролику вызывают явления резко выраженного некроза, заканчивающегося иногда смертью животного;
в) продуцируют фермент плазмокоагулазу, вызывающую свертывание плазмы в течение 2 часов;
г) выделяются главным образом от больных сепсисом или острой гнойной инфекцией.
Вторая группа - слабопатогенные стафилококки:
а) на чашках с кровяным агаром образуют зону слабовыраженного неполного гемолиза;
б) при внутрикожном введении кролику вызывают в месте введения покраснение кожи, иногда инфильтрат, чаще без явлений некроза;
в) при посеве в цитратную плазму вызывают свертывание в течение 6 часов и позже;
г) выделяются с поверхности кожи при фолликулите, со слизистых оболочек при катаре верхних дыхательных путей, с поверхности ран, но не из глубины их.
Третья группа - непатогенные стафилококки:
а) на чашках с кровяным агаром гемолиз не обнаруживается;
б) при внутрикожном введении кролику явления некроза и инфильтрата не отмечаются, в отдельных случаях появляется покраснение кожи;
в) реакция плазмокоагуляции отрицательная;
г) обнаруживаются постоянно на здоровой коже, на слизистых оболочках зева, носа и в воздухе.
Патогенез и заболевания у человека. Стафилококки являются очень распространенными микробами. Их находят в воздухе, воде и почве, у человека - почти постоянно на коже и слизистых оболочках. Этим объясняется тот факт, что стафилококк является наиболее частым возбудителем всевозможных нагноений. Повреждение кожи и слизистых оболочек или понижение их резистентности открывает «ворота» для стафилококковой инфекции.
Чаще всего поражается кожа. Стафилококки являются возбудителями фурункулов - гнойного воспаления волосяных мешочков. Если фурункулы приобретают множественный характер, заболевание называется фурункулезом. Когда несколько фурункулов сливаются вместе, образуя более обширный гнойный инфильтрат, возникает карбункул.
Стафилококки встречаются при абсцессах (гнойниках), в гноящихся ранах, при катарах слизистых оболочек, септицемии и септикопиемии (сепсис с образованием гнойных очагов во внутренних органах). Энтеротоксические штаммы золотистого стафилококка могут вызывать пищевые отравления. Последние наблюдаются в результате употребления зараженного стафилококком молока и других молочных продуктов, пирожных с кремом и т. д., так как в этих продуктах стафилококк находит оптимальные условия для своего размножения. В молоко патогенные стафилококки могут попасть или от коров, больных маститом, или с рук доярок, страдающих пиодермией.
Иммунитет. Врожденного иммунитета к стафилококку у людей не существует. Однако человек обладает значительной устойчивостью к этому микроорганизму, что объясняется защитной ролью кожи и наличием в крови антител.
По-видимому, может иметь место приобретенный иммунитет, о чем свидетельствует повышение титра антител у больных и переболевших. Однако этот иммунитет нестоек. Более того, отмечено, что у многих людей, перенесших фурункулез, возникает повышенная восприимчивость к стафилококку.
Сопротивляемость к стафилококку может ослабляться вследствие разных причин - диабета, травмы, истощающих заболеваний и т. д.
Микробиологическая диагностика. Исследование гноя. Чаще всего материалом для микробиологического исследования служит гной. Для этой цели при открытых поражениях после предварительного очищения раневой поверхности стерильным ватным тампоном достают отделяемое из более глубоких частей раны. При закрытых процессах (фурункул, абсцесс) с этой же целью после дезинфекции кожи производится пункция очага нагноения стерильным шприцем. Из полученного гноя делают мазки, окрашивают синью и по Граму и микроскопируют.
По расположению кокков и тинкториальным свойствам трудно дифференцировать стафилококки и стрептококки, поэтому переходят к бактериологическому исследованию, т. е. к посеву гноя на чашки с простым, кровяным агаром, на желточно-солевой агар (см. раздел «Санитарная микробиология» стр. 454) и на среду обогащения (сахарный бульон). Засеянные чашки, перевернув вверх дном, и бульон ставят в термостат при 37° на 1-2 суток.
На чашках с кровяным агаром колонии образуют зоны гемолиза, диаметр которых часто в несколько раз превышает диаметр колонии. Эти прозрачные бесцветные зоны гемолиза образовались вследствие растворения эритроцитов, вызванного гемотоксином стафилококка. На чашках с желточно-солевым агаром патогенные стафилококки вырастают с образованием золотистого пигмента и зоной помутнения - в виде радужного венчика вокруг колонии. С одной из колоний готовят препарат, окрашивают по Граму и микроскопируют. Обнаружение в препарате грамположительных кокков, расположенных в виде гроздей винограда, дает право выдать ориентировочный положительный результат. Затем остаток колонии пересевают на скошенный агар для получения чистой культуры. Необходимо дифференцировать патогенный стафилококк от непатогенного, т. е. изучить рост на кровяном агаре, желточно-солевом агаре, посеять в нитратную плазму и определить токсигенность на животных.
Проба на плазмокоагуляцию. Для реакции плазмокоагуляции Г. В. Выгодчиков рекомендует следующую методику. У кролика берут 10 мл крови из сердца, помещают в пробирку с 1 мл 5% раствора лимоннокислого натрия. Кровь центрифугируют и отсасывают плазму. Полученную плазму перед опытом разводят физиологическим раствором 1:4 и разливают в стерильные пробирки по 0,5 мл. Колонии стафилококков засевают петлей в пробирки с нитратной кроличьей плазмой, ставят в термостат при 37° и проверяют свертывание плазмы каждые 2-3 часа. Патогенные стафилококки коагулируют плазму в течение 2-10 часов чаще всего в течение 4 часов.
Проба на токсигенность. Токсигенность стафилококковых культур определяется опытом на кроликах, а энтеротоксин - на котятах-сосунках. Из туры стафилококка на скошенном агаре приготовляют взвесь микробов в физиологическом растворе и устанавливают по оптическому стандарту с расчетом 2 млрд. микробных тел в 1 мл взвеси. На боку или спине у кролика выщипывают шерсть и внутрикожно вводят животному по 0,2 мл микробной взвеси. При положительной реакции на месте инъекции образуется инфильтрат, а затем и некроз.
Для обнаружения летального токсина кролику внутривенно вводят фильтрат бульонной культуры стафилококка из расчета 0,75 мл на 1 кг веса. Смерть животного наступает через 15 минут.
Для определения энтеротоксина котят 1,5-2-месячною возраста (весом 400 г) вскармливают исходным зараженным продуктом или молочной культурой стафилококка. Признаки отравления (понос, иногда рвота) наступают через 30-60 минут. Наблюдение ведут 4- 6 часов, и если за это время у котят не будет никакой реакции, биологическая проба считается отрицательной.
Исследование крови. При подозрении на сепсис у больного из локтевой вены стерильно с помощью шприца берут 10 мл крови и засевают в 100-200 мл сахарного бульона. Посев ставят для обогащения на 24-48 часов в термостат. В положительном случае среда мутнеет, а в мазках из нее обнаруживаются грамположительные кокки, имеющие характерную форму и расположение. Из бульона делают пересев в чашку с кровяным агаром и дальнейшее исследование ведут так, как описано выше. Бульон выдерживают в термостате 10 суток, производя каждые 2 дня высев на 5% кровяной агар.
Исследование других материалов. При исследовании материалов, загрязненных большим количеством посторонних микробов (испражнения, мокрота), рекомендуется применять агар с 7,5% хлорида натрия, к которому добавляют 10% теплого снятого молока (среда Петрович). На таком агаре рост посторонней микрофлоры значительно подавляется.
Фаготипирование. При фаготипировании используют набор типовых стафилококковых фагов, состоящих из 21 фага, разделенных на четыре группы. Каждый типовой фаг способен размножаться только на соответствующем ему штамме стафилококка. Фаготипирование стафилококков имеет особое значение при са-
санитарно-бактериологическом исследовании пищевых продуктов для выявления источника инфекции и установления эпидемических связей.
Специфическая терапия и химиотерапия. Стафилококковая вакцина широко применяется для лечения рецидивирующих и хронических инфекций, например, при фурункулезе. Для профилактики этих заболеваний применяется анатоксин.
При лечении стафилококковых инфекций с успехом используют также химиотерапевтические препараты сульфаниламидного ряда (норсульфазол, сульфодимезин и др.), антибиотики (пенициллин в больших дозах, эритромицин, оксациллин и др.), стафилококковый бактериофаг (при поражениях кожи). При тяжелых стафилококковых сепсисах рекомендуются гипериммунная антистафилококковая плазма и гамма-глобулин, получаемые от доноров, иммунизированных анатоксином.

Таксономия: относятся к от­делу Firmicutes, семейству Мicrococcacae, роду Staphylococcus. К данному роду относятся 3 вида: S.aureus, S.epidermidis и S.saprophyticus.

Морфологические свойства: Все виды стафилококков представляют собой округлые клетки. В мазке располагаются не­симметричными гроздьями. Клеточная стенка содержит большое количество пептидогликана, связанных с ним тейхоевых кислот, протеин А. Грамположительны. Спор не образуют, жгутиков не имеют. У некото­рых штаммов можно обнаружить капсулу. Могут образовывать L-формы.

Культуральные свойства : Стафилококки - факультативные анаэробы. Хорошо растут на простых средах. На плотных средах образуют гладкие, выпуклые колонии с различным пигментом, не име­ющим таксономического значения. Могут расти на агаре с высоким содержанием NaCl. Обладают сахаролитическими и протеолитическими ферментами. Стафилококки могут вырабатывать гемолизины, фибринолизин, фосфатазу, лактамазу, бактериоцины, энтеротоксины, коагулазу.

Стафилококки пластичны, быстро приобретают устой­чивость к антибактериальным препаратам. Существенную роль в этом играют плазмиды, передающиеся с помощью трансдуцирующих фагов от одной клетки к другой. R-плазмиды детерми­нируют устойчивость к одному или нескольким антибиотикам, за счет продукции в-лактамазы.

Антигенная структура . Около 30 антигенов, представляющих собой белки, полисахариды и тейхоевые кислоты. В составе клеточной стенки стафилококка содержится протеин А, который может прочно связываться с Fc-фрагментом молекулы иммуноглобулина, при этом Fab-фрагмент оста­ется свободным и может соединяться со специфическим анти­геном. Чувствительность к бактериофагам (фаготип) обусловлена повер­хностными рецепторами. Многие штаммы стафилококков явля­ются лизогенными (образование некоторых токсинов происхо­дит с участием профага).

Факторы патогенности: Условно – патогенные. Микрокапсула защищает от фагоцитоза, способствует адгезии микробов; компоненты клеточной стенки – стимулируют развитие воспалительных процессов. Ферменты агрессии: каталаза – защищает бактерии от действия фагоцитов, в-лактамаза – разрушает молекулы антибиотиков.

Резистентность. Устойчивость в окружа­ющей среде и чувствительность к дезинфектантам обычная.

Патогенез. Источником инфекции стафилококков - человек и некоторые виды животных (больные или но­сители). Механизмы передачи - респираторный, контактно-бы­товой, алиментарный.

Иммунитет: П остинфекционный – клеточно-гуморальный, нестойкий, ненажряженный.

Клиника. Около 120 клинических форм прояв­ления, которые имеют местный, системный или генерализованный характер. К ним относятся гной­но-воспалительные болезни кожи и мягких тканей (фурункулы, абсцессы), поражения глаз, уха, носоглот­ки, урогенитального тракта, пищеварительной системы (инток­сикации).

Микробиологическая диагностика . Материал для исследования – гной, кровь, моча, мокрота, испражнения.

Бактериоскопический метод: из исследуемого материала (кроме крови) готовят мазки, окрашивают по Граму. Наличие грам «+» гроздевидных кокков, располагающихся в виде скоплений.

Бактериологический метод: Материал засевают петлей на чашки с кровяным и желточно-солевым агаром для получения изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37С в течении суток. На следующий день исследуют выросшие колонии на обеих средах. На кровяном агаре отмечают наличие или отсутствие гемолиза. На ЖСА S. aureus образует золотистые круглые выпуклые непрозрачные колонии. Вокруг колоний стафилококков, обладающих лецитиназной активностью, образуются зоны помутнения с перламут­ровым оттенком. Для окончательного установления вида ста­филококка 2-3 колонии пересевают в пробирки со скошенным питательным агаром для получения чистых культур с последую­щим определением их дифференциальных признаков. S.aureus – «+»: образование плазмокоагулазы, летициназы. Ферментация:глк, миннита, образование а-токсина.

Для установления источника госпитальной инфекции выде­ляют чистые культуры стафилококка от больных и бактерионо­сителей, после чего проводят их фаготипирование с помощью набора типовых стафилофагов. Фаги разводят до титра, указан­ного на этикетке. Каждую из исследуемых культур засевают на питательный агар в чашку Петри газоном, высушивают, а за­тем петлей каплю соответствующего фага наносят на квадраты (по числу фагов, входящих в набор), предварительно разме­ченные карандашом на дне чашки Петри. Посевы инкубируют при 37 °С. Результаты оценивают на следующий день по нали­чию лизиса культуры.

Серологический метод: в случаях хронической инфекции, определяют титр анти-а-токсина в сыворотке крови больных. Определяют титр АТ к риботейхоевой кислоте(компонент клеточной стенки).

Лечение и профилактика . Антибиотики широкого спектра действия (пенициллины, устойчивые к в-лактамазе). В случае тяжелых стафилококковых инфекций, не поддающихся лечению антибиотиками, может быть использована антитокси­ческая противостафилококковая плазма или иммуноглобулин, иммунизи­рованный адсорбированным стафилококковым анатоксином. Выявление, лечение больных; проведение планового обследования медперсонала, вакцинация стафилококковым анатоксином.

Стафилококковый анатоксин: получают из нативного анатоксина путем осаждения трихлоруксусной кислотой и адсорбцией на гидрате оксида алюминия.

Стафилококковая вакцина: взвесь коагулазоположительных стафилококков, инактивированных нагреванием. Применяют для лечения длительно текущих заболеваний.

Иммуноглобулин человеческий противостафилококковый : гамма-глобулиновая фракция сыворотки крови, содержит стафилококковый анатоксин. Готовят из человеч. крови, с высоким содержанием антител. Применяется для специфического лечения.

56. Типы и механизмы питания бактерий.

Типы питания. Микроорганизмы нуждают­ся в углеводе, азоте, сере, фосфоре, калии и других элементах. В зависимости от источников углерода для питания бактерии делятся на аутотрофы , использующие для построения своих клеток диоксид углерода С0 2 и другие неорганические соединения, и гетеротрофы , питающиеся за счет готовых органических соединений. Аутотрофными бактериями являются нитрифицирующие бактерии, находящиеся в почве; серобактерии, обитающие в воде с сероводородом; железобак­терии, живущие в воде с закисным железом, и др.

В зависимости от окисляемого субстрата , называемого доно­ром электронов или водорода, микроорганизмы делят на две группы. Микроорганизмы, использующие в качестве доноров во­дорода неорганические соединения, называют литотрофными (от греч. lithos - камень), а микроорганизмы, использую­щие в качестве доноров водорода органические соединения, - органотрофами.

Учитывая источник энергии , среди бактерий различают фототрофы, т.е. фотосинтезирующие (например, сине-зеленые во­доросли, использующие энергию света), и хемотрофы, нуж­дающиеся в химических источниках энергии.

Механизмы питания. Поступление различных веществ в бак­териальную клетку зависит от величины и растворимости их мо­лекул в липидах или воде, рН среды, концентрации веществ, различных факторов проницаемости мембран и др. Клеточная стенка пропускает небольшие молекулы и ионы, задерживая мак­ромолекулы массой более 600 Д. Основным регулятором поступ­ления веществ в клетку является цитоплазматическая мембрана. Условно можно выделить четыре механизма проникновения пи­тательных веществ в бактериальную клетку : это простая диффу­зия, облегченная диффузия, активный транспорт, транслокация групп.

Наиболее простой механизм поступления веществ в клетку - простая диффузия , при которой перемещение веществ про­исходит вследствие разницы их концентрации по обе стороны цитоплазматической мембраны. Вещества проходят через липид-ную часть цитоплазматической мембраны (органические молеку­лы, лекарственные препараты) и реже по заполненным водой каналам в цитоплазматической мембране. Пассивная диффузия осуществляется без затраты энергии.

Облегченная диффузия происходит также в результате разницы концентрации веществ по обе стороны цитоплазмати­ческой мембраны. Однако этот процесс осуществляется с помо­щью молекул-переносчиков, локализующихся в цитоплазматичес­кой мембране и обладающих специфичностью. Каждый перенос­чик транспортирует через мембрану соответствующее вещество или передает другому компоненту цитоплазматической мембра­ны - собственно переносчику. Белками-переносчиками могут быть пермеазы, место синтеза которых - цитоплазматичес­кая мембрана. Облегченная диффузия протекает без затраты энер­гии, вещества перемещаются от более высокой концентрации к более низкой.

Активный транспорт происходит с помощью пермеаз и направлен на перенос веществ от меньшей концентрации в сто­рону большей, т.е. как бы против течения, поэтому данный про цесс сопровождается затратой метаболической энергии (АТФ), образующейся в результате окислительно-восстановительных ре­акций в клетке.

Перенос (транслокация) групп сходен с активным транспортом, отличаясь тем, что переносимая молекула видо­изменяется в процессе переноса, например фосфорилируется.

Выход веществ из клетки осуществляется за счет диффузии и при участии транспортных систем.

Staphylococcus aureus

Staphylococcus aureus - факультативно анаэробные грамположительные кокки, неподвижные, каталазо- и коагулазоположительные. Некоторые штаммы S. aureus продуцируют стафилококковые энтеротоксины (SEs), вызывающие пищевые отравления. Стафилококки присутствуют в воздухе, пыли, сточных водах, воде, молоке, продуктах питания, а также на оборудовании пищевых производств, на различных поверхностях в окружающей среде, на кожных покровах людей и животных. Именно люди и животные являются основным резервуаром инфекции. Стафилококки присутствуют в полостях носа, и горле, а также на волосах и кожном покрове по крайней мере у 50% здоровых людей. Staphylococcus aureus способен расти в широком диапазоне температур от 7 до 48,5°С (оптимум 30 - 37°С); рН 4,2 - 9,3 (оптимум рН 7,0-7,5) и при высокой концентрации хлорида натрия (до 15% NaCl). Такие свойства позволяют бактериям заселять самые разнообразные продукты. Продукты, наиболее часто являющиеся причиной стафилококковых пищевых отравлений - это мясо и мясопродукты, мясо птицы, яйца, салаты (содержащие яйцо, тунец, курицу, картофель, макароны), кондитерские изделия (например, пирожки с кремом, шоколадные эклеры), начинка сэндвичей, молоко и молочные продукты. Таким образом, продукты, которые в процессе приготовления значительное время обрабатыватся вручную и впоследствии хранятся в тепле, могут быть реальным источником стафилококковых пищевых отравлений.

Интоксикация при стафилококковой инфекции

Причиной болезни являются продуцируемые Staphylococcus aureus токсины, поэтому заболевание характеризуется очень коротким инкубационным периодом - обычно от 0,5 до 6 часов. Восприимчивость больного к токсинам определяется состоянием больного, концентрацией токсина и количеством съеденного зараженного продукта. Инфекционная доза может быть менее 1,0 мкг, что соответствует примерно 100.000 КОЕ/г продукта. Наиболее распространенными симптомами заболевания являются тошнота, рвота, отвращение к пищи, спазмы в животе и диарея. Период реабилитации занимает, как правило, 1-3 дня, но в тяжелых случаях полное восстановление может занять больше времени. Болезнь не передается окружающим, больным необходимо принимать большое количества жидкости.

Патогенность, масштабы заболевания

Коагулозоположитепльные стафилококки - это грамположительные каталазоположительные микроорганизмы, которые образуют типичные колонии на селективно-диагностической питательной среде, дающие положительную реакцию на коагулазу (S. аureus; S. aureus spp. anaerobius) или специфическую для кроличьей плазмы реакцию на агаре с кроличьей плазмой и фибриногеном при определении стандартным методом. Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк) - это коагулозоположительные стафилококки, образующие ацетоин и ферментирующие мальтозу в аэробных условиях в процессе определения этих биохимических тестов стандартным методом.

Согласно недавним исследованиям в развитых странах из всех известных инфекций чаще всего к смерти приводит одна из самых известных, «обыкновенных» бактерий - Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк; все штаммы стафилококков, продуцирующие коагулазу, называют золотистыми ). Этот условно-патогенный микроорганизм выделяют у 15-30% здоровых людей, причем носительство у большинства из них ограничено несколькими месяцами. При дефиците иммунитета у больного возбудитель является причиной многочисленных, опасных для жизни зооантропонозных инфекций. Самая распространенная токсическая стафилококковая болезнь - это пищевое отравление. Многие штаммы золотистого стафилококка продуцируют энтеротоксин. Этот яд вызывает диарею, рвоту, боли и спазмы в животе. Согласно проведенного в Новой Зеландии исследования 8,6% детей, госпитализированных с сепсисом, вызванным Staphylococcus aureus, умирают. Дерматовенерологи многих стран обеспокоены увеличением количества стафилококковых инфекций и смертельных случаев из-за стафилококка. Бактерии вызывают порчу пищевых продуктов, включая и так называемые «непортящиеся» продукты. Размножаясь, например, в твердом сыре и салями, бактерии выделяют токсины. Именно они являются наиболее частой причиной серьезных пищевых отравлений. При кулинарной обработке стафилококк гибнет, но его термостабильные токсины не разрушаются. Стафилококки являются причиной множества болезней человека, включая сердечные (эндокардит и перикардит), опорно-двигательного аппарата (остеомиелит и инфекционный артрит). На коже и в мягких тканях стафилококк вызывает так называемый синдром шелушащейся кожи и целлюлиты , являющиеся наиболее частыми инфекционными болезнями кожи. По данным ВОЗ золотистый стафилококк возглавляет список бактерий, которыми наиболее часто заражаются в медицинских учреждениях. Высок риск инфицирования стафилококком при использовании внутривенных катетеров и других медицинских устройств, контактирующих с внутренней средой организма. Фактором риска является и искусственная вентиляция легких. Инфицирование стафилококком может также происходить при нарушении обычных правил гигиены в больницах. Всего на S. аureus приходится около 30% всех «госпитальных инфекций». Стафилококки, выжившие в условиях постоянного применения дезинфицирующих средств и использования антибиотиков - серьезнейший фактор риска для персонала, основа госпитальной инфекции.

Таксономия

Стафилококки - род шаровидных неподвижных аспорогенных грамположительных хемоорганотрофных факультативно-анаэробных или аэробных бактерий из семейства Micrococcaceae. В роду Staphylococcus выделяют около 30 видов, при этом 14 обнаружены на коже и слизистой человека, включая S. aureus , S. epidermidis, S. saprophyticus . Для видовой идентификации используют, в основном, 3 теста: продукцию плазмокоагулазы, анаэробную ферментацию маннита и глюкозы. Антигенная структура бактерии сложная, видоспецифичными антигенами являются тейховые кислоты.

Морфология бактерий и колоний

Бактериальные клетки диаметром 0,5-1,5 мкм делятся в нескольких плоскостях несимметрично, образуя скопления, напоминающие гроздья винограда. Встречаются одиночные клетки, пары и тетрады. Клеточная стенка содержит пептидогликан и глицеринтейховую кислоту. Стафилококки формируют гладкие колонии, окрашенные каротиноидами в желтый или оранжевый цвета. Однако пигментирование не является видовым признаком. При росте на желточно-солевом агаре образуются мутные круглые ровные колонии кремового, желтого или оранжевого цвета. При культивировании в жидких средах бактерии вызывают их равномерное помутнение, а затем образование рыхлого осадка, превращающегося в тягучую массу.

Физиолого-биохимическая характеристика

Стафилококки - факультативные анаэробы, но быстро и обильно растут при наличии кислорода. Хемоорганотрофы с окислительным и ферментатиывным метболизмом. Биохимичесчки очень активны. Продуцируют каталазу, на среде с глюкозой в анаэробных условиях большинство штаммов образуют ацетоин (положительная реакция Фогеса-Проскауэра). Выделяют аммиак при росте на аргениновом бульоне, восстанавливают нитраты до нитритов или молекулярного азота, активно гидролизуют белки, в аэробных условиях расщепляют многие углеводы до уксусной кислоты и углекислого газа. Родовым признаком является ферментация глюкозы в анаэробных условиях, что отличает стафилококки от микрокков. Бактерии растут на основных средах при 37°С (оптимум 35-40°С), но могут расти и в более широком интервале температур (6,5÷46°С). Оптимум роста отмечен при рН 7,0-7,5, но возможен рост в диапазоне рН=4,2÷9,3. Хорошо выдерживают повышенное осмотическое давление, поэтому элективным субстратом для них служат среды с высокой концентрацией хлорида натрия - желточно-солевой или молочно-солевой агар. Стафилококки хорошо переносят высушивание, сохраняя при этом вирулентность; погибают при прямом воздействии солнечного света в течение 10-12 часов. Довольно устойчивы к нагреванию: при 70-80 о С погибают за 20-30 мин, при 150 о С - за 10 мин; сухой жар убивает их за 2 часа. Бактерии устойчивы к действию низких температур, повторное замораживание и оттаивание их не убивает. Менее устойчивы стафилококки к действию дезинфектантов (перекиси водорода и др.), но резистентны к воздействию чистого этанола. При выращивании в аэробных условиях бактерии нуждаются в аминокислотах и витаминах, в анаэробных - требуют дополнительно урацил и дополнительные источники углерода. На кровяном агаре могут образовывать несколько видов гемолизинов - веществ, поражающих эритроциты, лейкоциты и другие клетки. Продуцируют также фибринолизин, фосфатазу, бактериоцины; отдельные штаммы продуцируют коагулазу, ДНК-азу, H 2 S и энтеротоксины (до 10 видов, характеризующихся летальным, гемолитическим или некротическим действием). Ферментируют некоторые углеводы с выделением кислоты без газа. Устойчивы к лизоциму, чувствительны к различным антибиотикам. Патогенные для человека виды обладают одним из 4 факторов токсичности, таким как: 1) экзотоксин, 2) энтеротоксин, 3) лейкоцидин, 4) коагулаза (фермент патогенности). Кросс-резистентность к антибиотикам контролируется R-плазмидой. Другим прокариотамэтот фактор устойчивостипередается трансдукцией.

Источники и факторы передачи инфекции

Стафилококки - условно патогенные микробы. Являются представителями нормальной микрофлоры человека и животных - густо колонизируют различные биотопы организма (кожу, слизистую носа и зева ротовой полости, брюшную полость и подмышечные области). Стафилококки внедряются в организм через кожные покровы и слизистые оболочки воздушно-капельным и воздушно-пылевым путем. Механизм инфицирования обычно связан с переносом возбудителя из участков колонизации на травматизированную поверхность (например, кожные покровы). Существенную роль играют также тесные контакты с носителями и лицами, страдающими стафилококковыми поражениями. Стафилококк устойчив ко многим внешним воздействиям, поэтому обнаруживается во внешней среде - воздухе (пыль), почве, на предметах обихода. Источники и факторы передачи стафилококковой инфекции множественные. Основные источники - больные со стертыми формами стафилококковой инфекции или носители, реже - заболевшие животные, например, (при пищевых стафилококковых отравлениях и энтероколитах) больные маститом коровы. Наибольшую эпидемиологическую опасность представляет медицинский персонал, который может являться носителем госпитальных штаммов стафилококка. Для стафилококковой инфекции характерна множественность механизмов, путей и факторов передачи. Бактерии могут передаваться контактно через нестерильный медицинский инструмент, руки медперсонала, алиментарно с молочными продуктами и кондитерскими изделиями, аэрогенно и парентерально (при инъекциях).

Патогенез

Восприимчивость к стафилококкам очень низкая у лиц с нормальным иммунным статусом и повышенная у иммунокомпромиссных хозяев. Очень часто стафилококковая инфекция развивается на фоне вторичных иммунодефицитов. Факторами патогенности возбудителя является микрокапсула, компоненты клеточной стенки, ферменты агрессии и токсины. Микрокапсула защищает бактерии от фагоцитоза, способствует адгезии микробов и их распространению по тканям. При выращивании in vitro она не образуется. Компоненты клеточной стенки стимулируют развитие воспалительных реакций и нейтрализуют иммуноглобулины, обездвиживают фагоциты. Тейховые кислоты запускают каскад комплимента (компонента иммунологических реакций) по альтернативному пути. Фермент агрессии стафилококков коагулаза существует в трех антигенных формах и вызывает свертывание сыворотки крови. При целом ряде патологических состояний организма стафилококки покидают свои обычные биотопы, преодолевают тканевые барьеры и привносятся кровотоком во внутреннюю стерильную среду организма. Там они вызывают типовую патологическую реакцию - воспаление. Оно проявляется в форме гнойно-воспалительных процессов различной локализации и степени тяжести, вплоть до сепсиса и септикопиемии. Стафилококки являются этиологическим фактором заболеваний, подавляющее большинство которых носят гнойно-воспалительный характер. Бактерии способны поражать практически любые ткани организма. Вызываемые S. aureus инфекции разнообразны и включают более 100 нозологических форм, в числе которых болезни: 1) кожи и подкожной клетчатки (абцессы, панариции, фурункулез и др.), 2) органов дыхания (ангина, плеврит, пневмония и др.), 3) нервной системы и органов чувств (менингит, отит, коньюктивит и др.), 4) органов пищеварения (стоматит, перетонит, энтерит, энтероколит, пищевая интоксикация и др.), 5) костно-мышечной системы и соединительной ткани (артриты, остеомиелит), 6) кровообращения (эндокардит, флебит и др.), 7) мочеполовых органов (цистит, мастит и др.), 8) стафилококковый сепсис . Эти заболевания могут протекать остро или хронически. Пищевые отравления клинически проявляются в форме рвоты и водянистой диареи уже через 2-6 ч после употребления в пищу инфицированных продуктов - кондитерских изделий с кремом, консервов, мясных и овощных салатов и т.д.

Методы обнаружения

На селективных дифференциальных средах вырастают, как правило, только колонии стафилококков. Предположить стафилококковую этиологию заболевания позволяет выделение стафилококка в чистой культуре. Биоматериал для исследования выбирается в зависимости от клинической картины болезни. У штаммов S. aureus, выделенных при пищевой стафилококковой интоксикации, определяют наличие энтеротоксинов в биологических и иммунологических тестах. Традиционными методами предварительные результаты по идентификации стафилококковой инфекции можно получить через 1-2 суток.

Классический метод

Метод обнаружения S. aureus основан на высеве навески продукта и/или разведений его навески в жидкую селективную среду, инкубировании посевов, пересеве культуральной жидкости на поверхность агаризованной селективно-диагностической среды, подтверждении по биохимическим признакам принадлежности выделенных типичных и/или атипичных колоний к S. aureus.

№ 7 Стафилококки. Таксономия. Характеристика. Микроби­ологическая диагностика заболеваний, вызываемых ста­филококками. Специфическая профилактика и лечение.
Таксономия: относятся к от­делу Firmicutes, семейству Мicrococcacae, роду Staphylococcus. К данному роду относятся 3 вида: S.aureus, S.epidermidis и S.saprophyticus.
Морфологические свойства: Все виды стафилококков представляют собой округлые клетки. В мазке располагаются не­симметричными гроздьями. Клеточная стенка содержит большое количество пептидогликана, связанных с ним тейхоевых кислот, протеин А. Грамположительны. Спор не образуют, жгутиков не имеют. У некото­рых штаммов можно обнаружить капсулу. Могут образовывать L-формы.
Культуральные свойства : Стафилококки - факультативные анаэробы. Хорошо растут на простых средах. На плотных средах образуют гладкие, выпуклые колонии с различным пигментом, не име­ющим таксономического значения. Могут расти на агаре с высоким содержанием NaCl. Обладают сахаролитическими и протеолитическими ферментами. Стафилококки могут вырабатывать гемолизины, фибринолизин, фосфатазу, лактамазу, бактериоцины, энтеротоксины, коагулазу.
Стафилококки пластичны, быстро приобретают устой­чивость к антибактериальным препаратам. Существенную роль в этом играют плазмиды, передающиеся с помощью трансдуцирующих фагов от одной клетки к другой. R-плазмиды детерми­нируют устойчивость к одному или нескольким антибиотикам, за счет продукции бета-лактамазы.
Антигенная структура . Около 30 антигенов, представляющих собой белки, полисахариды и тейхоевые кислоты. В составе клеточной стенки стафилококка содержится протеин А, который может прочно связываться с Fc-фрагментом молекулы иммуноглобулина, при этом Fab-фрагмент оста­ется свободным и может соединяться со специфическим анти­геном. Чувствительность к бактериофагам (фаготип) обусловлена повер­хностными рецепторами. Многие штаммы стафилококков явля­ются лизогенными (образование некоторых токсинов происхо­дит с участием профага).
Факторы патогенности: Условно – патогенные. Микрокапсула защищает от фагоцитоза, способствует адгезии микробов; компоненты клеточной стенки – стимулируют развитие воспалительных процессов. Ферменты агрессии: каталаза – защищает бактерии от действия фагоцитов, бета-лактамаза – разрушает молекулы антибиотиков.
Резистентность. Устойчивость в окружа­ющей среде и чувствительность к дезинфектантам обычная.
Патогенез. Источником инфекции стафилококков - человек и некоторые виды животных (больные или но­сители). Механизмы передачи - респираторный, контактно-бы­товой, алиментарный.
Иммунитет : Постинфекционный – клеточно-гуморальный, нестойкий, ненапряженный.
Клиника. Около 120 клинических форм прояв­ления, которые имеют местный, системный или генерализованный характер. К ним относятся гной­но-воспалительные болезни кожи и мягких тканей (фурункулы, абсцессы), поражения глаз, уха, носоглот­ки, урогенитального тракта, пищеварительной системы (инток­сикации).
Микробиологическая диагностика . Материал для исследования – гной, кровь, моча, мокрота, испражнения.
Бактериоскопический метод: из исследуемого материала (кроме крови) готовят мазки, окрашивают по Граму. Наличие грам«+» гроздевидных кокков, располагающихся в виде скоплений.
Бактериологический метод: Материал засевают петлей на чашки с кровяным и желточно-солевым агаром для получения изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37С в течение суток. На следующий день исследуют выросшие колонии на обеих средах. На кровяном агаре отмечают наличие или отсутствие гемолиза. На ЖСА S. aureus образует золотистые круглые выпуклые непрозрачные колонии. Вокруг колоний стафилококков, обладающих лецитиназной активностью, образуются зоны помутнения с перламут­ровым оттенком. Для окончательного установления вида ста­филококка 2-3 колонии пересевают в пробирки со скошенным питательным агаром для получения чистых культур с последую­щим определением их дифференциальных признаков. S.aureus – «+»: образование плазмокоагулазы, лецитиназы. Ферментация: глюк, маннита, образование а-токсина.
Для установления источника госпитальной инфекции выде­ляют чистые культуры стафилококка от больных и бактерионо­сителей, после чего проводят их фаготипирование с помощью набора типовых стафилофагов. Фаги разводят до титра, указан­ного на этикетке. Каждую из исследуемых культур засевают на питательный агар в чашку Петри газоном, высушивают, а за­тем петлей каплю соответствующего фага наносят на квадраты (по числу фагов, входящих в набор), предварительно разме­ченные карандашом на дне чашки Петри. Посевы инкубируют при 37 °С. Результаты оценивают на следующий день по нали­чию лизиса культуры.
Серологический метод: в случаях хронической инфекции, определяют титр анти-а-токсина в сыворотке крови больных. Определяют титр АТ к риботейхоевой кислоте (компонент клеточной стенки).
Лечение и профилактика . Антибиотики широкого спектра действия (пенициллины, устойчивые к бета-лактамазе). В случае тяжелых стафилококковых инфекций, не поддающихся лечению антибиотиками, может быть использована антитокси­ческая противостафилококковая плазма или иммуноглобулин, иммунизи­рованный адсорбированным стафилококковым анатоксином. Выявление, лечение больных; проведение планового обследования медперсонала, вакцинация стафилококковым анатоксином. Стафилококковый анатоксин: получают из нативного анатоксина путем осаждения трихлоруксусной кислотой и адсорбцией на гидрате оксида алюминия.
Стафилококковая вакцина: взвесь коагулазоположительных стафилококков, инактивированных нагреванием. Применяют для лечения длительно текущих заболеваний.
Иммуноглобулин человеческий противостафилококковый : гамма-глобулиновая фракция сыворотки крови, содержит стафилококковый анатоксин. Готовят из человеч. крови, с высоким содержанием антител. Применяется для специфического лечения.

Впервые стафилококки были обнаружены Л. Пастером в 1897 г. Подробно они были изучены А. Огстоном (1882) и Ф. Розенбахом (1884).

Морфология . Стафилококки (от греч. staphyle - виноградная гроздь) имеют вид круглых шаров диаметром 0,5-1,5 мкм. Размножаясь, образуют скопления в виде грозди винограда. Такая форма является результатом деления микробов в различных плоскостях. Однако в гное встречаются единичные и парные кокки. Стафилококки неподвижны, не имеют спор, при специальных условиях культивирования образуют микрокапсулу, грамположительны.

Культивирование . Стафилококки - факультативные анаэробы, однако лучше растут в присутствии кислорода. Растут и размножаются на обычных питательных средах, хорошо растут на средах с кровью, оптимальные условия - температура 37° С, рН 7,2-7,4.

Элективными средами являются желточно-солевой агар и солевой агар. На МПА колонии стафилококка выпуклые, круглые, непрозрачные, блестящие, размером 2-4 мм с ровными краями. При росте стафилококки образуют пигмент: золотистый, лимонно-желтый или белый. Лучше всего пигмент образуется на молочной среде при комнатной температуре и рассеянном свете. Стафилококковый пигмент не растворяется в воде, растворяется в ацетоне, эфире, спирте и т. д. При росте некоторых штаммов стафилококка на агаре с кровью вокруг колонии образуется зона гемолиза. Рост на бульоне характеризуется равномерным помутнением и осадком на дне.

Ферментативные свойства . Стафилококки вырабатывают сахаролитические и протеолитические ферменты. Сахаролитические ферменты расщепляют ряд сахаров: лактозу, глюкозу, сахарозу, мальтозу, глицерин и другие с образованием кислоты.

Протеолитические свойства стафилококка выражаются в способности растворять казеин, разжижать желатин (медленно), расщеплять другие белковые субстраты.

Стафилококки продуцируют ферменты патогенности: 1) коагулазу (сворачивает плазму крови); 2) гиалуронидазу (фактор распространения); 3) лецитиназу (растворяет лецитин оболочки клеток); 4) фибринолизин (лизирует фибрин); 5) ДНКазу (деполимеризует ДНК); 6) фосфатазу и др.

Наличие плазмокоагулазы позволяет дифференцировать золотистый стафилококк от стафилококков других видов. Многие стафилококки вырабатывают пенициллиназу, разрушающую пенициллин.

Токсинообразование . Стафилококки вырабатывают экзотоксины. К их числу относятся гемолизины четырех типов, из которых наибольшее значение имеет α-токсин. Он обладает следующими свойствами: гемолитическим - вызывает гемолиз эритроцитов, дермонекротическим - при внутрикожном введении вызывает некроз, летальным - при внутривенном введении приводит к гибели чувствительных к нему животных.

Кроме гемолизинов стафилококки образуют лейкоцидин, убивающий лейкоциты, энтеротоксины шести типов, вызывающие пищевые отравления, эксфолиатины двух типов, приводящие к отслаиванию эпидермиса у новорожденных детей.

Антигенная структура . Стафилококки имеют протеиновый антиген А, общий для всех золотистых стафилококков, и полисахаридные антигены: А, Б, С.

Стафилококки выделяют бактериоцины (стафилоцины), которые обладают антагонистическим действием по отношению к микроорганизмам данного рода.

Среди золотистых (реже эпидермальных) стафилокков различают около 40 фаговаров. Определение чувствительности выделенных из различных объектов стафилококковых культур к типовым фагам имеет важное эпидемиологическое значение (при установлении источника и путей передачи возбудителя).

Классификация . В настоящее время стафилококки, выделенные от человека, делят на 3 вида (табл. 23): S. aureus, S. epidermidis, S. saprophyticus.

Примечание. + наличие ферментации, устойчивости, - отсутствие ферментации, устойчивости.

Устойчивость к факторам окружающей среды . Стафилококки довольно устойчивы, поэтому они обнаруживаются в воздухе, почве, воде, на предметах обихода. При температуре 100° С они погибают моментально, при температуре 70° С - через 10-15 мин. Они хорошо переносят низкие температуры. При замораживании сохраняют жизнеспособность в течение нескольких лет. Хорошо переносят высушивание. Прямой солнечный свет убивает их только через несколько часов. Обычные растворы дезинфицирующих веществ (например, сулема в разведении 1:1000) убивают их через 15-20 мин. При обезвреживании выделений, содержащих гной, белок, мокроту, не следует применять фенол. Это дезинфицирующее вещество вызывает коагуляцию белков, что предохраняет микроорганизмы от гибели. Стафилококки чувствительны к бриллиантовому зеленому.

Восприимчивость животных . К стафилококку чувствительны крупный и мелкий рогатый скот, лошади, свиньи, куры. Из экспериментальных животных - кролики, белые мыши и котята.

Источники инфекции . Больной человек и бактерионоситель.

Пути передачи . Контактно-бытовой, воздушно-капельный, воздушно-пылевой, пищевой.

Заболевания у человека . Пиодермия, фурункулы, карбункулы, панариции, абсцессы; воспалительные процессы различных органов и тканей; ангины, циститы, остеомиелиты, холециститы, маститы; сепсис и септикопиемия; пищевые токсикоинфекции и многие другие. Описано около 120 нозологических форм стафилококковой этиологии.

Патогенез . Стафилококки проникают через кожу и слизистые оболочки.

Преимущественное значение при стафилококковых заболеваниях имеет золотистый стафилококк (S. aureus). Менее выражена роль в патологии человека S. epidermidis и S. saprophyticus. Патогенез обусловливается свойствами возбудителя - ферментами, экзотоксинами, веществами бактериальной клетки и состоянием иммунной системы макроорганизма.

Чаще поражается кожа и подкожная клетчатка - возникают пиодермиты, фурункулы, панариции. Нередко стафилококки обусловливают вторичные заболевания, например пневмонию при гриппе. Они также вызывают раневые инфекции. Особенно велика роль стафилококков в акушерской практике, так как новорожденные очень чувствительны к ним. В течении стафилококковых заболеваний имеет значение развитие аллергии, поэтому заболевание характеризуется рецидивами.

Особое место среди стафилококковых заболеваний занимают пищевые интоксикации. Клинически они протекают как токсикозы, сопровождаются рвотой, поносом, головной болью и другими явлениями.

Иммунитет . У человека имеется естественная резистентность, связанная с механическими факторами, фагоцитозом и наличием антител. Воспалительный процесс, возникающий в месте внедрения возбудителя, обусловливает задержку стафилококков и затрудняет их распространение по организму. В образовавшемся очаге стафилококки подвергаются фагоцитозу.

Образующийся в процессе заболевания антитоксин является важным фактором в общем комплексе иммунитета. Однако приобретенный иммунитет нестойкий, поэтому наблюдаются рецидивы.

Профилактика . Сводится к улучшению санитарно-гигиенических условий, активному выявлению больных и бактерионосителей, правильному режиму работы больничных учреждений.

Специфическая профилактика . Стафилококковый анатоксин и антистафилококковый иммуноглобулин.

Лечение . Антибактериальные препараты, поливалентный стафилококковый бактериофаг, антистафилококковая плазма и иммуноглобулин. В некоторых случаях при хроническом течении стафилококковых инфекций применяют аутовакцину.

Контрольные вопросы

1. По какому признаку кокки объединены в одну группу?

2. Какие ферменты и факторы патогенности продуцируют стафилококки?

3. Какие заболевания вызывают стафилококки?

4. Какие виды стафилококков Вы знаете?

Микробиологическое исследование

Цель исследования: выделение и идентификация стафилококков.

Материал для исследования

1. Гной (фурункулы, карбункулы, абсцессы).

2. Слизь из зева (ангина).

3. Мокрота (пневмония).

4. Моча (пиелиты и циститы).

5. Дуоденальное содержимое (холецистит).

6. Кровь (подозрение на сепсис).

7. Рвотные массы, промывные воды желудка, пищевые продукты (пищевые отравления).

8. Слизь из носа (обследование на бактерионосительство).

Основные методы исследования

1. Микроскопический.

2. Микробиологический.

3. Биологический.

Ход исследования

Все посевы ставят в термостат на сутки.

Обнаружение стафилококков при микроскопии гноя из закрытого абсцесса и осадка мочи, взятой катетером, позволяет дать предварительный положительный ответ: обнаружен стафилококк.

Второй день исследования

Посевы на плотных и жидких питательных средах вынимают из термостата и изучают. Подозрительные в отношении стафилококка колонии, выросшие на желточно-солевом агаре, отсевают на скошенный агар для получения и дальнейшего изучения чистой культуры. При этом учитывают наличие лецитиназы, которое проявляется в образовании радужного венчика вокруг колонии. Чашки с оставшимися колониями оставляют на 2-3 дня при комнатной температуре для выявления пигмента. Просматривают посевы на чашках с агаром, содержащим кровь. Колонии с четкой зоной гемолиза (просветление) вокруг них выделяют на скошенный агар. Посев крови в сахарном бульоне инкубируют 10 сут, производя через 2-3 дня высевы на агар с кровью и желточно-солевую среду.

При отсутствии роста на плотных питательных средах делают высев из бульона с глюкозой на агар с кровью. Посевы ставят в термостат на сутки.

Третий день исследования

Вынимают посевы из термостата. Из выделенных на скошенный агар культур делают мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. При наличии грамположительных стафилококков проводят дальнейшее изучение выделенной культуры:

а) ставят реакцию плазмокоагуляции;

б) изучают гемолитические свойства;

в) определяют продукцию ДНКазы;

г) определяют ферментацию маннита в анаэробных условиях;

д) определяют устойчивость к новобиоцину.

Реакция плазмокоагуляции . Цитратную плазму, полученную из крови кролика, разводят изотоническим раствором натрия хлорида в соотношении 1:4 и наливают в две преципитационные пробирки по 0,3-0,5 мл. В одну пробирку вносят петлю исследуемой культуры, другая пробирка служит контролем. Обе пробирки ставят в термостат при температуре 37° С. Учет реакции производят через 2-3 ч. При отсутствии свертывания плазмы посевы оставляют при комнатной температуре на 24 ч, после чего учитывают реакцию. При наличии фермента коагулазы плазма свертывается (не выливается из перевернутой пробирки). В контрольной пробирке консистенция плазмы не изменяется.

Ускоренный метод определения коагулазы. В стерильной капле воды на предметном стекле суспендируют выделенную культуру, к ней прибавляют одну каплю неразведенной плазмы. При положительной реакции из микробных клеток в течение 20-60 с образуются крупные хлопья. Этот метод используют при массовых обследованиях.

Определение гемолитических свойств . Производят посев на агар с 5% крови (штаммы, продуцирующие α-гемолизин, дают зоны просветления среды и на кроличьей и на бараньей крови, продуцирующие β-гемолизин лизируют только эритроциты барана).

Определение ДНКазы . Исследуемую культуру засевают на среду, содержащую ДНК. Посевы инкубируют. Через 18-20 ч на чашку с выросшими колониями стафилококка добавляют 5-7 мл раствора хлороводородной кислоты. ДНК реагирует с кислотой и среда становится мутной. Если выделенная культура продуцирует фермент ДНКазу, он деполимеризует ДНК и помутнение не образуется.

Расщепление маннита в анаэробных условиях . Исследуемую культуру засевают уколом на полужидкий агар с маннитом. Поверхность среды заливают вазелиновым маслом. Инкубируют 18-24 ч при 37° С. Положительная реакция характеризуется изменением цвета среды (в среде имеется индикатор).

Четвертый день исследования

Производят учет результатов (табл. 24).

Примечание. + положительная реакция.

Наличие перечисленных признаков позволяет отдифференцировать золотистые стафилококки от стафилококков других видов и дать окончательный ответ: выделен S. aureus (рис. 37).

Для установления эпидемиологической цепочки выделенную культуру фаготипируют. Фаготипирование может подтвердить идентичность стафилококков, выделенных от разных больных и из объектов внешней среды.

Для фаготипирования используют критические тест-разведения фагов. Критическим тест-разведением называют то максимальное разведение фагов, при котором происходит полусливной лизис соответствующего штамма стафилококка.

Методика фаготипирования . В чашку Петри наливают 20 мл 1,5% МПА, дают ему застыть и подсушивают в термостате в течение 30-40 мин. На поверхность агара наносят 1 мл 4-6-часовой культуры выделенного стафилококка, распределяют по поверхности всей чашки, избыток жидкости отсасывают или дают ей испариться в термостате в открытой чашке. Предварительно дно чашки делят на секторы или квадраты. Число квадратов или секторов должно соответствовать количеству используемых фагов. Затем на каждый квадрат или сектор наносят один фаг.

Чашки ставят в термостат при температуре 37° С. Результаты определяют через 6-7 ч. Если чашки оставляют при комнатной температуре, то учет фаголизиса производят через 18-24 ч.

Биологические пробы . Проба на определение летальных свойств культуры. Для выявления летального действия токсина кролику вводят внутривенно (или внутрибрюшинно) фильтрат бульонной культуры стафилококка из расчета 0,1-0,2 мл фильтрата на 1 кг массы кролика. Гибель кролика через 3-4 дня свидетельствует о наличии летального действия токсина.

Дермонекротическая проба. Пробу ставят на кролике (наиболее чувствительному к этому токсину животному). Предварительно на боку или на спине животного выщипывают шерсть и вводят внутрикожно 0,2 мл двухмиллиардной взвеси стафилококковой культуры в изотоническом растворе натрия хлорида. При наличии в выделенной культуре некротических свойств в месте введения образуется инфильтрат, сопровождающийся некрозом.

Реакцию учитывают через 24-18 ч.

Полученную культуру стафилококка проверяют на чувствительность к антибиотикам методом бумажных дисков (см. главу 9).

Контрольные вопросы

1. Какой материал исследуют при заболеваниях, вызываемых стафилококками?

2. Каковы основные методы лабораторного исследования для выявления стафилококков?

3. Какова методика постановки реакции плазмокоагуляции?

4. На какой среде выявляют гемолитические свойства стафилококков?

5. С какой целью проводят фаготипирование?

Задание

Проверьте, к какому антибиотику чувствительна выделенная культура стафилококка.

Питательные среды

Желточно-солевой агар Чистовича . Готовят желточную смесь (1 желток куриного яйца на 150 мл стерильного изотонического раствора натрия хлорида). К мясопептонному солевому агару (8-10% натрия хлорида), растопленному и остуженному до 45° С, добавляют 20% желточной взвеси (соблюдают стерильность) и разливают в чашки.

Агар с кровью . См. главу 7.

Солевой бульон, солевой агар . Готовят как обычные среды - МПБ и МПА, только натрия хлорид вносят в большем количестве (8-10%). Бульон разливают в колбы, пробирки, агар - в чашки.