Помощь по Теле2, тарифы, вопросы

Одна из самых распространенных офтальмологических проблем кошек – поражение глаз при герпесвирусной инфекции (вирусном ринотрахеите).

Герпесвирус поражает клетки эпителия конъюнктивы и верхних дыхательных путей, вызывает некроз клеток и воспаление слизистых, сопровождающееся выделениями из глаз, носа, блефароспазмом, чиханием, кашлем.

Заражение происходит при контакте с выделениями из глаз и носа больных кошек.

Помимо клеток эпителия вирус размножается и пожизненно сохраняется в ганглии тройничного нерва, что определяет длительное вирусоносительство.

Таким образом, единожды встретившись с вирусом герпеса, кошка продолжает быть носителем практически пожизненно, при этом клинически кошка не болеет, за исключением периодов снижения иммунитета (беременность, лактация, скученное содержание животных, сопутствующие системные заболевания, стресс).

Клинические проявления герпесвирусной инфекции

Острая форма герпесвирусной инфекции встречается в основном у котят в возрасте 8-12 недель, столкнувшихся с вирусом впервые. Наиболее часто это котята, находившиеся в плохих условиях: приюты, питомники с обилием кошек, уличные условия.

Типичные симптомы поражения глаз : блефароспазм, гиперемия и отек конъюнктивы, серозные выделения из конъюнктивального мешка, постепенно сменяющиеся слизистыми и слизисто-гнойными (из-за осложнения вторичной микрофлорой). При повреждении конъюнктивы происходит быстрый и обширный некроз эпителия, с образованием дифтеритических пленок и спаек конъюнктивы (рисунок 1).

Повреждения роговицы – дендритные (древовидные) язвы являются патогномоничным (специфическим) признаком герпесвирусной инфекции, для их обнаружения используют окрашивание роговицы флюоресцеином (рисунок 2).

В большинстве случаев герпесвирусная инфекция осложняется вторичной микрофлорой, что может приводить к расплавлению роговицы, возникают глубокие иногда прободные язвы с пролапсом радужной оболочки, в дальнейшем может развиться панофтальмит, вторичная глаукома или субатрофия глазного яблока. Агрессивное течение герпесвирусной инфекции – основная причина потери глазного яблока у котят.

Помимо офтальмологических признаков наблюдают чихание, истечения из носа, кашель, повышение температуры тела.

Иммунная система кошек может бороться с вирусом герпеса с последующим самовыздоровлением, и клинические признаки постепенно исчезают через 2-3 недели. Снизить риск осложнений острой формы заболеваний (спайки конъюнктивы, расплавление и перфорация роговицы) можно при адекватной и своевременной терапии.

Обострения при хроническом течении

У кошек, которые ранее переболели герпесвирусной инфекцией, повторные поражения глаз возникают в результате реактивации латентного вируса. Причиной рецидивирования могут быть любые стресс-факторы: перевозка животных, вакцинация, беременность, лактация, лечение кортикостероидами. В отличие от первоначальной инфекции, признаки поражения верхних дыхательных путей выражены незначительно, во многих случаях небольшая гиперемия конъюнктивы и периодические выделения из конъюнктивального мешка – единственные клинические признаки.

Поражения, связанные с рецидивированием инфекции, проявляются по-разному: конъюнктивит, дендритные язвы роговицы, хроническая эрозия роговицы, стромальный кератит (рисунок 3. Сосудистый кератит и буллы в центральной зоне роговицы у кошки). Имеются данные о том, что такие заболевания, как корнеальный секвестр и эозинофильный кератит могут быть также связаны с герпесвирусом.

Диагностика

Основой для постановки диагноза служат клинические и патогномоничные признаки. Лабораторная диагностика, проводимая при помощи ПЦР, имеет не 100% достоверность, нередки ложноположительные и ложноотрицательные данные.

Лечение

Лечение складывается из специфического противогерпетического лечения и поддерживающей терапии.

Для специфического местного лечения существует несколько типов глазных капель (трифлуридин, идоксуридин, цидофовир) доступность их на рынке ветеринарных препаратов невелика, к тому же средства для местного применения необходимо использовать до 8 раз в сутки, также они могут раздражать конъюнктиву и роговицу, все это делает данные препараты редко применяемыми в ветеринарии.

Для специфического системного противогерпетического лечения используют фамцикловир в таблетках, так как это вещество является эффективным и безопасным для кошек, дают препарат внутрь в течение 1-3 недель.

Поддерживающая терапия включает в себя антибиотики широкого спектра местно (в конъюнктивальный мешок) и системно для борьбы с вторичной микрофлорой. Имеется противоречивая информация об эффективности биологически активных добавок (L-лизин) при герпесвирусе.

Интенсивность и длительность лечения при герпесвирусе зависит от тяжести течения заболевания и может варьировать от 7 до 21 дня.

Профилактика

Вакцинация кошек против вируса герпеса позволяет поддерживать уровень активных антител в крови кошек и снизить интенсивность клинических признаков болезни при контакте с больным животным или при снижении собственной резистентности организма. После первого контакта с вирусом герпеса животное остается в большинстве случаев пожизненным носителем вируса. Эпизоды проявления клинических признаков с вирусовыделением реже встречаются у вакцинированных кошек.

Последствия герпесвирусной инфекции

Симблефарон – срастание участка конъюнктивы век с конъюнктивой глазного яблока или роговицей – наиболее частое осложнение герпесвирусной инфекции, он не прогрессирует, чаще всего не беспокоит животное и не требует лечения. Симблефарон может варьировать по размеру и локализации, при небольшом размере он может быть случайной находкой во время рутинного обследования или же, в случае обширного напластования конъюнктивы на роговицу, быть косметическим дефектом и препятствием для зрения животного. В случае серьезного нарушения зрения при симблефароне ветеринарный врач-офтальмолог рассматривает хирургические возможности лечения. Однако недостаточно просто отсечь прикрепленную к роговице конъюнктиву, она прирастет вновь из-за дефицита стволовых клеток роговицы, разрушенных герпесвирусом. Разрабатываемой эффективной методикой лечения считается пересадка донорских участков лимба (место перехода склеры в роговицу), продуцирующих нормальный эпителий роговицы, препятствующий повторному нарастанию конъюнктивы.

Передние синехии – спайки радужной оболочки и роговицы, возникающие после прободных язв роговицы у животных, не получавших лечение в острый период заболевания, и если глаз пережил сквозной дефект без последующего панофтальмита или глаукомы, то чаще всего передние синехии не беспокоят животное и не требуют лечения (рисунок 4).

Непроходимость носослезного канала из-за спаек слизистой носослезного канала или закрытия слезных точек участками симблефарона, сопровождается слезотечением. Решение данной проблемы заключается в создании дополнительного пути оттока слезы, существует несколько хирургических методов с разной степенью эффективности.

Важно помнить , что герпесвирусная инфекция – это серьезное заболевание, приносящее значительный дискомфорт животному и влекущее за собой множество осложнений вплоть до потери глазного яблока, поэтому необходимо ответственно отнестись к блефароспазму, покраснению глаз, выделениям из глаз, особенно у маленьких котят, и не допускать скученного содержания кошек.

Герпес кошек вызывает заболевание, которое называется ринотрахеитом. Это острая вирусная инфекция, основными признаками которой являются повышение температуры, поражение верхних дыхательных путей, проявляющееся насморком (ринитом), бронхитом, трахеитом, а иногда и сильным воспалением легких, также могут поражаться органы зрения. При нарушении в организме иммунного ответа вирус накапливается в клетках, и кошка становится носителем возбудителя, выделяя его в окружающую среду.

Причины развития герпесной вирусной инфекции у кошек - возбудитель

Ринотрахеит у кошек вызывается ДНК-содержащим кошачьим герпесвирусом Feline viral rinotracheitis-2, который относится к семейству Herpesviridae.

Вирус хорошо размножается в клетках слизистых оболочек носоглотки, миндалин, трахеи, конъюнктивы, которые являются отличной питательной средой для его роста и развития.

Устойчивость вируса к внешним факторам

Вирус хорошо сохраняется в кислой среде, но достаточно чувствителен к повышенным температурам. Отрицательное воздействие на него оказывают:

• эфир,
• хлороформ,
• гидроокись натрия,
• формалин,
• фенол.

Эти средства обычно применяются для дезинфекции помещения, они помогают освободить предметы внешней среды от вируса.

Восприимчивость кошек к ринотрахеиту (герпесу)

Заразиться герпесвирусом может кошка любого возраста, но чаще болеют котята. Для ринотрахеита характерно быстрое распространение при скученном содержании кошек, поэтому подчас в питомниках заболевание приобретает характер энзоотий. При заболевании хотя бы одного животного есть большая вероятность, что вирус поразит и остальных кошек, содержащихся в одной группе.

Возникновению ринотрахеита способствуют стресс-факторы:

• переохлаждение кошки;
• плохие условия содержания;
• неудовлетворительное кормление, связанное с недостатком в рационе питательных веществ, так необходимых для нормального развития организма и поддержания его в отличном состоянии.

Как происходит заражение герпесом у кошек

• Основной путь передачи вируса от одного животного к другому носит воздушно-капельный характер, то есть заражение происходит при непосредственном контакте.
• Алиментарный путь заражения, через корма, не доказан, но никто не утверждает, что он не возможен в принципе.

Как правило, после переболевания кошка еще долго остается вирусоносителем ринотрахеита и при благоприятных для вируса условиях, например, наличии каких-то стресс-факторов, болезнь может рецидивировать. В редких случаях кошка полностью освобождается от вируса, но для этого она должна обладать отличным иммунитетом, которым может похвастаться далеко не каждое животное.

Признаки ринотрахеита (герпеса) кошек

После попадания вируса внутрь организма и по истечении инкубационного, или скрытого, периода болезни у кошки появляются признаки, характерные для этой патологии:

• чиханье;
• внезапное появление кашля;
• серозные, с примесью гноя, истечения из глаз;
• насморк;
• кошку начинает лихорадить, а температура тела поднимается до отметки 41 °С;
• конъюнктива воспалена и отечна;
• глазная щель становится узкой, а веки слипаются в результате гнойных выделений;
• участки шерсти вокруг глаз, носа загрязнены выделениями.

Чем дольше длится заболевание, тем сильнее ухудшается состояние пушистого питомца. Ринотрахеит осложняется бактериальной микрофлорой, в результате чего развиваются сопутствующие заболевания: воспаление трахеи, бронхов и пневмония.

Герпесвирус у кошек может протекать как остро, так и хронически:

• Острое течение ринотрахеита продолжается приблизительно неделю или две и у взрослых особей заканчивается полным выздоровлением. Смертность практически отсутствует. Если же вирус герпеса внедрился в организм котенка или животного с очень слабым иммунитетом, то болезнь может закончиться летально. У этой же категории животных ринотрахеит в большинстве случаев осложняется тяжелой пневмонией.
• Хроническое течение ринотрахеита продолжается до полутора месяцев и помимо всех признаков, описанных выше, характеризуется развитием язвенного кератита, панофтальмии, вплоть до слепоты.

Как поставить диагноз «герпес кошек»

Диагноз ставят на основании характерных клинических признаков. Для его подтверждения необходимо взять анализ истечений, который отправляют в вирусную или серологическую ветеринарную лабораторию. Обнаружение телец-включений вируса служит основанием для постановки диагноза «ринотрахеит» (герпесвирусная инфекция).

Дифференциальный диагноз

Признаки ринотрахеита во многом схожи с признаками кальцивироза. Их лечение в некоторой степени похоже. Но все равно необходимо проводить дифференциацию этих двух заболеваний, чтобы быть во всеоружии и знать, с чем бороться.

Вопрос осложняется тем, что в последнее время наблюдается сильная мутация этих двух вирусов и в некоторых случаях довольно сложно отличить их между собой. В ближайшем будущем из-за процессов мутации может появиться новое вирусное заболевание, которое принесет немало неприятных сюрпризов любителям кошек, и, возможно, будет представлять интерес для научной деятельности.

Как лечить герепес у кошек

Лечение ринотрахеита у кошек во многом схоже с лечением .

• В первую очередь пытаются защитить роговицу от вирусного повреждения и развития воспалительного процесса, перетекающего в панофтальмит. Для этого применяются мази, обладающие противовирусным эффектом (ацикловир), неплохие результаты дает закладывание под нижнее веко тетрациклиновой мази. Применять их надо 5-6 раз в сутки.
• В качестве противовирусной терапии есть опыт применения ацикловира внутрь в виде таблеток. Но давать их надо строго под наблюдением лечащего врача и с его разрешения. Дело в том, что длительный прием этого лекарства вызывает у кошки нарушение функции печени. После отмены препарата в течение какого-то времени печень восстанавливается, но не стоит надеяться на авось и назначать ацикловир на основе собственного решения.

При герпесвирусной инфекции огромное внимание следует уделить кормлению и содержанию животного. Кошке обеспечивают покой в теплом помещении. Кормить иногда приходится насильно жидкими или полужидкими кормами.

К сожалению, ни одно живое существо, обитающее на нашей планете, не застраховано от острых инфекций. Одним из наиболее распространенных недугов, с которыми приходится сталкиваться владельцам домашних питомцев, является герпес у кошек. Симптомы и лечение этой болезни будут рассмотрены в статье.

Какие особи наиболее восприимчивы к вирусу?

Следует отметить, что эта инфекция поражает животных, независимо от их возраста. Но чаще всего герпес или ринотрахеит встречается у маленьких котят. Особенно быстро он распространяется в питомниках, в которых одновременно содержится большое количество животных.

Как правило, герпес у кошек проявляется на фоне стресса, недостаточного питания или переохлаждения. Он поражает невакцинированных особей, живущих в ненадлежащих условиях и не получающих должного ухода. Все вышеперечисленные факторы существенно повышают риск развития этого заболевания.

Как происходит заражение?

Возбудителем данного заболевания является ДНК-содержащий вирус, относящийся к семейству Herpesviridae. Диаметр его вирионов варьируется от 151 до 225 нм.

Вирус, попавший на слизистые оболочки дыхательных путей, быстро проникает в клетки эпителия. Там он активно репродуцируется, разрушая их. Это приводит к развитию воспалительного процесса. Вначале на поверхности слизистой появляются небольшие участки некроза. Со временем они становятся более обширными. Вирус герпеса у кошек адсорбируется на лейкоцитах. В дальнейшем он проникает в кровь и разносится по всему организму.

Возбудитель, попадающий сквозь гематоэнцефалический и плацентарный барьеры, поражает плод, матку, плаценту и мозг. Иногда течение болезни может осложняться наличием условно-патогенной микрофлоры.

Причины возникновения герпеса у кошек

В большинстве случаев данный вирус передается воздушно-капельным путем при контакте больных и здоровых животных. Он устойчив к воздействию кислой среды, но достаточно быстро разрушается под влиянием высоких температур. Вирус может находиться в лужах, траве или грунте, поэтому для инфицирования не всегда нужен непосредственный контакт с заболевшим животным.

Вирус герпеса содержится в семенной жидкости самцов, поэтому его передача может произойти во время вязки. Инфицированная беременная кошка может передать заболевание будущим котятам через плаценту. Также заражение может произойти через молоко, в процессе вскармливания малышей.

Герпес у кошек: симптомы

Следует отметить, что интенсивность и степень проявления данного заболевания напрямую зависит от возраста, иммунитета и общего состояния животного. К наиболее характерным проявлениям ринотрахеита можно отнести резкое повышение температуры до 41,5 градуса.

У инфицированной особи отмечаются обильные гнойные выделения из носовых ходов и глаз. В запущенных случаях в них присутствуют кровянистые вкрапления. Нередко заболевание сопровождается приступами кашля, чиханием, хрипами, затрудненным дыханием и отечностью гортани. На слизистых верхних дыхательных путей появляется белый налет. Герпес у кошки на губе можно распознать по наличию мелких прозрачных пузырьков.

Инфицированное животное становится вялым, сонливым и апатичным. У него снижается активность и В некоторых случаях у домашних питомцев наблюдается повышенное слюноотделение, приступы рвоты, увеличение шейных и челюстных лимфоузлов. Иногда у мохнатых пациентов развивается светобоязнь, залипание век и слезотечение.

Лечение

Терапия должна быть нацелена на уничтожение вируса и на восстановление защитных функций слизистых оболочек дыхательных путей. На ранних стадиях герпес у кошек прекрасно лечится с помощью специфических сывороток и глобулинов. Не менее эффективно помогают справиться с болезнью препараты интерферона.

Что касается антибиотиков, то они совершенно бесполезны против самого вируса, но отлично подавляют патогенную микрофлору, осложняющую течение основного недуга. Одновременно с ними назначают аскорбиновую кислоту и терапевтические дозы витамина E, A и B. Истощенным особям рекомендуют лечение солевыми растворами.

Симптоматическая терапия включает в себя прием успокоительных, сердечных, противорвотных и отхаркивающих препаратов. Глаза и нос животного периодически очищают от выделений с помощью тампонов, смоченных в дезинфицирующих веществах. Как правило, для этих целей используют борную кислоту, перманганат калия, фурацилин или настои лекарственных растений.

Инфицированного питомца помещают в теплую комнату, в которой отсутствуют сквозняки. В этот период пушистый пациент нуждается в особенном питании. Основу кошачьего рациона должны составлять протертые овощи, каши, подогретое молоко, бульоны, рыбный, говяжий и куриный фарш. Если домашний любимец напрочь отказывается от еды, можно попытаться стимулировать аппетит с помощью любых сильно пахнущих продуктов.

Важно изолировать заболевшую кошку от здоровых животных. Чтобы облегчить дыхание и уменьшить заложенность носа, мохнатому пациенту делают ингаляции или периодически выносят его в предварительно пропаренную ванную.

Кроме того, необходимо поддерживать чистоту кошачьего лотка и мисок для пищи и воды. Также следует регулярно промывать нос больной кошки, поскольку забитые ходы затрудняют процесс дыхания.

Чтобы уничтожить вирус, нужно протереть все загрязненные поверхности дезинфицирующим раствором. Для его приготовления используют хлорку и воду. Их смешивают в соотношении 1:32. Остальные предметы, которые нежелательно подвергать воздействию хлорки, можно обеззаразить с помощью мыльного раствора. Что касается диванов и кресел, то их можно обработать специальными средствами для мебели.

Методы профилактики

Герпес у кошки довольно распространенное заболевание, которое легче предотвратить, чем лечить. Поскольку этот недуг часто возникает на фоне стрессов, нужно постараться создать для своего питомца комфортную психологическую обстановку. Старайтесь избегать резких звуков, внезапных изменений и перемещения мебели. Все это нервирует животное, подвергая его стрессам.

Важно регулярно чистить кошачью подстилку и прочие предметы ухода за животным. Не следует пренебрегать вакцинацией и регулярными профилактическими визитами к ветеринару.

Немного о прививках

Следует отметить, что своевременно проведенная вакцинация надежно защитит домашнего питомца от этого достаточно серьезного заболевания. Как правило, для таких целей используют три разновидности препаратов.

Самой лучшей считается Она позволяет сформировать устойчивый иммунитет уже через четверо суток после введения. Не менее эффективны поливалентные и инактивированные препараты. Первую прививку делают после того, как котенку исполнится девять недель. Спустя двадцать один день проводят повторную вакцинацию. В дальнейшем процедуру повторяют раз в год.

Вирусный ринотрахеит кошек во всем мире признан причиной большинства заболеваний верхних дыхательных путей у домашних кошек. От 50 до 70% взрослых кошек (R.A. Crandell, 1973), а по результатам недавних исследований и до 97% (D.A. Dawson, J. Carman et al., 1998) имеют антитела к этому вирусу. Установлено, что инфекция может вызывать заболевание до 100% невакцинированных кошек. Синдром поражения верхних дыхательных путей был впервые выделен как самостоятельное заболевание у группы котят в возрасте 5-10 недель в 1957 году (Crandel, Maurer, 1958), а в 1959 году Комитет по Номенклатуре Вирусных Заболеваний Кошек, утвердил предложенное Crandell и Despeaux название нового инфекционного заболевания кошек: «Feline Viral Rhinotraheitis (FVR)».

Возбудитель инфекционного ринотрахеита кошек - герпесвирус кошек тип 1 (Feline Herpes Virus type -1, FHV-1) - ДНК содержащий вирус подсемейства герпесвирусы.

Общей характеристикой для данного семейства является быстрое размножение вируса в клеточных культурах с разрушением клеток, тенденция к установлению латентной инфекции в чувствительных нервных ганглиях после первоначальной инфекции. Другие вирусы животных, относящиеся к данному подсемейству, включают: герпесвирус лошадей тип 1, герпесвирус свиней тип 1 и герпесвирус КРС тип 1 и 2, герпесвирус собак тип 1 и др. Типичный герпесвирусный вирион состоит из сердцевины – двойной цепочки ДНК, находящейся внутри икосаэдрического капсида. Примыкающий к капсиду электоронноплотный материал называют интегументом. Конечная структура, окружающая вирион - вирусная оболочка, образуется из ядерной мембраны клетки-хозяина (рис. 1).

Рис. 1. Герпесвирус кошек.

Известное на сегодняшний день распространение вируса ограничивается странами, находящимися в северных и южных температурных зонах. Болезнь широко распространена в России, США, Канаде, Великобритании, Южной Африке, Австралии, Германии, Швеции, Австрии, Чехословакии, Венгрии, Индии, Италии, Франции, Шотландии, Румынии и др. Информация о сезонных вспышках FHV-1 инфекции отсутствует, хотя известно, что в кошачьих популяциях заболевание проявляется в виде энзоотических вспышек.

Вирус герпеса кошек - FHV-1 вызывает заболевание не только у домашних кошек (Felis catus). Первое сообщение о выделении FHV-1 от экзотических кошек было получено в 1977 году из зоопарка Святой Луизы, где FHV-1 послужил причиной смерти трех обычных и пяти пятнистых леопардов (Neofelis nebulosa) в единственной вспышке. В настоящее время опубликовано значительное количество работ о важной роли вируса герпеса кошек в возникновении заболеваний у диких кошек: дикой африканской (Felis silvestris) и песчаной (Felis margarita) кошек на Ближнем Востоке и в Южной Африке (S. Ostrowski, Van Vuuren M, M. Daniel, D.M. Lenain et al., 2003) и дикой европейской кошки (Felis silvestris silvestris) в Западной и Восточной Европе (M.J. Daniels, M.C. Golder, O. Jarrett et al., 1999).

Клинические формы и патогенез.

Несмотря на то, что смертность при FVR кошек достаточно низкая (за исключением котят, у которых она может достигать 30%), заболевание представляет чрезвычайно серьезную проблему, обусловленную вызываемыми FHV-1-поражениями.

Наиболее часто встречают респираторную форму инфекции в сочетании с окулярными поражениями. Наблюдаемый инкубационный период может составлять от 2-3 до 10 дней. Ранние признаки болезни характеризуются наличием серозных носовых и окулярных выделений, повышением температуры тела и кашлем. Скученное содержание заболевших животных может вызывать пароксизмальный кашель и чихание. По мере прогрессирования заболевания носовые выделения становятся слизистыми или слизисто-гнойными, температура тела повышается до 40-40,5оС. У животных можно наблюдать интенсивную саливацию, в некоторых случаях подчелюстные лимфоузлы могут значительно отекать. Больные животные обычно сохраняют способность самостоятельно принимать пищу и воду, если не возникает осложнений.

Описаны различные формы осложнений, как респираторных, так и нереспираторных; при более тяжелом респираторном синдроме, часто сопровождающемся вторичной бактериальной инфекцией, дыхание становится затрудненным из-за обструкции носовых путей. У пораженных животных наблюдают вялость, анорексию и дегидратацию. В случае развития интерстициальной пневмонии возникает одышка с характерными респираторными звуками (Love, 1971), в этом случае прогноз неблагоприятный.

Язвенный глоссит может сопровождать респираторную форму инфекции (Johnson, Thomas, 1966; Karpas, Routledge, 1968). Язвы ротовой полости и кожные язвы в области груди, боков, живота, конечностей и спины могут встречаться у кошек без каких-либо признаков респираторной инфекции (Johnson, Sabine, 1971) (A. Suchy, B. Bauder, W. Gelbmann et al., 2000). Однако, случаев возвратного рецидивирующего глоссита или стоматита, связанного с латентной инфекцией, такой как herpes simplex у человека, у кошек не описаны.

Отсутствие возвратных повреждений позволяет утверждать, что оральные повреждения являются результатом диссеминации вируса или просто инвазии вирусом поврежденных тканей. Случаи язвенных поражений ротовой полости или кожи у животных без признаков респираторного заболевания могут означать контактную инфекцию, передаваемую механически (R.A. Crandell, 1973).

Респираторный синдром при данном заболевании может сопровождаться генерализованной инфекцией (Karpas, Routledge, 1968; Spradbrow et al., 1971, Bistner et al., 1971). Аборты (Johnson, Thomas, 1966; Spradbrow et al., 1971) и поражения ЦНС, включая эпилептические припадки, могут сопровождать респираторную форму заболевания. Явления катарального энтерита с геморрагическим илеитом, метрита и вагинита связывают с возникновением аборта. Но поскольку вирус в этих случаях из плацент или плодов не выделяли, и не было обнаружено фетальных или плацентарных изменений, которые могли быть связаны с прямым действием вируса, авторы считают, что аборты могли быть связаны с некоторым неспецифическим механизмом, связанным с тяжелым истощающим респираторным заболеванием у беременной самки.

Отмечена тропность вируса к местам роста костей скелета, включая носовые раковины, что подтверждено в результате проведенных экспериментов после внутривенной инокуляции молодым котятам. Даже при естественной инфекции отмечали случаи остеолитического поражения носовых раковин с некрозом и резорбцией лежащей ниже кости. Таким образом, последствием переболевания FHV-1 инфекцией могут стать хронические риниты и синуситы.

Глазные проявления острой формы FHV-1 инфекции почти всегда билатеральны, и, в общем, ограничиваются поражениями конъюнктивы. Блефароспазм - первоначальный клинический признак, начинающий проявляться через несколько дней после заражения. Достигая пика к пятому дню, он начинает сопровождаться серозными выделениями. Последние сменяются слизистыми и слизисто-гнойными к 7 дню, начиная ослабевать к 10 дню. Внешний вид конъюнктивы при острой инфекции характеризуется сильнейшей гиперемией, конъюнктива набухает (отек средней силы), но хемоз конъюнктивы не характерен для FHV-1-инфекции. Повреждения конъюнктивы возникают вследствие прямого цитолитического действия герпесвируса. Отмечают значительный тропизм вируса именно к конъюнктивальному эпителию, корнеальные повреждения значительно менее заметны. Корнеальные дендритные (древо-, ветвевидные) фигуры видны как двусторонние узоры. Множество микродендритных фигур видны на роговице между третьим и шестым днями инфекции, возникая из-за размножения попадающего на роговицу вируса. Дендритные поражения исчезают к 6 дню и вновь появляются на 11 день, когда вследствие некроза конъюнктивы высвобождается новая волна вирусных частиц. Вторичные дендритные поражения значительно больше, иногда, срастаясь, они формируют амебовидные узоры, но их количество значительно меньше первоначальных.

Гистологические исследования демонстрируют, что корнеальная инфекция, в отличие от конъюнктивальной, характеризуется размножением вируса с меньшим цитопатическим эффектом и без воспалительной клеточной реакции. Корнеальная инфекция сопровождается слабой и временной поверхностной васкуляризацией, и ее исчезновение признаков совпадает с исчезновением признаков поражения респираторного тракта.

Значительно более серьезные глазные патологии встречаются у тех кошек, которые ранее переболели герпесвирусной инфекцией. Хотя возможна и реинфекция, вызванная другим штаммом FHV-1, более вероятно, что глазная инфекция у взрослых кошек возникает в результате реактивации латентного вируса. В отличие от классического течения признаки поражения верхних дыхательных путей отсутствуют, а глазные поражения часто унилатеральны. Признаки возвратной инфекции могут ограничиваться конъюнктивальными поражениями или вызывать кератиты различной тяжести. Во многих случаях, небольшая гиперемия конъюнктивы и периодические глазные выделения – единственные клинические признаки. Сильный отек конъюнктивы не характерен. У многих кошек можно наблюдать сухие коричневатые выделения, скапливающиеся в медиальном углу глаза, хотя неизвестно, является ли данный признак специфичным для герпесвирусной инфекции. Инфекция может длиться недели, месяцы, рецидивы часты.

Корнеальные поражения, связанные с возвратной FHV-1 инфекцией проявляются несколькими различными синдромами.

Простейшая форма.

Древовидные (дендритные) эпителиальные изъязвления в сочетании с конъюнктивитом. Дендриты могут персистировать длительный период времени и могут сопровождаться изменениями в подлежащей строме (отеком и поверхностной васкуляризацией роговицы). Дендритные повреждения, которые, увеличиваясь, становятся похожими на географическую карту, именуются «географическими». Очень часто, однако, FHV-1-корнеальная инфекция не проявляется характерными клиническими проявлениями, позволяющими отличить ее от других причин язвенного процесса в роговице. Дендритный кератит в случае вторичной (возвратной) FHV-1-инфекции возникает так же, как и при первичном заражении – за счет размножения вируса и разрушения эпителиальных клеток.

Стромальный кератит (СК).

Как проявление корнеальной FHV-1-инфекции встречается реже. Из-за своей потенциальной способности вызывать нарушающее зрение корнеальное рубцевание, СК считают наиболее тяжелым проявлением корнеальной герпесвирусной инфекции.

FHV-1-СК обычно сопровождается хроническими эпителиальными изъязвлениями и легко распознается по наличию стромального отека и глубокой васкуляризации; микроскопически обнаруживают воспалительно-клеточный инфильтрат. Механизм, обуславливающий возникновение СК, неизвестен. Поскольку FHV-1 в норме не размножается в кератоцитах, маловероятно, что стромальные повреждения связаны с прямым действием вируса. Установлено, что СК не развивается даже после экспериментального заражения кошек, сопровождающегося механической скарификацией корнеального эпителия и стромы. Несмотря на диффузный некроз инфицированных конъюнктивальных тканей, корнеальный эпителий остается интактным и скарифицированная строма быстро заживает. Однако если кошки одновременно получают кортикостероиды, развивается СК, в конечном счете, приводящий к фиброзу пораженных тканей. В этом случае развитию кератита у кошек предшествует хронический эпителиальный язвенный процесс и замедленное заживление дефектов стромы. Оба явления предположительно связаны с действием кортикостероидов, замедляющих эпителизацию и угнетающих синтез коллагена. В сочетании с продолжительным выделением вируса под влиянием этих же обстоятельств корнеальные стромальные ткани, таким образом, должны подвергаться максимальному воздействию вируса. Множество экспериментальных исследований показало, что СК, вызванный herpes simplex virus, есть иммунопатологический процесс, инициированный вирусным антигеном, что обеспечивает возможность воздействия на корнеальную строму. Предполагают, что роль медиаторов в данном процессе может играть цитотоксическое действие Т-лимфоцитов. Каким бы ни был механизм, хронические или возвратные эпизоды СК ведут к прогрессирующему повреждению коллагена, нарушению фибриллярной структуры и, в конечном счете – стромальному помутнению.

При глубоких стромальных язвах и десцеметоцеле в некоторых случаях можно выделить FHV-1 из слезной жидкости. Неизвестно, является ли вирус основным инструментом воздействия на роговицу в таких случаях. Кажется маловероятным, что вирус способен индуцировать расплавление стромы. Скорее всего, расплавление стромы медиируется вторичной бактериальной инфекцией или первичный бактериальный язвенный процесс просто вызывает реактивацию и выделение латентного вируса.

Некоторые серьезные глазные патологии у кошек (необязательно специфичные) можно наблюдать вместе с инфекционным ринотрахеитом, например, корнеальная секвестрация – синдром, при котором дегенерирует коллаген корнеальной стромы и накапливается темно-коричневый или черный пигмент, источником которого предположительно является слезная пленка. Хотя заболевают любые породы кошек, наиболее к ним предрасположены персидские и гималайские кошки. Гистологически секвестр состоит из лишенных кератоцитов изъязвленных стромальных тканей, окруженных различным числом лимфоцитов, плазматических клеток, макрофагов и, в меньшей степени, нейтрофилов. Характер воспалительного процесса рассматривают как неспецифическую иммунную реакцию, вызывающую дегенерацию коллагена. Гистологические характеристики корнеальных секвестров несовместимы с иммунным механизмом, предположительно ответственным за повреждения коллагена, видимые при СК. Возможно, что секвестральные повреждения возникают как результат инфекции кератоцитов или сверхвыработки провоспалительных цитокинов.

В 1998 году группой исследователей M.P. Nasisse, T.L. Glover, P. Cecil, et al. проверено 156 образцов роговицы кошек с корнеальным секвестром на предмет выявления ДНК FHV-1 - 55,1% (86/156 образцов) дали положительный результат. Количество выявленных ДНК FHV-1 у кошек с корнеальными секвестрами персидской и гималайской пород различалось незначительно, 42,7 и 58,3% соответственно. Однако, суммарный процент положительных результатов у этих двух пород (46,5%), был значительно ниже, чем у остальных длинношерстных и короткошерстных пород с корнеальными секвестрами (80%).

По мнению исследователей FHV-1 является только одной из многих потенциальных угроз для роговицы, которые могут ускорять и провоцировать формирование секвестра. То, что FHV-1 обнаруживают в секвестрах домашних кошек чаще, чем у персидских и гималайских, только подтверждает данную теорию. Можно предполагать, что разница в преобладании ДНК FHV-1 в секвестрах домашних кошек по сравнению с персидскими кошками (43%), связана исключительно с невирусными факторами, например с более частым повреждением роговицы вследствие присущего данной породе экзофтальма и лагофтальма. Это предположение согласуется и с результатами наших собственных наблюдений, которые показывают, что наиболее часто у персидских кошек секвестр возникает именно при повреждении центральной части роговицы, которая из-за лагофтальма и экзофтальма недостаточно защищается веками, подвергаясь, таким образом, максимальному повреждающему действию агрессивных факторов внешней среды, наиболее скудно омывается слезой, что, безусловно, замедляет регенерацию тканей и создает максимально благоприятные условия для отложения пигмента и формирования секвестра. При повреждениях периферических участков роговицы, хорошо омывающихся слезой и защищаемых веками, происходит нормальная регенерация эпителия роговицы, что в сочетании с интенсивной миграцией сосудов из области лимба создает условия для быстрого заживления дефекта. Именно созданием благоприятных факторов для регенерации роговицы, на наш взгляд, объясняется практически 100% успех послойной кератэктомии в сочетании с тарзоррафией. Хотя при данной методике часто удаляются участки роговицы до? глубины и до 70% по площади, наблюдается быстрая регенерация тканей в течение двух-трех недель. Безусловно, значительная разница в числе положительных результатов у здоровых кошек (из 17 клинически здоровых кошек только одна (5,9%) была положительна на ДНК FHV-1) по сравнению с больными (55,1%), показывает, что существует определенная связь между вирусом FHV-1 и корнеальным секвестром (M.P. Nasisse, T.L. Glover, P. Cecil, et al., 1998). Однако эти данные не во всех случаях доказывают причинную роль именно FHV-1. У значительной части кошек, являющихся носителями FHV-1, вирус в латентном состоянии находится в тройничном ганглии и возможно в других тканях, таких как роговица, обонятельные луковицы и носовые раковины. Современные исследования (W.M. Townsend, J. Stiles and S.G. Krohne, 2001) показали, что при исследовании образцов роговицы и тройничных ганглиев от 46 кошек, не имевших в анамнезе респираторных или глазных заболеваний, ДНК герпесвируса кошек была выделена из 48,9% (45/92) препаратов роговиц и 41,3% (38/92) - тройничных ганглиев. Поскольку стимуляция чувствительных нервных окончаний способна реактивировать латентную инфекцию, возможно, что часть ДНК, определявшаяся в образцах с корнеальным секвестром, относится к латентному вирусу, который был реактивирован корнеальным воспалением и центробежно распространился в пораженных тканях.

Симблефарон.

Это прирастание участка конъюнктивы к самой конъюнктиве или роговице. Теоретически любое заболевание, значительно повреждающее конъюнктиву, может предрасполагать к формированию симблефарона. Но, принимая во внимание быстрый и обширный некроз конъюнктивального эпителия, который можно наблюдать при FHV-1 инфекции, вирус можно рассматривать как идеальный фактор, инициирующий формирование симблефарона. По наблюдениям M.P. Nasisse подавляющее большинство случаев симблефарона у кошек ассоциировалось с переболеванием в прошлом инфекцией конъюнктивы и верхних дыхательных путей (возможно FHV-1).

Энтропион.

Относительно редкая патология у кошек. Может быть самостоятельной проблемой, связанной с породной предрасположенностью, но во многих случаях проявляется вторично из-за хронического болевого раздражения, вследствие вирусного кератита. Трудно установить, что является его причиной, а что лишь следствием, но так называемый «спастический энтропион» у кошек является потенциальным осложнением блефароспазма, связанного с хронической FHV-1-инфекцией.

Есть подозрение, что FHV-1 может являться причиной сухого кератоконъюнктивита у кошек. Данная гипотеза построена на результатах недавнего экспериментального изучения, в котором уменьшение слезопродукции наблюдалось у 5 из 10 кошек с хронической FHV-1-инфекцией. Хотя механизм развития рассматривают лишь теоретически, тем не менее возможно развитие денита слезной железы или заращения выводных протоков. В других случаях, уменьшение слезопродукции при FHV-1 инфекции носит лишь временный характер (M.P. Nasisse, 1990).

Заболевание длится в среднем 14-28 дней. При нормальном уровне иммунитета и отсутствии осложнений, связанных с действием вторичной бактериальной микрофлоры, клинические признаки ослабевают к 10-14 дню заболевания, полностью исчезая к четвертой неделе с момента заболевания. У взрослых кошек летальный исход отмечают относительно редко, за исключением сильно истощенных, обезвоженных животных, или животных со сниженным иммунитетом. Тяжело протекает инфекция у кошек с сопутствующими вирусными заболеваниями: калицивирусной или короновирусной инфекцией (инфекционным перитонитом), лейкозом или иммунодефицитом.

Смерть наиболее часто наступает в результате обезвоживания, а также из-за вторичной бактериальной инфекции, которая может привести к бронхопневмонии с последующим развитием отека легких.

Пути передачи инфекции

Естественный путь заражения вирусом FHV-1 - контактный (назальные, оральные или конъюнктивальные выделения), хотя в экспериментальных исследованиях были обнаружены и другие пути распространения. Например, у беременных самок внутривлагалищная инстилляция вируса приводит к вагиниту и врожденной инфекции котят, а внутривенное заражение - к трансплацентарной инфекции и выкидышам. Тяжесть инфекции детерминируется как инфекционностью инокулируемого вируса, так и иммунным статусом животного, и практически не зависит от наличия вторичной бактериальной микрофлоры (Hoover et al., 1970).

Может также произойти косвенная передача вируса через зараженные секреторные выделения в клетках, посуду и инвентарь, персонал и так далее (особенно внутри закрытых пространств в кошачьих питомниках). Но поскольку вирусы имеют относительно короткий срок существования вне организма кошки, внешняя обстановка, как правило, не является долговременным источником распространения вируса. Аэрозольный способ передачи вируса, как полагают, не имеет большой значимости, так как существуют определенные свидетельства того, что кошка не выделяет инфекционный аэрозоль респираторных вирусов во время обычной деятельности системы дыхания. Однако чихание может привести к выбросу больших капель на расстояние свыше 1-2 метров.

Эффективность передачи зависит также от количества вируса, выделяемого инфицирующим животным, а также от длительности и близости контакта. Несмотря на то, что количество вируса при выделении больным животным и носителем может быть одинаковым, вирусы легче передаются от больных в острой фазе заболевания, а не от вирусоносителей, так как выделения у первых, как правило, более обильные. Однако, носители несомненно имеют большую значимость там, где имеют место тесные контакты, например в питомниках (R.M. Gaskel, R.C. Povey, 1977).

Вирус появляется в носовых и ротоглоточных секреторных выделениях уже через 24 часа после заражения и, как правило, активно выделяется в течение 18-30 дней. В случае латентного носительства вирус способен реактивироваться под действием факторов, понижающих иммунитет (стресс, беременность, лактация, применение кортикостероидов, сопутствующее заболевание). Реактивация вируса происходит, в среднем, через 7-10 дней после, например действия стресса, период выделения вируса в таком случае продолжается от 3-4 до 14 дней.

Лабораторная диагностика инфекционного ринотрахеита кошек

Безусловно, в литературе описано значительное количество методов диагностики герпесвирусной инфекции кошек, но, в данной статье, хотелось бы остановиться на методах, имеющих на наш взгляд наибольшее практическое значение.

1. Выделение вируса на культуре клеток.

В 1958 году Crandell and Maurer продемонстрировали, что вирус FHV-1 растет и вызывает цитопатический эффект в культуре клеток почки кошки, что позволило создать in vitro систему для выделения и изучения свойств FHV-1.

Для выделения вируса FHV-1 мазок берут с поверхности конъюнктивы или слизистой оболочки ротоглотки, обычно используют стерильные тампоны из хлопка или дакрона. Сразу после взятия пробы тампон помещают в пробирку с 1-1,5 мл вирусной транспортной среды с антибиотиками. При необходимости пробы замораживают и сохраняют при –70оС. Для выделения вируса обычно используют культуру клеток почки кошки CrFK, выращенную на плашках (рис. 2).

Рис. 2. Перевиваемая культура клеток почки кошки – CrFK.

Зараженную культуру клеток инкубируют при 37оС и 5% СО2 в течение 10 дней, просматривая каждые 24-48 часов для обнаружения признаков цитопатического действия вируса ИРТ кошек (рис. 3.)

Рис. 3. Цитопатическое действие вируса FHV-1, штамм «Гранд» на культуру клеток CrFK:

а). ЦПД вируса через 48ч после инокуляции,

б). ЦПД вируса через 72 ч после инокуляции.

Для подтверждения и идентификации выделенного изолята вируса FHV-1 используют метод иммунофлюоресценции со специфической антисывороткой (Nasisse и др., 1993), а также электронную микроскопию.

Основными недостатками метода выделения вируса на культурах клеток являются: длительность (до 10 дней), высокая трудоемкость, сложность, высокая стоимость, невозможность выделения вируса в случае бактериальной контаминации образцов.

Вероятно, что незрелый, необладающий достаточной инфекционностью вирус, продуцируемый на некоторых стадиях FHV-1-инфекции, ограничивает чувствительность традиционного метода выделения вируса (Reubel and others, 1993). В дополнение к этому разрушение оболочек вирионов при транспортировке, связывание вируса антителами (образование комплекса вирус-антитело) на поверхности слизистых оболочек и деградация ферментами слюны и слезы кошек также в некоторых случаях являются возможным объяснением низкой чувствительности метода выделения вируса на культурах клеток.

2. Полимеразная цепная реакция.

Важным этапом в совершенствовании методов диагностики инфекционных заболеваний явилась разработка методов, позволяющих обнаруживать гены или последовательности нуклеиновой кислоты, специфичные для определенного вида возбудителя инфекционного заболевания. Создание принципиально нового способа исследования, получившего название полимеразной цепной реакции (ПЦР), открыло новые возможности для эпидемиологического анализа инфекционных заболеваний.

Принцип ПЦР был описан в 1986 г. К. Мюллисом. В основе этого метода лежит многократное копирование с помощью фермента ДНК-полимеразы определенного фрагмента ДНК, являющегося маркерным для данного вида. Механизм копирования таков, что комплементарное достраивание нитей может начаться не в любой точке последовательности ДНК, а только в определенных стартовых блоках. Для создания стартовых блоков в заданных участках ДНК используют затравки - олигонуклеотиды длиной 20-30 нуклеотидных пар (праймеры). Они комплементарны последовательностям ДНК на левой и правой границах специфического фрагмента и ориентированы таким образом, что синтез ДНК, осуществляемый ДНК-полимеразой, протекает только между ними. В результате происходит экспоненциальное увеличение количества копий специфического фрагмента по формуле 2n, где n - число циклов амплификации. Построение новых нитей ДНК из дезоксирибонуклеотидтрифосфатов осуществляет фермент термостабильная ДНК-полимераза. Процесс амплификации заключается в повторении циклов амплификации (состоящих из денатурации ДНК, отжига праймеров и построения фрагмента). В результате 30-35 циклов амплификации синтезируется 108 копий фрагментов, что делает возможным визуальный учет результатов после электрофореза в агарозном или акриламидном гелях. Использование термостабильной ДНК-полимеразы позволило автоматизировать процесс амплификации с помощью специального прибора, называемого термоциклером. Этот прибор автоматически осуществляет смену температур согласно заданной программе и числу циклов амплификации.

Метод ПЦР обладает высокой чувствительностью, дающей возможность обнаруживать единичные бактериальные клетки или вирусные частицы. Но это преимущество ПЦР уместно рассматривать при сравнении с другими молекулярно-генетическими или иммунологическими методами диагностики. Однако высочайшая чувствительность ПЦР обычно достигается при работе с чистой культурой микроба или, что еще лучше, с очищенной нуклеиновой кислотой. Эта чувствительность автоматически не трансформируется в чувствительность метода при работе с клиническим материалом. На успех определения при работе с этим материалом влияют такие факторы, как методика приготовления образца, возможное присутствие ингибитора фермента, осуществляющего амплификацию, объем образца при низких концентрациях тестируемых молекул.

Метод ПЦР превосходит метод выделения вируса на культурах клеток, особенно в случае бактериальной контаминации, которая мешает традиционной технике культивирования; более чувствителен и менее трудоемок.

Наличие вторичной бактериальной и грибковой инфекции может осложнять и маскировать первичную вирусную инфекцию, затрудняя клиническую диагностику. Таким образом, существенным является возможность определения вирусных протеинов или вирусной ДНК для подтверждения диагноза первичной вирусной инфекции. ПЦР может являться одним из методов подтверждения FHV-1 инфекции в гистологических образцах в подозрительных случаях.

К сожалению, диагностика FHV-1 инфекции с помощью ПЦР-амплификации имеет ограниченную клиническую ценность, поскольку могут выявляться латентные инфекции, широко распространенные у кошек, таким образом, невозможно будет определить, играет ли FHV-1 первичную роль в возникновении заболевания, или же он просто реактивировался из латентного состояния под действием стресса или сопутствующей инфекции. Немалую роль в ограничении использования ПЦР является дороговизна оборудования и реактивов, высокая требовательность к качеству реактивов, строжайшие требования к помещениям и организации работы в ПЦР-лаборатории для исключения контаминации образцов продуктами амплификации.

3. Реакция иммунофлуоресценции.

РИФ, предложенную Кунсом еще в 1942 году, трудно отнести к новым методам исследования. Но благодаря появлению гибридомных технологий, позволяющих получать моноклональные антитела, РИФ получила в настоящее время вторую жизнь, ее чувствительность и специфичность значительно увеличены.

Популярность РИФ объясняется экономичностью, наличием широкого спектра диагностических наборов, быстротой получения ответа. Чаще всего она используется для быстрого обнаружения возбудителя в патологическом материале. В этом случае из исследуемого материала как для обычной микроскопии готовят мазок на предметном стекле. Препарат фиксируют метиловым спиртом, ацетоном или другим химическим фиксатором, иногда входящим в состав диагностического набора. На поверхность фиксированного мазка наносят меченые ФИТЦ сыворотки или моноклональные антитела (в случае непрямой РИФ сначала препарат обрабатывают сывороткой против искомого антигена, а затем мечеными антителами к иммуноглобулинам, использованным на первом этапе (антивидовыми)). Поскольку РИФ является разновидностью гетерогенного анализа, один этап отделяется от другого промывкой.

Учет результатов реакции осуществляется с помощью люминесцентного микроскопа, в оптическую систему которого устанавливается набор светофильтров, обеспечивающих освещение препарата ультрафиолетовым или сине-фиолетовым светом с заданной длиной волны. Это заставляет флюорохром светиться в заданном диапазоне спектра. Исследователь оценивает характер свечения, форму, размер объектов и их взаимное расположение.

Если прямая РИФ может использоваться только для обнаружения антигена, то непрямой вариант этой реакции может быть использован помимо обнаружения антигена и для обнаружения антител. В этом случае готовят мазки из эталонного штамма возбудителя. Исследуемую сыворотку наносят на мазок. Если в ней присутствуют искомые антитела, то они связываются с антигенами микробных клеток. Промывка препарата буферным раствором позволяет удалить несвязанные антитела. Затем препарат обрабатывают меченой сывороткой против иммуноглобулинов (антивидовой). В случае положительного результата реакции при микроскопии мазка в люминесцентном микроскопе наблюдают специфическое свечение эталонной культуры.

В ветеринарной вирусологии РИФ активно используется для диагностики следующих вирусных заболеваний:

Вирус бешенства (непрямая),

Вирус иммунодефицита КРС (непрямая),

Коронавирус собак (непрямая),

Чума собак (непрямая),

Инфекционный перитонит (коронавирус) кошек (прямая),

Респираторный и репродуктивный синдром свиней (прямая).

РИФ является чрезвычайно ценным методом при диагностике FHV-1, при этом используют оба варианта РИФ. Для обнаружения вируса обычно берут эпителиальные клетки конъюнктивы (конъюнктивальную полость перед взятием пробы очищают от слизи и гнойных выделений), скарифицируют их под местной анестезией. При необходимости скарифицируют и эпителиальные клетки роговицы. Скарифицированные клетки помещают на предметное стекло, высушивают при комнатной температуре и фиксируют в ацетоне в течение 10 минут (рис. 4).

Рис. 4. РИФ при диагностике FHV-1:

а). Клетки, инфицированные вирусом FHV-1;

б). Скопление клеточных мембран инфицированных клеток.

Метод иммунофлуоресценции можно по праву отнести к экспресс-методам диагностики, поскольку он позволяет получить результат в течение 1-1,5 часов с момента взятия образца, прост в исполнении, не требует стерильной работы.

4. Гистохимический вариант ИФА или иммунопериксидазная реакция.

Иммунопероксидазная реакция аналогична методу иммунофлуоресценции, но отличается тем, что для постановки реакции используют антитела, меченные не флуорохромом, а ферментом, и учет реакции проводят не под люминесцентным, а под обычным световым микроскопом. Обычно, в этом варианте ИФА используют антитела, меченые пероксидазой. Материалом для выявления вирус-специфических антигенов или вирусов с помощью иммунопероксидазной реакции могут служить: мазки-отпечатки различных органов, парафиновые срезы, культура клеток, мазки крови. Аналогично РИФ иммунопероксидазную реакцию ставят в прямом и непрямом вариантах.

Прямой пероскидазный тест.

При выявлении антигена с его помощью используют противовирусные конъюгаты - конъюгаты, полученные из антител, выделенные из специфической сыворотки, и фермент. Например, культуру клеток, выращенную на покровных стеклах и инфицированную вирусом, или мазки-отпечатки фиксируют в течение 10 минут (например, охлажденным ацетоном), высушивают на воздухе и наносят иммунопероксидазный конъюгат в рабочем разведении. Инкубируют 1-2 часа при 37оС во влажной камере, ополаскивают дистиллированной водой и высушивают на воздухе. Наносят несколько капель раствора субстрата – диаминобензидинтетрахлорида, инкубируют 5-10 минут и промывают 10-15 минут в физиологическом растворе и ополаскивают дистиллированной водой.

В положительных случаях, то есть при наличии антигена в исследуемом препарате после нанесения иммунопероксидазного конъюгата образуется комплекс антиген-антитело, помеченный ферментом. После нанесения на препарат раствора субстрата, последний под действием фермента разлагается, образуя цветной продукт ферментативной реакции, хорошо видный в световом микроскопе.

Результаты учитывают с помощью светового микроскопа. Диаминобензидинтетрахлорид под действием пероксидазы разлагается, образуя продукт реакции голубого цвета, который быстро приобретает коричневый окрас. В препарате видны или диффузное желто-коричневое окрашивание, или гранулы коричнево-черного цвета. Вирус-специфический антиген в мазках и гистосрезах обнаруживают тем же способом.

Непрямой пероскидазный тест.

Используют антивидовые иммунопероксидазные конъюгаты. Преимуществом непрямого метода является универсальность меченых антивидовых глобулинов, а также большая чувствительность его по сравнению с прямым тестом. Методика его постановки отличается двумя этапами: на исследуемый образец наносят специфическую для исследуемого антигена сыворотку, после инкубации и промывания наносят антивидовой пероксидазный конъюгат в рабочем разведении и инкубируют при 37оС 1 час. Далее следуют этапы, описанные в разделе о прямом методе. При наличии в исследуемом материале вирус-специфического антигена после внесения специфической сыворотки образуется комплекс антиген-антитело, для выявления которого используют антивидовые или вторичные антитела, меченые ферментом; образуется более сложный, чем в первом случае, комплекс «антиген-антитело-вторичное антитело-фермент». Полученный комплекс выявляют добавлением субстрата, который под действием фермента разлагается, образуя цветной продукт ферментативной реакции. Учет результатов, как и в первом случае, проводят под световым микроскопом.

Иммунопероксидазная реакция в прямом и непрямом вариантах используется для выявления вирусов бешенства, ящура, герпесвирусов, энтеровирусов и др. На сегодняшний день, вероятно, это наиболее ценный метод для экспресс-диагностики FHV-1. Он позволяет получить четкий и быстрый диагноз, дает возможность обнаруживать как FHV-1-антиген, так и антитела к нему в мазках, мазках-отпечатках, смывах, образцах тканей и т.д. Постановка иммунопероксидазных тестов требует минимального количества реактивов и оборудования, не требует стерильности, проста в исполнении, может проводиться в любой лаборатории при наличии обычного светового микроскопа.

5. Иммуноферментный анализ.

ИФА – специфичный и универсальный метод, отличающийся высокой чувствительностью, удобный для автоматизации и стандартизации реагентов. В ИФА первый известный компонент (антитело или антиген) сорбируют на твердую фазу. Следующие компоненты, включая исследуемые пробы, вносят последовательно в жидком растворенном виде. Сформировавшиеся после инкубации иммунные комплексы антиген-антитело отделяют от непрореагировавших компонентов реакции при отмывании планшет. В ИФА используют противовирусные или антивидовые антитела, меченые пероксидазой хрена (ПХ) или другими ферментами, которые затем выявляются различными субстратами (диаминобензидин, 5-аминосалициловая кислота, о-фенилендиамин). Изменение цвета регистрируется визуально или спектрофотометрически, что дает возможность проводить количественный учет результатов анализа.

Разработаны различные варианты ИФА: прямые, непрямые, методы блокирования и конкурентные. В прямых вариантах используют меченые ферментом противовирусные антитела, в непрямых – антивидовые конъюгаты. В конкурентном варианте и методе блокирования типирование и титрование исследуемых антигенов и антител обеспечивается за счет вытеснения с их помощью определенного количества меченого антигена или антитела.

Для обнаружения антител к FHV-1 ИФА ставят на многолуночных микротитровальных плашках, сенсибилизированных антигеном FHV-1 по стандартной методике. Используют как моноклональные антитела, так и поликлональные анти-кошачьи IgG, в качестве ферментной метки чаще всего используют пероксидазу хрена. Определения показателя абсорбции проводят на автоматическом ИФА-ридере с фильтром 492 нм.

ИФА – универсальный, и на сегодняшний день наиболее чувствительный и совершенный метод определения антител к FHV-1 у кошек. Он позволяет определять уровень антител как в сыворотке крови, так и во внутриглазной и спинномозговой жидкостях, что необходимо при проведении любых научных и научно-практических исследований. С помощью ИФА можно проводить контроль эффективности вакцин против FHV-1 и иммунных сывороток, определять напряженность иммунитета, что позволяет оценить степень защиты животных от заражения и заболевания и т.д.

Заключение

Герпесвирусная инфекция по своей значимости занимает одно из ведущих мест среди инфекционных заболеваний кошек. Быстрый и точный диагноз является одним из важнейших факторов лечения и профилактики инфекционного ринотрахеита кошек. Применение методов иммунофлуоресценции, иммуногистохимии и иммуноферментного анализа для диагностики FHV-1 открывает новые перспективы в изучении и контроле этого серьезного заболевания.

Список литературы:

1. Detection of feline herpesvirus-1 DNA in corneas of cats with eosinophilic keratitis or corneal sequestration. Mark P. Nasisse, Tony L. Glover, Cecil P. Moore, Benjamin J. Weigler (American Journal Veterinary Research Vol. 59, No. 7, July 1998).

2. Detection of feline herpesvirus-specific antibodies and DNA in aqueous humor from cats with or without uveitis. David J. Maggs, Michael R. Lappin, Mark P. Nasisse (American Journal Veterinary Research, Vol. 60, No 8, August 1999).

3. Differential sensitivity of culture and polymerase chain reaction for detection of feline herpesvirus 1in vaccinated and unvaccinated cats. J.E. Sykes, G.F. Browning, G. Anderson, V.P. Studdert, H.V. Smith; (Archives of Virology 1997, 142; 65-74).

4. Feline Herpesvirus Ocular Disease. Mark P. Nasisse (Small Animal Ophthalmology, May, 1990).

5. Feline Viral Rhinotraheitis (FVR), Robert A. Crandell. Advances in veterinary science and comparative medicine. Vol. 17, Academic press New-York and London, 1973 (201-221).

6. High sensitivity polymerase chain reaction assay for active and latent feline herpesvirus-1 infection in domestic cats. B.J. Weigler, C.A. Babineau, B. Sherry, M.P. Nasisse. (The Veterinary Record, March 1997).

7. Immunologic, histologic and virologic features of herpesvirus-induced stromal keratitis in cats. Mark P. Nasisse; Robert V. English; Mary B.Tompkins; James S. Guy; Wendy Sussman (Am. J. Vet. Res, Vol. 56, No. 1, January 1995).

К.А. Перепечаев, Д.П. Кузнецов, В.И. Уласов, ВГНИИ контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов – центр качества ветеринарных препаратов и кормов, г. Москва, Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности, г. Щелково

Герпес – крайне серьезное заболевание, которое может поразить практически любого кота. Поэтому любителям этих пушистых питомцев обязательно следует знать про симптомы и лечение герпеса у кошек. Ведь если вовремя не начать лечение, то кот вполне может скончаться или же стать пожизненным носителем болезни. Поэтому очень важно узнать о заболевании побольше.

Как передается герпес

Начнем с того, что герпесвирусная инфекция у кошек в первую очередь представляет опасность для больных, старых или же наоборот, самых молодых особей. Передаваться он может различными способами. Чаще всего это :

• Воздушно-капельный – из-за контакта здорового животного с больным.
• Половым.
• Контактным – при использовании одних лотков и мисок.
• С испражнениями – если кошка понюхает кал или мочу носителя герпеса.

Особенную опасность болезнь представляет из-за того, что вирус может долгое время находиться без носителя. Специалисты утверждают, что вирус может жить до двух месяцев. С этим можно поспорить, но что герпесвирусные микроорганизмы представляют опасность до 4 суток, является доказанным фактом. То есть, достаточно больной кошке несколько раз чихнуть или сходить в туалет в плохо проветриваемом помещении, чтобы здоровый котенок, побывав здесь через 3-4 дня, также заразился. Особенную опасность герпес представляет из-за быстрой передачи.

Чаще всего заражаются герпесом в холодное время года. Причины заражения кошек вирусом герпеса расписаны выше, а хуже всего он протекает у больных, старых и молодых особей. Владельцам следует помнить об этом и при необходимости принимать дополнительные меры безопасности, чтобы не рисковать жизнью любимца.

Особенно плохо то, что заразиться герпесом от кошки может и человек. Особенно дети, которые не всегда соблюдают гигиенический режим. Зачастую они, поиграв с любимым котом, забывают помыть руки и садятся за стол или же просто трут глаза. Даже такая мелочь может представлять серьезную угрозу для здоровья человека.

Основные симптомы

Начинается герпес точно так же, как и большинство простудных заболеваний и ОРВИ. А вот к чему может привести впоследствии – зависит от возраста и самочувствия кошки. Если своевременно не обратиться к врачу или надеяться, что организм животного справится с болезнью самостоятельно, это может привести к самым печальным последствиям. Многие кошки просто умирают после долгой и мучительной болезни. Другие выживают, но становятся носителями герпеса на всю жизнь. Поэтому их придется пожизненно огородить от контактов с другими кошками – вероятность передачи болезни близка к 100%.

Поэтому очень важно как можно скорее выявить герпес и немедленно обратиться к врачу. Для этого нужно знать основные симптомы заболевания. Они могут проявляться по-разному, но наиболее характерны для герпеса следующие :

• Внезапное повышение температуры до 41.5 градусов.
• Гнойные выделения из глаз и носа.
• Кашель.
• Отек гортани.
• Тяжелое дыхание.

При осмотре можно заметить, что у домашних животных на слизистых в верхних дыхательных путях появляется белый налет. Ещё более заметен вирус герпеса у кота на губе – появляются небольшие прозрачные пузырьки.

Не менее заметен и глазной герпес у кошек – выделяется большое количество гноя из глаз.

Животное теряет аппетит, отказывается играть, много времени спит. В некоторых случаях заболевание сопровождается рвотой, повышенным слюноотделением. Ощупав шею и голову, можно заметить резкое увеличение лимфоузлов на шее и под челюстью. Тревожным симптомом станет развитие светобоязни и залипания век.

Заметив эти симптомы и убедившись, что состояние кошки не улучшилось на второй-третий день, обязательно обратитесь к ветеринару – скорее всего он обнаружит герпес у питомца. Обычно болезнь длится не больше 14 дней. После этого кот часто умирает.

Как проходит лечение

Некоторые владельцы пытаются вылечить кошек от герпеса народными средствами. Увы, как и в случае с большинством других вирусных заболеваний, это не приносит желаемого результата.

Более того, даже точно диагностировать вирус не всегда бывает просто – нужно сдать кровь на анализ, а также пройти смывы ротовой полости. Именно последний анализ обычно наиболее точен. Анализ крови часто показывает такие же результаты, как при микроплазмозе и некоторых других инфекциях .

Вылечить инфекционное заболевание далеко не всегда бывает легко. В ход идут антибиотики широкого спектра, а в наиболее запущенных случаях и химиотерапия. Также приходится прибегнуть к дополнительным мерам. Лечение герпеса должно быть комплексным – именно такой подход оставляет животному наилучшие шансы на выживание. Оно включает :

• Общую терапию – препараты для поддержки сердца, печени и почек, иммуностимуляторы.
• Местное лечение – обеззараживающие растворы и мази.
• Хороший уход – покой, хорошее, сбалансированное питание, комфорт.

Последний пункт особенно важен, поэтому к нему вернемся чуть позднее. Главное запомните — стресс и плохое питание могут добить кошку значительно быстрее, чем герпес.

Если же животное получает необходимую помощь, то уже через 2-3 суток здоровье идет на поправку. Полное выздоровление обычно наступает через 1-2 недели.

Но не стоит забывать – герпес очень коварная болезнь. Опытным ветеринарам знакомы случаи, когда выздоровевший кот оставался носителем болезни несколько лет.

Как видите, лечение заболевания кота – довольно сложная процедура. Именно поэтому нужно проявить максимум внимательности при выявлении заболевания, а в идеале делать всё, чтобы предотвратить герпес.

Правильный уход при лечении

Очень важно защитить больное животное от сквозняков. В комнате должно быть тепло, чтобы кошка не страдала ещё и от холода, в придачу к герпесу. Питание должно быть особенно сытным. Лучшим выбором станут натуральные продукты, богатые белками и жирами :

• мясо (куриный и говяжий фарш),
• рыба (если пресноводная, то лучше всего вареная),
• подогретое молоко,
• бульоны,
• каши на молоке.

Впрочем, если питомец привык к кошачьему корму, то не стоит менять рацион. Резкие изменения в питании станут причиной дополнительного стресса. К тому же кошки, привыкшие к покупному корму, часто голодают два-три дня, прежде чем перейти на здоровое питание. Такая голодовка для измученного тела кота представляет особую опасность.

Следите за чистотой кошачьей посуды. После каждого приема пищи тщательно промывайте её – не оставляйте еду в миске надолго. То же самое насчет лотка – старайтесь опорожнить его сразу после того, как кошка сходила в туалет.

Если в доме есть другие животные, особенно кошки, полностью исключите любые контакты с заболевшим животным. В идеале лучше будет отселить их (именно здоровых, чтобы не доставлять больному питомцу лишний стресс) на несколько дней в подходящее место. В противном случае возможность заражения приближается к 100%.

Позаботимся о профилактике

Всем известно, что любые острые инфекционные заболевания у кошек лучше предотвращать, чем лечить. И герпес вовсе не является исключением. Как же снизить риск поражения питомца болезнью?

Самый важный фактор – покой. Стресс, особенно постоянные, не проходящий, подрывает иммунную систему кошек. Старайтесь избегать резких, неожиданных звуков, насилия в отношении кошки.

Очень желательно, чтобы у питомца был уголок, в котором его никто не трогает – он сможет отдыхать там, чувствовать себя спокойно, в полной безопасности . Особенно это важно, если в квартире живут дети или другие питомцы (собаки, попугаи и прочие). Кошки по природе своей предпочитают уединение и возможность время от времени уходить от компании назойливых людей или животных, желающих поиграть, им жизненно необходима.

Старайтесь сократить до минимума контакт с другими животными, особенно бездомными или просто теми, владельцев которых вы не знаете. Если кошке предстоит участие в выставке, поговорите с организаторами и убедитесь, что среди конкурсантов нет тех, кто болеет герпесом или болел в последние несколько месяцев. Такой контакт может обернуться самыми неприятными последствиями для вас и вашей кошки.