Помощь по Теле2, тарифы, вопросы

В настоящее время все шире используются определение количества тромбоцитов и их распределение по величине (гистограмма) с помощью автоматических счетчиков крови, или гематологических анализаторов. Эти аппараты точны, и позволяют проводить экспресс-диагностику (определения выполняются за 1 мин). Подсчет тромбоцитов проводят согласно инструкции к аппарату. Бюджетные модели гематологических анализаторов определяют только количество тромбоцитов, а более совершенные приборы содержат полный анализ тромбоцитарного звена, и позволяют говорить о морфологии тромбоцитов. Развернутый анализ тромбоцитов на анализаторе позволяет определить такие показатели:

· РLТ - количество тромбоцитов. Норма от 150-400*10 9 /л; При выходе за эти пределы необходима микроскопия мазка.

· MPV - средний объем тромбоцитов. «Молодые» тромбоциты имеют больший объем. MPV увеличивается с возрастом. Норма: 8-10 фл

· PDW ширина распределения тромбоцитов по объему отражает степень анизоцитоза тромбоцитов. Норма = 14-16%.

· РСТ – тромбокрит, доля объема цельной крови, занимаемая тромбоцитами (аналогичен гематокриту). Норма = 0,15-0,40%.

Также гематологический анализатор строит график распределения тромбоцитов по размеру:

Рис. 2. Распределение тромбоцитов по объему.

Количество тромбоцитов в крови здорового человека колеблется в пределах 150-400 ×10 9 /л.

Снижение числа тромбоцитов (<150 ×10 9 /л) – тромбоцитопения – может наблюдаться при следующих патологических и физиологических состояниях:

· острый ДВС-синдром;

· острый лейкоз и миелодиспластические синдромы;

· гипо- и апластические анемии;

· нарушение образования в организме тромбоцитопоэтина;

· химиотерапия и лучевая терапия;

· тромботическая тромбоцитопеническая пурпура и гемолитико-уремический синдром;

· спленомегалия и гепатолиенальный синдром;

· гепарин-индуцированная тромбоцитопения;

· эклампсия и преэклампсия;

· экстракорпоральное кровообращение;

· гемодиализ у больных с хронической почечной недостаточностью, гемосорбция;

· интенсивная трансфузионная терапия;

· пароксизмальная ночная гемоглобинурия;

· иммунные формы патологии (СКВ и др. коллагенозы, АФС, иммунная тромбоцитопеническая пурпура);

Повышение числа тромбоцитов (>400 ×10 9 /л) – тромбоцтоз – наблюдается в следующих случаях:

· мегакариоцитарные и миелолейкозы,

· эритремия;

· вторичный, реактивный тромбоцитоз в случае спленэктомии (через 1-3 недели),

· внутриполостные кровоизлияния после оперативных вмешательств,

· спустя 7-10 дней от начала подострого токсико-инфекционного ДВС-синдрома,

· после перенесенного острого кровотечения,

· при злокачественных новообразованиях (предвестник опухоли легкого, поджелудочной железы)

· других причинах хронического ДВС-синдома.

Нормальное количество тромбоцитов может не обеспечивать полноценный гемостаз при нарушении функциональных свойств тромбоцитов - тромбоцитопатиях. Поэтому также исследуют функциональные свойства тромбоцитов способность к спонтанной и индуцированной агрегации различными индукторами (агонистами) агрегации: АДФ, коллагеном, ристоцетином и т. д. Для исследования функциональных свойств тромбоцитов используют плазму богатую тромбоцитами.

ВОПРОСЫ ДЛЯ ОБСУЖДЕНИЯ

1. Внутренняя среда организма. Эритроциты: строение, функции.

2. Эритропоэз: стадии и характеристики предшественников.

3. Регуляция эритропоэза: витамины и микроэлементы.

4. Регуляция эритропоэза: эритропоэтины и микроокружение.

5. Эритремия: этиология, патогенез, симптомы, принципы лечения.

6. Анемия: определение, симптомы, терапия.

7. Классификация анемий по цветовому показателю.

8. Классификация анемий по степени тяжести и по регенераторным способностям.

9. Этиологическая и патогенетическая классификация анемий.

10. Тромбоцитопоэз: стадии и характеристики предшественников.

11. Методы подсчета количества тромбоцитов: подсчет в камере Горяева.

12. Методы подсчета количества тромбоцитов: в тонком мазке крови.

13. Методы подсчета количества тромбоцитов: на гематологическом анализаторе. Тромбоцитарные показатели.

14. Тромбоцитопения: определение, причины.

15. Тромбоцитоз: определение, причины. Тромбоцитопатии.

Анализ на агрегацию тромбоцитов предназначается для того, чтобы исследовать агрегации тромбоцитов и иных клеток, определять в суспензии концентрации клеток и оценивать их формы. Регистрируется агрегация и турбидометрическим способом, и недавно разработанным способом, который основывается на оценке средних размеров агрегатов.

Анализатор агрегации тромбоцитов - что это

Турбидометрический способ анализатора агрегации тромбоцитов в настоящее время при исследованиях агрегации тромбоцитов является более распространенным. В его основе лежит регистрация изменений светопропускания плазмы, обогащенной тромбоцитами. Это позволяет проводить исследования не только агрегации, но также и изменений формы тромбоцитов. Изменение формы с другой стороны маскирует начальный этап агрегации. Помимо этого, показано, что на светопропускании суспензии образование малых агрегатов может не сказываться.

Также существует другой метод агрегации тромбоцитов, основанный на анализе флуктуаций светопропускания, которые вызваны случайным изменением в оптическом канале количества частиц. Отличается этот метод агрегации тромбоцитов высокой чувствительностью, благодаря чему он пригоден для исследований спонтанной агрегации, агрегации макромолекул и субклеточных частиц, агрегации под влиянием низких концентраций индукторов.

Преимущества анализатора агрегации тромоцитов

Развитие такого методического подхода позволило проводить измерения концентрации частиц в суспензии. Анализатор агрегации тромбоцитов поставляют в комплекте с программным обеспечением. Такая программа позволяет проводить:

• Автоматическую калибровку прибора;
• Сохранять на диске результаты записей с сопроводительной информацией;
• Осуществлять одновременный вывод для просмотра и печати любое число снятых ранее агрегатограмм;
• Делать статическую обработку одновременно нескольких кривых;
• Экспортировать результаты в пригодном для последующей обработки виде;
• Определить концентрацию тромбоцитов и иных клеток, контролируя при этом параметры среды и оценивая точность и достоверность полученных результатов.

Применяются:

• Для оценки эффективности терапии;
• В токсикологии;
• Для скрининга атерогенности липопротеидов;
• При диагностике состояний тромбоцитарного звена гемостаза;
• При диагностике приобретенных и врожденных нарушений гемостаза;
• Для скрининга новых лекарственных препаратов;
• Для оценки при переливании крови жизнеспособности тромбоцитарной массы.

Норма агрегации тромбоцитов по анализатору

Норма соответствует 25-75 процентам. Не редко бывают отклонения от нормы.

Повышенную агрегацию сопровождает ишемическая болезнь сердца и развитие инфаркта миокарда.

Сочетается аномальная агрегация с такими состояниями:

• Недостаток белков плазмы, который обеспечивает взаимодействие со стенками сосудов тромбоцитов;
• Нарушения тромбоцитов, спровоцированные дефицитами высвобождения АДФ, мест хранения и гликопротеиновых мембранных рецепторов;
• Наличие аномальных компонентов и метаболитов плазмы при синдроме внутрисосудистого диссеменированного свертывания, диспротеинемии, уремии;
• Сосудистые расстройства;
• Тромбастения Гланцманна (отсутствие при влиянии тромбина, адреналина, коллагена, АДФ агрегации, при действии ристоцетина нормальная агглютинация);
• Миелопролиферативные расстройства (миелоидная хроническая лейкемия, истинная полицитемия, эссенциальная тромбоцитемия);
• Синдром Бернара-Сулье (нормальная агрегация под влиянием адреналина, коллагена, АДФ, недостаток агглютинации под влиянием ристоцетина. При действии ристоцетина агглютинация отличается тем, что при добавлении нормальной плазмы она не корригируется.
• Дефицит циклооксигеназы (аспирино-подобный дефект, аномальная агрегация из-за неспособности активирования пути простагландина);
• Дефицит мест хранения (синдром серых тромбоцитов, гликогеноз типа I – аномальная агрегация бывает зачастую из-за снижения или отсутствия вторичного высвобождения АДФ);
• Агрегация тромбоцитов норма снижается (прием больших доз фуросемида, индометацина, ацетилсалициловой кислоты);
• Болезнь фон Виллебранда (при влиянии адреналина, коллагена, АДФ нормальная агрегация, снижение или отсутствие агглютинации при влиянии ристоцетина (исключая тип IIB, где при субнормальной концентрации ристоцетина осуществляется агглютинация).

• Новый высокочувствительный метод исследования агрегации - измерение среднего радиуса - позволяет регистрировать кинетику образования малых агрегатов в реальном времени
• Чувствительность при измерении спонтанной агрегации выше, чем у прибора Бреддина
• Два независимых канала; в каждом канале светопропускание и средний радиус агрегатов измеряются одновременно
• Результаты измерений могут регистрироваться с помощью встроенного дисплея или компьютера

Области применения:

• Диагностика состояния тромбоцитарного звена гемостаза
• Диагностика врожденных и приобретенных нарушений гемостаза
• Оценка эффективности терапии
• Скрининг новых лекарственных препаратов
• Оценка жизнеспособности тромбоцитарной массы при переливании крови
• Токсикология

Анализаторы агрегации НПФ БИОЛА предназначены для исследования агрегации тромбоцитов и других клеток, определения концентрации клеток в суспензии, а также оценки их формы. Агрегация регистрируется как традиционным турбидометрическим методом, так и недавно разработанным методом, основанным на оценке среднего размера агрегатов в реальном времени.

Турбидометрический метод, предложенный Борном и О"Брайеном, является в настоящее время наиболее распространенным при исследовании агрегации тромбоцитов. Он основан на регистрации изменений светопропускания обогащенной тромбоцитами плазмы. Это позволяет исследовать не только агрегацию, но и изменение формы тромбоцитов. С другой стороны, изменение формы может маскировать начальный этап агрегации. Кроме того, показано, что образование малых агрегатов (менее 100 тромбоцитов) может не сказываться на светопропускании суспензии. В 1989 году З.А. Габбасовым и соавторами был предложен новый метод исследования агрегации тромбоцитов.

Метод основан на анализе флуктуаций светопропускания (ФСП-метод), вызванных случайным изменением числа частиц в оптическом канале. Относительная дисперсия таких флуктуаций пропорциональна среднему размеру агрегатов, и используется для исследования кинетики агрегации. Метод отличается высокой чувствительностью, что делает его пригодным для исследования спонтанной агрегации, агрегации под действием низких концентраций индукторов, а также агрегации субклеточных частиц и макромолекул. Развитие этого методического подхода позволило также измерять концентрацию частиц в перемешиваемой суспензии.

В комплекте с анализаторами агрегации поставляется программное обеспечение. Программа выполняется на IBM-совместимом компьютере в среде Windows. Она отображает кривые агрегации в ходе эксперимента, сохраняет их вместе с временными метками и сопроводительной информацией на диске, и позволяет в дальнейшем их просматривать и обрабатывать.

Данный вид методов дает возможность дать наиболее полную оценку агрегационной способности тромбоцитов, поскольку в основе лежит количественная фотометрическая или спектрофотометрическая регистрация процесса агрегации при помощи агрегографов различной конструкции. Такие приборы осуществляют графическую регистрацию изменения оптической плотности тромбоцитарной плазмы при перемешивании ее со стимуляторами агрегации (рис. 16) . Образование тромбоцитарных агрегатов ведет к увеличению светопропускающей способности тромбоцитарной плазмы.

Рисунок 16. Прибор для автоматизированного исследования агрегации тромбоцитов.

Методы и лежащие в их основе принципы.

а) турбидиметрический метод Борна основан на регистрации изменений светопропускания обогащенной тромбоцитами плазмы, что позволяет исследовать не только агрегацию, но и изменение формы тромбоцитов. Однако изменение формы может маскировать начальный этап агрегации, а образование малых агрегатов (50-100 тромбоцитов) может вообще не сказываться на светопропускании суспензии.

б) ФСП-метод исследования агрегации тромбоцитов основан на анализе флуктуаций светпропускания (ФСП), вызванных случайным изменением числа частиц в оптическом канале. Относительная дисперсия таких флуктуаций пропорциональна среднему размеру агрегатов и используется для исследования кинетики агрегации. Метод отличается высокой чувствительностью , что делает его пригодным для исследования спонтанной агрегации и агрегации под действием низких концентраций индукторов. Развитие этого метода позволило также измерять концентрацию частиц в перемешиваемой суспензии.

Примером является использование двухканального лазерного анализатора агрегации тромбоцитов /счетчика LA220/230 (НФП БИОЛА, Россия). Данный прибор отличается от обычного турбидиметрического агрегометра, главным образом, наличием фильтра высоких частот и двухполупериодным выпрямителем, что позволяет использовать как стандартный турбидиметрический метод, так и ФСП-метод исследования агрегации тромбоцитов. Прибор выпускается в нескольких исполнениях: 220 LA выполняет измерение агрегации вышеописанными методами; 230LA имеет дополнительно функцию определения концентрации тромбоцитов (также ФСП-методом). Возможность определения концентрации тромбоцитов непосредственно при исследовании их агрегационной способности создает ряд преимуществ: с одной стороны, предоставляет полную диагностическую информацию, с другой – дает возможность определять агрегацию при стандартной концентрации тромбоцитов в плазме (200 тыс/мкл).Модель 230 LA-2 наряду с вышеперечисленными возможностями позволяет определять фактор Виллебранда; метод основан на исследовании агглютинации фиксированных тромбоцитов.

Агрегометры БИОЛА 230 LA подключаются к компьютеру. Программное обеспечение AGGR 2.41 удобно в работе и легко осваивается. Агрегограммы хранятся в памяти компьютера вместе с данными о пациенте. Это позволяет проводить анализ изменений показателей агрегации как у пациентов, находящихся на лечении в стационаре, так и у амбулаторных больных.

Результаты автоматизированного измерения агрегации тромбоцитов представлены на рисунке 17.

Рисунок 17. Результаты автоматизированного определения агрегации тромбоцитов (пояснения в тексте).

Полученные агрегатограммы анализируют по нескольким количественным параметрам : временя начала агрегации после добавления соответствующего стимулятора, амплитуда агрегатограммы на 2-й и 6-й минутах, общая площадь агрегатограммы и др. При использовании в качестве стимулятора агрегации тромбоцитов коллагена, тромбина, ристомицина регистрируют одну большую волну агрегации, а при добавлении к тромбоцитарной плазме малых доз АДФ – двухволновую агрегатограмму (рис.17а ).

На нормальных агрегатограммах, полученных при использовании в качестве стимулятора малых доз АДФ, 1-я волна регистрируемой кривой отражает начальную агрегацию тромбоцитов, обусловленную введением извне стимулятора этого процесса. 2-я волна связана с реакцией высвобождения из тромбоцитов собственных биологически активных веществ (адреналина, АДФ, тромбоксана А 2 и др.), которые усиливают начавшуюся агрегацию кровяных пластинок.

Большое значение в последние годы придают существованию тромбоцитопатий с нарушением реакции высвобождения , к которым, по-видимому, относится большая часть встречающихся во врачебной практике «необъяснимых» форм кровоточивости. При таких патологиях агрегатограмма демострирует отсутствие 2-й волны агрегации и раннюю дезагрегацию тромбоцитов (рис. 17б ).

При тромбастении Гланцмана в мембранах кровяных палстинок отсутствуют специфические рецепторы (гликопротеинов IIb и IIIa), необходимые для взаимодействия этих клеток со стимуляторами агрегации и фибриногеном. При этом резко нарушен процесс агрегации тромбоцитов под влиянием АДФ, адреналина и коллагена (рис. 17в ).

Охарактеризовать морфологические особенности нейтрофилов и их предшественников.