Количество гемоглобина можно определить или спектроскопически, посредством определения количества железа, или путем измерения красящей способности крови (колориметрически).

Для клинических целей используется последний метод, который требует небольшого количества крови и дает возможность быстро определить количество гемоглобина. Наиболее распространенным является метод Говерса в видоизменении Сали.

Определение гемоглобина по Сали основано на том, что гемоглобин крови в растворе соляной кислоты переходит в солянокислый гематин, который и сравнивается с гематином определенной концентрации, взятом в качестве стандарта. Процент гемоглобина в этом случае определяется колориметрически.

Набор Сали состоит из запаянной стандартной пробирки, наполненной раствором солянокислого гематина. Ввиду того, что стандартная жидкость довольно быстро выцветает, в последнее время выпущены стандарты из цветного стекла, окрашенные под цвет солянокислого гематина металлическими окислами. Эти стандарты не выцветают даже под действием прямого солнечного света.

Между стандартными пробирками помещается пробирка, имеющая деления от 10 до 140 или от 10 до 170 такого же диаметра, как и первая. Пробирка с делением от 10 до 140 предназначена для определения гемоглобина в единицах Сали, а от 10 до 170-в процентах.

Подставка, в которой помещаются стандартные и градуированные пробирки, представляет собою деревянную колодку с вырезанными продольными отверстиями и углублениями для них. Сзади колодки прикреплено матовое стекло, которое дает рассеянный свет; на его фоне резко оттеняется окраска стандарта и испытуемой сыворотки.

Для взятия крови прилагается капиллярная пипетка с меткой 20 мм, которая определяет количество крови, взятой для исследования.

Кроме гемоглобинометра, для определения гемоглобина необходимо иметь N/10 раствор НС1 и дистиллированную воду.

Техника определения следующая. В градуированную пробирку до метки 20 набирается N/10 раствор НС1, затем в капилляр до метки 20 мм3 насасывается кровь и, осторожно очистив конец капилляра, переносят ее в пробирку

С соляной кислотой. Кровь осторожно выдувают в А710 раствор соляной кислоты, содержимое пробирки из верхнего прозрачного слоя набирается в капилляр и снова выдувается в пробирку.

Капилляр промывается 2 или 3 раза и осторожно удаляется из пробирки. Кровь гемолизируется, и при распаде образуется солянокислый гематин. Жидкость постепенно становится коричневой. Спустя 5-7 минут после выдувания крови, в пробирку начинают прибавлять дистиллированную воду. Вначале прибавляют по нескольку капель, а затем, по мере изменения цвета и приближения его к стандарту,-то одной капле. Кровь смешивается или стеклянной палочкой с утолщением на конце или же покачиванием прсбирочки. Необходимо следить за тем, чтобы жидкость при смешивании не терялась.

Уровень жидкости после разведения указывает на количество гемоглобина. Учет ведется по нижнему мениску жидкости. Допустимой ошибкой при вторичном исследовании той же самой крови считается расхождение в пределах пяти делений. Метка 80 на пробирке с делением до 140 и цифра 100 на пробирке с делением до 170 соответствует 16,0-17,0 гемоглобина в 100 мл крови. Чтобы получить абсолютную цифру, показывающую количество гемоглобина в граммах в 100 мл крови, необходимо показания гемометра в процентах Сали умножить на 0,17, а количество в единицах- на коэффициент 0,2125.

Количество гемоглобина у здоровых животных колеблется в следующие пределах (см. табл. на стр. 418).

Колебания гемоглобина зависят от возраста, пола, породы, характера кормления и некоторых других условий. При патологических процессах количество гемоглобина может быть увеличено и уменьшено по сравнению с нормальными показателями.

Увеличение количества гемоглобина носит название плейохромии. Она может возникнуть вследствие сгущения крови при потере жидкости организмом (понос, рвота, потливость), при образовании экссудатов и транссудатов, Плейохромию отмечают при кровепятнистой болезни лошадей, интоксикациях и отравлениях. Повышение количества гемоглобина отмечается при физическом напряжении лошади. При хорошей подготовке (тренировка) количество гемоглобина остается почти без изменений.

Уменьшение гемоглобина (олигохромемия) встречается довольно часто и особенно при заболеваниях, связанных с анемией. Олигохромемия является симптомом острых и хронических заболеваний, различных по своему происхождению.

Олигохромемия связана с уменьшением общего количества эритроцитов или обеднением эритроцитов гемоглобином. Следовательно, олигохромемия определяет не только степень, но и характер анемии. Необходимо, однако, учесть, что правильная оценка может быть сделана только при условии подсчета эритроцитов и определения величины цветного показателя.

Определение цветного показателя. Цветной показатель дает представление об отношении гемоглобина к красным кровяным тельцам. Метод определения цветного показателя основан на сравнении. Если в норме цветной показатель равен примерно единице, то изменение этой цифры в сторону увеличения или уменьшения рассматривается, как весьма важный показатель нарушения соотношения между эритроцитами и гемоглобином.

У животных определение цветного показателя проводится по формуле:

Гемоглобин 2 Эритроциты 2 Гемоглобин 2 х эритроциты 1

Гемоглобин 1 / эритроциты 1 = гемоглобин 1 x эритроциты 2

Где гемоглобин 1 и эритроциты 1 показывают среднее количество гемоглобина и эритроцитов у здорового животного и гемоглобин 2 и эритроциты 2-найденное количество гемоглобина и эритроцитов у исследуемых животных. Если у лошади взять за норму количество гемоглобина 75, а эритроцитов 7 500 000, то цветной показатель будет равен единице. Всякое отклонение в количестве гемоглобина и эритроцитов поведет к изменению цветного показателя. Необходимо учитывать только такие отклонения от нормы, которые превышают 15%. Небольшие отклонения учитывать не следует.

Определение цветного показателя имеет значение в дифференциации анемий. При постгеморрагических анемиях, когда имеется одновременно уменьшение как количества эритроцитов, так и гемоглобина, цветной показатель приближается к единице; ниже единицы цветной показатель бывает при вторичных анемиях, при которых снижается количество гемоглобина, при почти нормальном или слегка сниженном количестве эритроцитов; выше единицы цветной показатель отмечается при гемолитических анемиях, когда в ток крови выбрасывается значительное количество молодых клеток (повышенная регенерация).

Для суждения о средней насыщенности эритроцитов гемоглобином практически можно использовать определение кровяного числа. Оно получается делением найденного количества гемоглобина на число эритроцитов в миллионах, например:

75% / 7(000000) = 11 или 90% / 10(000000) =9

Величина кровяного числа неодинакова у различных животных и зависит от количества эритроцитов и гемоглобина в норме, но в среднем она приближается к 10.

Уменьшение количества эритроцитов и гемоглобина в единице объема крови называется Анемией. Она бывает абсолютной и относительной. Абсолютная полицитемия развивается вследствие раздражения красного костного мозга, при заболеваниях легких (эмфизема), сердца (пороки сердца). Относительная полицитемия развивается в условиях обезвоживания организма (при усиленном потоотделении, поносах, рвоте) В зависимости от причины происхождения различают несколько видов анемий: постгеморрагическая, гемолитическая, алиментарная, инфекционная, злокачественная.

Качественные изменения эритроцитов:

Гипохромазия - появление эритроцитов со слабой окраской, обусловленной малым содержанием гемоглобина. Такие эритроциты появляются после кровопотерь.

Гиперхромазия - появление эритроцитов с более интенсивной окраской чем в норме. Обусловлено это явление большим чем в норме содержанием гемоглобина в эритроцитах. Наблюдается при токсической и злокачественной анемии.

Полихромазия - способность эритроцитов окрашиваться и кислыми и основными красками. Это явление связано с наличием в протоплазме эритроцитов участков разной степени зрелости.

Пойкилоцитоз - наличие эритроцитов разной формы (в виде гири, запятой, грушевидные, овальные). Возникают эти формы в самой крови из менее стойких эритроцитов.

Анизоцитоз - появление эритроцитов разных размеров (микро-и макроцитов). Пойкилоцитоз и аишоцитоз свидетельствуют о функциональной недостаточности работы костного мозга.

Включения в эритроцитах могут быть как остатки ядерной субстанции - (Тельца Жолли ) или ядерной оболочки (Кольца Кабо ).

К включениям относятся и базофильная пунктация - мелкая зернистость синего цвета. Наблюдается при отравлении солями тяжелых металлов (солями свинца).

Патология красной крови

Цель занятия . Изучить нарушения, возникающие в животном организме при изменении количества крови, количественного и качественного состава ее форменных элементов

Задание 1 . Изучить последствия изменений общей массы крови у животных. Влияние гиперволемии на кровообращение в сосудах языка лягушки.

Оснащение: Препаровальные дощечки, Булавки, кюветы, микроскопы; шприцы на 5 мл с иглой, глазные пипетки; раствор Рингера (100 мл), 10%-ный раствор этилового спирта (300 мл); лягушки.

Постановка опыта . Лягушку наркотизируют алкоголем, помещают на препаровальную дощечку брюшком вверх. Булавками фиксируют верхнюю челюсть у края круглого отверстия и все четыре лапки. Иссекают кожу и грудную кость над областью сердца для лучшего доступа к сердечной мышце. Из ротовой полости осторожно извлекают язык, расправляют его над отверстием. Препарат кладут на предметный столик стереоскопического или обычного микроскопа. Изучают микроскопическую картину кровоснабжения ткани языка. В полость желудочка вводят 5-6 мл раствора Рингера и наблюдают за характером кровотока. Обращают внимание на скорость движения крови, число функционирующих сосудов, количество форменных элементов в осевом слое тока крови. Сопоставляют с исходным кровотоком.

Оформление протокола опыта . Записывают ход эксперимента. Отмечают изменения кровотока, возникшие после существенного увеличения объема циркулирующей крови.

В опытах на животных изучить изменения количественного и качественного состава эритроцитов

Моделирование и изучение гемолитической анемии у животных.

Оснащение : клетки для кроликов; кюветы; шприцы на 5 мл с иглой; смесители для красной крови; микроскопы; камеры Горяева; электрофотоколориметр; стандартный набор для определения гемоглобина гемоглобинцианидным методом; гемометры Сали; аппараты Панченкова для определения СОЭ; вата (50 г); фильтровальная бумага (30 г); 5%-ный раствор фенилгидразина (20 мл); 70%-ный раствор этилового спирта (20 мл); 1%-ный раствор натрия хлорида (70 мл); 0,1 н. раствор хлористоводородной кислоты (5 мл); 5%-ный раствор лимоннокислого натрия (5 мл); подопытные животные: кролики или животные с анемией (поросята).

Постановка опыта . На кролика массой тела более 2 кг действуют гемолитическим ядом - фенилгидразином, вызывающим тяжелую форму анемии. За четыре дня до занятий кролику в краевую вену уха в течение трех дней подряд вводят 1%-ный раствор фенилгидразина из расчета 1 мл на 1 кг массы тела. В день занятий измеряют ряд показателей красной крови у подопытного и контрольного кроликов. Можно использовать анемичных поросят.

Пробы периферической крови берут из сосудов уха, для чего выстригают шерсть, кожу протирают спиртом, после высыхания прокалывают краевую вену уха иглой, вытекающую кровь используют для анализов.

Определение числа эритроцитов. В абсолютно чистый и высушенный смеситель для красной крови набирают кровь до метки 0,5. Манипуляцию взятия проводят быстро. При этом следят, чтобы не попали пузырьки воздуха. После взятия крови кончик капилляра быстро вытирают ваткой или фильтровальной бумагой, погружают в сосуд с 1%-ным раствором натрия хлорида и набирают до метки 101. Смеситель закрывают с обоих концов большим и средним пальцами рук и осторожно встряхивают содержимое в течение 1-2 мин для получения равномерной взвеси эритроцитов. Получают разведение крови в 200 раз. Подсчет форменных элементов красной крови осуществляют в камере Горяева (рис.17), которую предварительно покрывают шлифованным стеклом, притертым до появления радужных кругов (ньютоновых колец). Из меланжера (смесителя) удаляют на ватку три первые капли содержимого, а затем одну капельку взвеси эритроцитов подводят под среднюю пластинку камеры, куда жидкость поступает в силу капиллярности. Между покровным стеклом и пластинкой не должно быть пузырьков воздуха.

Поверхность сетки раз-делена на большие и малые квадраты. Часть больших разделена на 16 малых квадратов, площадь каждого составляет 1/400 мм2, высота всех камер равна 1/10 мм. Таким образом, объем малого квадрата 1/4000 мм. Подсчет клеток проводят под малым увеличением микроскопа в пяти больших квадратах, начиная с левого квадрата по диагонали. Считают эритроциты расположенные в каждом маленьком квадрате, и те, которые касаются левой и верхней стенок. Эритроциты, касающиеся правой и нижней стенок, не учитывают.

Для определения числа эритроцитов в 1 мкл крови (X ) Используют формулу

Где А - Число эритроцитов в пяти больших квадратах; B – степень разведения крови (1: 200); В – Количество маленьких квадратов в пяти больших (80); 4000 - 1/4000 объема счетной камеры над маленьким квадратом, мкл.

Для определения числа эритроцитов в 1 л крови (X ) Используют формулу Х=А – 1010.

Получают величину Т/л, где Т - Тера, равна 10 .

Определение количества гемоглобина. Наиболее точен гемогло-бинцианидный колориметрический метод. Для анализа берут опытную, стандартную и контрольную пробы. Для подготовки опытной пробы к 5 мл трансформирующего раствора добавляют 20 мкл (0,02 мл) испытуемой крови, тщательно перемешивают и оставляют стоять в течение 10 мин. Затем колориметрируют при зеленом светофильтре (длина волны 500-
560 нм) в кювете с толщиной слоя 10 мм против контрольной пробы, в качестве которой берут трансформирующий раствор. Стандартная проба - это стандартный раствор гемоглобинцианида, ее исследуют в том же порядке, что и опытную пробу.

Количество гемоглобина (Н B , Г на 100 мл) определяют по формуле

Где Еоп - Оптическая плотность опытной пробы; Ест - оптическая плотность стандартной пробы; С - Концентрация гемоглобинцианида в стандартном растворе (59,75 мг на 100 мл); 0,001 - коэффициент для пересчета мг в 1 г; К- Коэффициент разведения крови (251).

Для установления количества гемоглобина в 1 л крови полученную цифру нужно умножить на 10.

Для определения количества гемоглобина в крови можно использовать метод Сали. Он менее точен, чем предыдущий, но прост в исполнении и широко распространен. Гемометр Сали (рис.18) состоит из трех пробирок одного диаметра, помещенных в штатив, задняя стенка которого выполнена из стекла молочного цвета. Средняя пробирка пустая, она отградуирована и предназначена для исследуемой крови. Обе боковые Пробирки запаяны и наполнены стандартным эталонным раствором, содержащим 167 г/л гемоглобина. К гемометру приложены капиллярная пипетка емкостью 20 мм3, пипетка для воды, стеклянная палочка для размешивания.

Принцип определения заключается в том, что под действием разведенной хлористоводородной (соляной) кислоты гемоглобин превращается в солянокислый гематин. Полученный раствор гематина разбавляют в градуированной (средней) пробирке дистиллированной водой до тех пор, пока его цвет не совпадет с цветом стандартных растворов. Количество гемоглобина устанавливают по уровню жидкости в градуированной пробирке в соответствии с имеющейся шкалой.

Для выполнения исследования в градуированную пробирку приливают 0,1 н. раствор хлористоводородной кислоты до метки 0. Из свежей капли крови кролика капиллярной пипеткой набирают 20 мкл. Оттуда кровь (без потерь) приливают к хлористоводородной кислоте в градуированной пробирке, тщательно встряхивают и оставляют стоять в штативе гемометра на 5-10 мин до образования прозрачной бурой жидкости - солянокислого гематина. Дистиллированную воду капают до тех пор, пока цвет жидкости не сравняется с цветом стандартных растворов гемометра Сали. При этих условиях количество гемоглобина будет одинаковым в стандарте и в исследуемой крови. Отсчет ведут по нижнему мениску жидкости в градуированной пробирке, шкала которой показывает абсолютное содержание (г/100 мл) гемоглобина в исследуемой крови. Далее рассчитывают содержание гемоглобина в ммоль/л. Используют формулу

Где В - Количество гемоглобина (г/100 мл, г%), 0,6206 - коэффициент пересчета. Например, 5 = 9 г%, тогда 9 ∙ 0,6206 = 5,6 ммоль/л (по системе СИ).

Вычисление цветового показателя (ЦП). Для определения степени насыщенности эритроцитов гемоглобином используют формулу

Где Hb 1 - среднее количество гемоглобина в норме (г/л); Н B 2 - Количество гемоглобина у исследуемого животного (г/л); Е1 - среднее число эритроцитов в норме (1 ∙ 1012/л); E2 - среднее число эритроцитов у исследуемого животного (1 ∙ 1012/л).

Вычисление среднего содержания гемоглобина в одном эритроците. Для определения этой величины используют данные о содержании эритроцитов и количестве гемоглобина в 1 мкл (1 л) крови. Для вычисления содержания гемоглобина в одном эритроците (СГЭ), выраженного в пг (1 пг = 1 × 1012 г), применяют формулу

Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ) по методу Панченкова. Вычисляют скорость разделения цельной крови на плазму светло-желтой окраски и форменные элементы красной окраски за счет гемоглобина эритроцитов. Для определения берут градуированный стеклянный капилляр (от 0 до 100 мл), промывают его 5%-ным раствором лимоннокислого натрия. Набирают раствор до метки Р (высота 50 мм) и выпускают на часовое стекло. Из капли крови, взятой от кролика, в тот же капилляр дважды набирают кровь до метки К И приливают ее к раствору лимоннокислого натрия в часовое стекло, тщательно перемешивая жидкости. Затем капилляр наполняют цитратной кровью и укрепляют в штативе в строго вертикальном положении (рис.19). Результат оседания эритроцитов отмечают через час. Выражают СОЭ в мм/ч.

Рис.19. Штатив и капилляры для определения СОЭ

Таким образом, у контрольного и интактного кроликов определяют содержание в крови числа эритроцитов, количество гемоглобина, цветовой показатель, среднее содержание гемоглобина в одном эритроците, СОЭ. Используя полученные данные, составляют общую картину изменений красной крови при гемолитической анемии.

Оформление протокола опыта. Кратко описывают принципы определения показателей красной крови, использованные в эксперименте. Выполняют расчеты по рекомендованным формулам, фиксируют в протоколе. Полученные данные вносят в таблицу. Объясняют механизм изменений картины крови при гемолитической анемии.

Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

Размещено на http://www.allbest.ru/

ИССЛЕДОВАНИЕ СИСТЕМЫ КРОВИ

План

1. Определение гемоглобина и клиническая интерпретация результатов

2. Подсчет количества эритроцитов и клиническая оценка изменения их числа

3. Расчет индексов красной крови и их значение в дифференциальной диагностике анемий

4. Методы и клиническое значение определения количества лейкоцитов

1. Определение гемоглобина и клиническая интерпретация результатов

Для определения концентрации гемоглобина предложено довольно большое количество различных методик. Наибольшее распространение получили колориметрические, основанные на колориметрии производных гемоглобина.

Кроме этих иногда применяют газометрические методы (Hb насыщают кислородом или углекислым газом и по их количеству определяют концентрацию Hb). Также существует метод, основанный на определении железа в гемоглобине, который содержит 0,347% элемента.

В качестве унифицированного и даже стандартного метода в медицине принят цианметгемоглобиновый метод с применением ацетонангидрина. Принцип методики основан на том, что гемоглобин окисляется в метгемоглобин (гемиглобин) под действием железосинеродистого калия (красной кровяной соли). Образующийся с ацетонангидрином окрашенный цианметгемоглобин (гемоглобинцианид) определяют на фотоэлектроколориметре, спектрофотометре или гемоглобинометре.

При определении гемоглобина этим методом 0,02 мл (20 мкл) крови (стабилизированной или свежеполученной) вносят в 5 мл трансформирующего раствора, который состоит из ацетонциангидрина, железосинеродистого калия и гидрокарбоната натрия. Раствор хорошо перемешивают, оставляют на 10 мин, после чего колориметрируют при длине волны 500-560 нм (зеленый светофильтр) против «холостой пробы» (трансформирующий раствор). Расчет производят по колибровочному графику.

Наиболее простым и также достаточно широко распространенным в лабораторной практике является колориметрия солянокислого гематина, на котором основан метод Сали (1895 г.). Для этого необходим гемометр, представляющий собой штатив, в котором имеются три пробирки. В крайних пробирках находится стандарт и они запаяны, средняя пробирка имеет градуировку. В нее, до нижней метки наливают 0,1 н раствор соляной кислоты, затем вносят 0,02 мл стабилизированной крови. Для того, чтобы эритроциты полностью разрушились, ждут 5 мин. (при исследовании крови млекопитающих) или 10 мин. (при исследовании крови птиц). Гемоглобин, взаимодействуя с HCl, превращается в солянокислый гематин, имеющий темно-коричневый цвет. Затем в пробирку приливают по каплям дистиллированную воду до тех пор, пока проба по цвету не будет соответствовать стандарту. Результат считывают по шкале, нанесенной на пробирку.

Метод чрезвычайно прост и быстро выполним, но недостаточно точен. При суммировании различных погрешностей этого метода ошибка составляет +30%. Поэтому в настоящее время метод не может быть рекомендован для лабораторной практики.

У здоровых животных концентрация гемоглобина составляет (г/л): крупный рогатый скот - 100-130; овца - 90-133; коза - 100-150; лошадь - 80-140; свинья - 90-110; собака - 110-170.

Увеличение концентрации гемоглобина называется гиперхромемия. Наблюдается при диарее, рвоте, гипергидрозе, образовании экссудатов и транссудатов, миоглобинурии, эмфиземе легких. Гипохромемия (олигохромемия) или уменьшение количества гемоглобина чаще регистрируется при анемии. При этом следует иметь ввиду, этот симптом является типичным для т.н. дефицитных форм анемии (недосточность железа, витамина В 12 , ферментов идр.).

Определение концентрации гемоглобина имеет также прогностическое значение. Прекращение снижения или постепенное повышение концентрации гемоглобина является благоприятным симптомом, уменьшение же его количества до 50 г/л - это неблагоприятный признак. Выявление показателя в 30 г/л является угрожающим для жизни животного симптомом.

ГЕМАТОКРИТ

Гематокрит представляет собой объемную фракцию эритроцитов в цельной крови. Зависит от количества эритроцитов и их объема. В современных гематологических анализаторах показатель гематокрита устанавливается расчетным методом -- по параметрам, выводимым из количества эритроцитов и их объема.

В норме гематокрит составляет 0,40-0,50 л/л крови; у новорожденных несколько выше.

Биологическим материалом для исследования служит венозная или капиллярная кровь. Венозная кровь берется с трилоном Б (ЭДТА); капиллярная собирается в гематокритный капилляр, обработанный гепарином.

Повышение гематокрита может быть связано либо с гиперпродукцией эритроцитов, либо с увеличением их размера.

Показатель гематокрита увеличивается при: эритроцитозах;

полицитемии -- заболевании, связанном с усилением продукции клеток «красной» крови;

компенсаторной реакции, направленной на улучшение снабжения тканей кислородом, например, у больных, страдающих хроническими заболеваниями легких, легочной недостаточностью, тяжелыми пороками сердца, при нахождении на больших высотах, при почечной патологии (сужении почечных артерий, вызывающем недостаточное кровоснабжение и гипоксию ткани почек;

заболеваниях самих почек при образовании в почках полостей, заполненных жидкостью; новообразованиях почек, сопровождающихся усилением образования эритропоэтина. При всех этих состояниях усиливается выработка в почечной ткани особого вещества -- эритропоэтина, способствующего повышению продукции эритроцитов костным мозгом, возрастанию гематокрита. Его увеличение происходит и при беременности.

Увеличение гематокрита относительного характера наблюдается при обезвоживании организма, вызванном разными причинами, в том числе: перемещением жидкости в кишечник (при его непроходимости); потерей содержимого желудочно-кишечного тракта при неукротимой рвоте, профузных поносах (сопровождается сгущением крови, а следовательно, и увеличением гематокрита), чрезмерном потоотделении, ожоговой болезни, перитоните;

нахождении на больших высотах.

Уменьшение содержания эритроцитов и показателя гематокрита может наблюдаться при:

потере крови (острых кровотечениях);

снижении темпа образования эритроцитов в костном мозге;

ускоренном разрушении красных кровяных телец;

увеличении объема крови при нормальном содержании в ней эритроцитов (например, после внутривенного введения жидкости больным со сниженной выделительной функцией почек); анемии;

увеличенном объеме циркулирующей плазмы при беременности (особенно во второй половине); гиперпротеинемии; гипергидратации.

2. Подсчет количества эритроцитов и клиническая оценка изменения их числа

Эритроциты, также как лейкоциты и тромбоциты относятся к форменным элементам крови. Эритроциты - самые многочисленные форменные элементы крови, которые содержат гемоглобин. Следовательно, их основная функция в организме - осуществление газообмена. С помощью гемоглобина эритроциты переносят кислород и углекислоту. Кроме того, эритроциты доставляют клеткам аминокислоты и липиды, принимают участие в регуляции кислотно-щелочного равновесия, выполняют защитную и другие жизненно важные функции, которые более подробно рассматривали в курсе физиологии.

Содержание эритроцитов в крови здоровых животных и птицы довольно постоянное, поэтому установление изменения их количества имеет диагностическое значение. Правда, колебания их числа можно наблюдать в зависимости от времени суток исследования, возраста, пола, продуктивности, физической нагрузки животного. Так, например, количество эритроцитов днем несколько меньше чем вечером, у новорожденных их содержание выше чем у взрослых, также как и у самцов по сравнению с самками. У высокопродуктивных коров показатели содержания эритроцитов выше чем у малопродуктивных. Установлено также, что у лошадей после физической нагрузки (например 10- минутная прогонка рысью - проба по Домрачеву) число эритроцитов увеличивается на 20 и более процентов.

Все эти факторы необходимо учитывать при клинической оценке результатов определения количества эритроцитов. Для подсчета эритроцитов предложено несколько методов, из которых унифицированными в медицинской практике являются два:

1. Подсчет в счетной камере с применением микроскопа;

2. Подсчет посредством электронных автоматических счетчиков. Ранее практиковались методы определения числа эритроцитов с помощью эритроседиометра (градуированной пробирки для определения СОЭ по Неводову), эритрогемометра и фотоэлектроколориметра, однако, из-за низкой их точности, в настоящее время они не используются. Погрешность же метода подсчета форменных элементов в камере составляет + 2-5%, а в автоматических анализаторах и того меньше - до + 2%. Это и предопределяет широкое применение названных методов не только в лабораторной практике, но и в научных исследованиях.

Подсчет эритроцитов в камере. Принцип метода заключается в том, что точное количество крови равномерно смешивают с определенным количеством жидкости. Разведенную кровь помещают в камеру с известным объемом. На дно камеры нанесена сетка, благодаря которой возможен точный подсчет эритроцитов посредством микроскопии.

Предложено несколько счетных камер, из которых наибольшее распространение в странах бывшего СССР получила счетная камера с стекой Горяева. Ее нередко так и называют "камера Горяева", хотя фактически это камера Бюркера с сеткой Горяева (1910).

Счетная камера - это толстое предметное стекло с четырьмя поперечными желобками, между которыми расположены три плоскости. Средняя плоскость на 0,1 мм тоньше боковых и разделена продольным желобом на две равные половины, на каждой из которых выгравирована сетка Гряева. Если на боковые плоскости камеры наложить покровное стекло и притереть его до появления радужных колец, т.н. "колец Ньютона", то над средней плоскостью будет щелевидное пространство высотой 1/10 мм.

Сетка Горяева имеет размер 3x3 мм, т.е. ее площадь равна 9 мм 2 . На ней нанесено 225 больших квадратов, 25 из которых разделены на 16 маленьких, 100 квадратов не разграфлено и еще 100 разделены на прямоугольники. Площадь одного маленького квадратика составляет 1/400 мм, а объем камеры над ним - 1/4000 мм.

Что касается техники подсчета эритроцитов, то здесь соблюдают следующую последовательность этапов: 1) разведение крови; 2) заправка счетной камеры; 3) собственно подсчет клеток; 4) расчет абсолютного количества эритроцитов.

1 этап. Поскольку эритроцитов в крови содержится значительное количество, например у коровы массой 400 кг - более 125 млрд. клеток, то определить их количество возможно только после разведения крови. Для разведения чаще применяют 0,85-3%-й раствор натрия хлорида или 5%-й раствор натрия цитрата. Применение растворов большей или меньшей концентрации недопустимо, поскольку приведет к разрушению эритроцитов.

Кровь разводят или в меланжере-смесителе для эритроцитов, или в пробирке (по Н.М.Николаеву, 1954). Меланжер представляет собой капиллярную трубочку длиной 10 см с шаровидным расширением. Внутри расширения находится шарик, который способствует равномерному перемешиванию крови и жидкости. Поскольку предложены меланжеры как для эритроцитов, так и для лейкоцитов, то цвет этого шарика может быть различным: красный шарик - это меланжер для эритроцитов, белый - для лейкоцитов.

Для исследования используется как стабилизированная кровь, так и не- стабилизированная сразу же после взятия. Кровь набирают в меланжер до метки "0,5" или "1". Конец смесителя очищается ваткой от крови и сразу же набирается до метки "101" разбавляющая жидкость. Отверстия смесителя закрывают большим и средним пальцами и перемешивают в течение 2-3 мин., после чего удаляют на вату первые три капли, а четвертую вносят в счетную камеру. Если кровь набирали до метки "0,5", то получают разведение в 200 раз, если до "1" - в 100 раз.

При пробирочном способе разведения крови берут 4 мл раствора натрия хлорида и вносят в пробирку. Капилляром от гемометра Сали набирают 0,02 мл крови и выдувают в пробирку, затем несколько раз промывают капилляр раствором. Разведенную при этом в 200 раз кровь тщательно перемешивают.

2 этап. Камеру располагают горизонтально и заполняют так, чтобы вся поверхность, на которую нанесена сетка, была заполнена жидкостью. При этом не должно быть образования пузырьков воздуха. После заполнения камеру оставляют строго в горизонтальном положении в течение 1 минуты для оседания эритроцитов на дно.

3 этап. Подсчет эритроцитов проводят под микроскопом, лучше при среднем увеличении (объектив х40, окуляр х7) при несколько затемненном поле, чтобы лучше просматривались линии сетки. Учет клеток ведется в пяти больших квадратах, разделенных на 16 малых. Начинают подсчет с верхнего левого большого квадрата сетки. Затем переходят к следующему квадрату, расположенному по диагонали, затем аналогично к следующему и т.д. Есть и другой принцип подсчета - в 4-х квадратах по углам ив 1-м квадрате в центре сетки.

Подсчет клеток в большом квадрате начинают с верхнего левого малого квадратика. Затем переходят ко второму, третьему и четвертому квадратику того же ряда. Сосчитав клетки первого ряда, переходят на второй и считают в обратном порядке. Таким образом подсчитывают эритроциты во всех 16 малых квадратиках и переходят к следующему большому квадрату.

Чтобы избежать повторного учета эритроцитов в большом квадрате существует два правила их подсчета:

1) подсчитываются все эритроциты, лежащие внутри квадрата и на его левой и верхней линиях. Клетки, лежащие на правой и нижней линиях, подсчитываются с другими квадратами. В крайних правых квадратах как верхних, так и нижних, клетки, лежащие на правой и нижней линиях, подсчитываются с последними квадратами. Этот метод предусматривает подсчет только тех клеток, которые лежат внутри квадратов, на линиях и прилегают к ним с внутренней стороны. Эритроциты, лежащие вне квадрата не учитываются.

2) второй метод предусматривает подсчет в том же порядке, но отличается от первого тем, что учитываются клетки, прилегающие к линиям не только изнутри, но и снаружи. Подсчет эритроцитов при этом ведется без учета таковых, прилегающих к правым и нижним линиям. По мнению большинства исследователей первый метод является более точным.

4 этап. Расчет абсолютного количества эритроцитов производится по формуле:

Где X - количество эритроцитов в 1 мкл крови;

А - количество эритроцитов, подсчитанное в 5 больших квадратах;

Б - степень разведения крови (200);

В - количество маленьких квадратиков в 5 больших квадратах (80);

Таким образом, формула имеет вид: X = А10000. Например, в 5 квадратах количество эритроцитов 590, тогда в абсолютных единицах получаем 5 900 000 клеток в 1 мкл крови. Для пересчета количества клеток в 1 л (сист. ед. СИ) необходимо результат умножить на 106, т.е. 5 900 000 10= 5,9.10 12 /л.

Подсчет эритроцитов посредством электронных автоматических счетчиков. Эти методы получают все большее распространение, поскольку позволяют автоматизировать исследование, повышают его точность и исключают субъективизм. Используются различные кондуктометрические счетчики, из которых наиболее известные типы это Культер (Франция), Целлоскоп (Швеция), Пикоскел (Венгрия) и др. Принцип работы таких счетчиков основан на различии электропроводности форменных элементов крови и жидкости, в которой они находятся. При этом клетки, проходя через микроотверстие капиллярной трубки, изменяют сопротивление электрической цепи, что регистрируется электромагнитным устройством. Число эритроцитов через 15-30 с высвечивается на цифровом табло.

В крови здоровых животных и птицы содержится следующее количество эритроцитов: крупный рогатый скот - 5,0-7,5; овцы - 7,0-12,0; козы - 12-18; лошади - 6,0-9,0; свиньи - 6,0-7,5; собаки - 5,2-8,4; куры - 3,0-4,0 на 10 /л.

Уменьшение числа эритроцитов (эритроцитопения, олигоцитемия) отмечается наиболее часто при анемиях различного происхождения (постгеморрагических, гемолитических, железо- и витаминодефицитных, гипо- и апластических, которые связаны с нарушением кроветворения). Эритроцитопения развивается также при инфекционной анемии лошадей, гематурии крупного рогатого скота, при многих острых и хронических интоксикациях.

Увеличенное содержание эритроцитов в крови - эритроцитоз (полицитемия) наблюдается чаще при заболеваниях, связанных с потерей организмом жидкости, в частности при диспептическом неонатальном и диарейном синдромах. Она бывает в начальную стадию инфекционных и лихорадочных заболеваний, при болевом абдоминальном синдроме, при пороках сердца в стадию декомпенсации, при отравлении фосфором, ртутью, окисью углерода, альвеолярной эмфиземе легких.

ЦП дает представление об отношении концентрации гемоглобина к количеству эритроцитов. Метод определения основан на сравнении полученных результатов с нормативными показателями здоровых животных.

ЦП рассчитывается по формуле:

ЦП = Hb2.E1/Hb1.E2,

где гемоглобин 1 и эритроциты 1 - это средние показатели у здорового животного данного вида и возраста; гемоглобин 2 и эритроциты 2 - это найденные показатели у исследуемого животного. Например:

У всех здоровых животных ЦП равен 1+0,15, т.е. пределы колебаний составляют от 0,85 до 1,15.

Для определения средней насыщенности эритроцитов гемоглобином рассчитывают еще один индекс: СГЭ. При этом руководствуются формулой:

СГЭ = Hb (г/л):Е (10/л).

СГЭ равно: у крупного рогатого скота - 15-20; свиней - 16-19; лошадей 17-20 пг.

Определение индексов красной крови имеет значение в дифференциальной диагностике анемий. При подострой постгеморрагической анемиии, когда одновременно уменьшается содержание гемоглобина и количество эритроцитов, ЦП приближается к 1, а СГЭ такое же как и у здоровых животных. ЦП меньше единицы и снижение СГЭ, или гипохромия, бывает при алиментарной, а также при хронической посгеморрагической анемии. Для этих нозологических форм анемии симптом гипохромии является типичным. Гиперхромия, это когда ЦП больше единицы и увеличивается СГЭ, - характерный признак гемолитической анемии, поскольку значительно уменьшается количество эритроцитов.

острой или хронической кровопотери, либо усиленного разрушения крови (гемолиз), либо нарушения образования эритроцитов в костном мозге. При многих болезнях и патологических состояниях анемия, ее глубина и характер является ведущим синдромом и определяет прогноз заболевания.

Симптомы анемии: бледность слизистых оболочек и кожи; одышка; тахикардия со стучащим сердечным толчком; гипохромемия (олигохромемия), эритроцитопения (олигоцитемия), увеличение СОЭ. При глубокой анемии может развиться коллапс. Тяжелая гемолитическая анемия проявляется гемоглобинурией.

Анемическим синдромом у животных проявляются следующие патологические состояния и болезни: наружные и внутренние, острые и хронические кровотечения; отравления гемолитическими ядами и интоксикации; гемоспоридиозы; дефицит или нарушения усвоения железа, гиповитаминозы; нарушения эритропоэза; аутоиммунные и инфекционные заболевания с геморрагическим синдромом (см.), лучевая болезнь. Анемия развивается также при недостаточном кормлении животных.

Полицитемический синдром - патологическое состояние, характеризующееся увеличением количества форменных элементов в единице объема крови. Поскольку большая часть массы форменных элементов приходится на эритроциты, такое состояние нередко именуют эритремией, хотя этот термин правомочен лишь по отношению к системным абсолютным и первичным эритроцитозам, обусловленным патологией эритроидного ростка костномозгового кроветворения. Абсолютные эритроцитозы бывают обусловлены гипоксией, стенозом легочной артерии, метгемоглобинемией. Относительные (временные) эритроцитозы связаны с потерей организмом жидкости, стрессом, системной артериальной гипертензией, повышенной физической нагрузкой.

Симптомы полицитемического синдрома: темно-вишневая окраска слизистых оболочек, кровоизлияния; эритро- и лимфоцитоз; замедление СОЭ (у рогатого скота практически отсутствует); гепатомегалия у крупного рогатого скота, спленомегалия у лошадей.

гемоглобин лейкоцит эритроцит анемия

4. Методы и клиническое значение определения количества лейкоцитов

Лейкоциты, или белые кровяные тельца, в организме выполняют прежде всего защитную функцию. В зависимости от форм они участвуют в фагоцитозе, выработке интерферона, лизоцима, гистамина и других биологически активных веществ. Лимфоциты играют основную роль в специфических защитных реакциях - формировании клеточного и гуморального иммунитета.

Для подсчета лейкоцитов предложены два метода:

1. Подсчет в счетной камере (ошибка метода +7%).

2. Подсчет в автоматических счетчиках (ошибка +2%).

При подсчете лейкоцитов используют ту же камеру с сеткой Горяева, что и для эритроцитов. Разводят кровь жидкостью Тюрка в меланжере или в пробирке. Состав жидкости Тюрка: 100 мл 3%-го р-ра уксусной к-ты и 1 мл 1%-го р-ра генциан фиолетового или метиленового синего. Ее назначение состоит в том, чтобы разрушить эритроциты и окрасить лейкоциты.

При разведении в меланжере набирают кровь в смеситель для лейкоцитов до метки "0,5" или "1", а до метки "11" - жидкость Тюрка и перемешивают в течение 2-3 мин. Получают разведение соответственно в 10 или 20 раз. Для разведения пробирочным методом в пробирку отмеривают 0,4 мл жидкости Тюрка и в нее вносят 0,02 мл крови, которую набирают капилляром Сали. Содержимое пробирки тщательно перемешивают.

Заполнение счетной камеры проводят также как и при подсчете эритроцитов. Через 1-2 мин., после оседания лейкоцитов на дно камеры, проводят подсчет лейкоцитов в 100 больших неразграфленных квадратах. Расчет абсолютного количества клеток производят по формуле:

X = А.Б/В.Г,

Где X - количество лейкоцитов в 1 мкл крови;

А - количество лейкоцитов, подсчитанное в 100 больших квадратах;

Б - степень разведения крови (20);

В - количество маленьких квадратиков в 100 больших квадратах (1600);

Г - объем счетной камеры над маленьким (1/4000 мм3).

Таким образом, формула имеет вид:

Например, подсчитано 180 лейкоцитов, тогда в абсолютных единицах получаем 9 000 клеток в 1 мкл крови. Для пересчета количества клеток в 1 л (сист. ед. СИ) необходимо результат умножить на 10 6 , т.е. 9 000*10 6 = 9*10%.

Принцип подсчета лейкоцитов посредством автоматических счетчиков такой же как и при определении числа эритроцитов.

В крови здоровых животных и птицы содержится следующее количество лейкоцитов: крупный рогатый скот - 4,5-12,0; овцы - 6,0-14,0; козы - 8,0-17,0; лошади - 7,0-12,0; свиньи - 8,0-16,0; собаки - 8,5-10,5; куры - 20,0-40,0 на 10 9 /л.

Увеличение количества лейкоцитов в крови - лейкоцитоз - может быть физиологическим, медикаментозным и патологическим. Физиологический лейкоцитоз бывает при беременности, после физических нагрузок, после приема корма у плотоядных, при стрессе. Медикаментозный лейкоцитоз наблюдается после парентерального введения животным белковых препаратов, вакцин, сывороток, алкалоидов и т.д.

Патологический лейкоцитоз отмечается при гнойно-воспалительных процессах, сопровождающих целый ряд внутренних болезней: бронхопневмонию, пневмонию, плеврит, перикардит, ретикулоперитонит и др. Выраженный лейкоцитоз наблюдается при многих инфекционных болезнях, лейкозах, хирургической инфекции. Возникает он и при отравлении животных ртутью, мышьяком, передозировке камфары.

Снижение числа лейкоцитов - лейкцитопения - является результатом угнетения органов кроветворения, их истощения, пониженной реактивности организма. Лейкоцитопения развивается в результате инфекционных заболеваний (классическая чума свиней, инфекционный энцефаломиелит лошадей, сальмонеллез, стахиботриотоксикоз и др.), радиационных поражений, передозировки препаратов (сульфаниламидов, левомецитина, синтомицина и др.). Выявление лейкоцитопении при заболеваниях, для которых характерен лейкоцитоз, указывает на сниженную естественную резистентность организма и тяжелое течение болезни.

Размещено на Allbest.ru

Подобные документы

Клиническое обследование коровы, состояние основных органов и систем. Анализ состояния зубов животного. Снижение количества эритроцитов и гемоглобина по результатам лабораторного исследования крови. Причины увеличения надвыменных лимфатических узлов.

курсовая работа , добавлен 24.03.2013


Форменные элементы крови: эритроциты, лейкоциты, гемоглобин, гематокрит. Методика подсчёта количества эритроцитов в единице объёма крови в камере Горяева, техника взятия крови. Функции: трофическая, экскреторная, респираторная, защитная, коррелятивная.

практическая работа , добавлен 09.10.2009


Группы крови крупного рогатого скота как основа селекционного процесса. Тестирование типов крови и их использование для определения линий и пород. Использование иммуногенетического мониторинга и биотехнологии трансплантации эмбрионов в воспроизводстве.

курсовая работа , добавлен 02.08.2010


Проектирование и анализ кормового рациона для спортивной лошади. Основная роль железа в организме. Сущность эритроцитов, лимфоцитов и гемоглобина. Характеристика эффективного использования имеющихся кормовых ресурсов в личных подсобных хозяйствах.

контрольная работа , добавлен 29.03.2015


Стресс-факторы и их влияние на физиологическое состояние и состав крови животных. Показатели осеменения коров. Повышение резистентности организма и биохимические показатели крови после лечения. Результаты экономической эффективности лечебных мероприятий.

дипломная работа , добавлен 04.05.2009


Основные функции крови: трофическая (питательная), экскреторная (выделительная), респираторная (дыхательная), защитная терморегулирующая, коррелятивная. Плазма крови, белки плазмы, небелковые азотсодержащие соединения, безазотистые органические вещества.

практическая работа , добавлен 09.10.2009


Воздействие имуномодулятора на показатели периферической крови глубокостельных коров. Нахождение эффективного метода коррекции естественной резистентности организма и внутриутробно развивающегося потомства. Воздействие тимогена на организм коров.

статья , добавлен 15.12.2009


Система органов крово- и лимфообращения, или сосудистая система. Общая характеристика кровоснабжения отдельных органов. Составные компоненты крови и их основные функции. Лимфатическая система млекопитающих животных. Ход и строение лимфатических сосудов.

реферат , добавлен 19.06.2014


Профилактика незаразных болезней. Экологические основы диспансеризации. Объем и сроки диспансерного обследования сельскохозяйственных животных. Анализ условий кормления и содержания животных. Лабораторный анализ крови, мочи, молока, рубцового содержимого.

курсовая работа , добавлен 19.12.2015


Отравление животных растениями, содержащими органические кислоты и соли, понижающими свертываемость крови, фото-сенсибилизирующими, нарушающими углеводный обмен. Клинические признаки, патологоанатомические изменения, токсикодинамика и профилактика.

68. Колориметрический способ определения количества гемоглобина в крови. Количество гемоглобина в крови в норме у разных видов животных.

Объект исследования – кровь животных.

Материалы и оборудование – пробирки, гемометр Сали, пипетка от гемометра Сали, 0,1 н. раствор соляной кислоты, дистиллированная вода, вата, бинт.

Ход работы. Колориметрическое определение гемоглобина производится гемометром Сали, в комплект которого входят микропипетка и стеклянная палочка. Прибор состоит из пластмассового корпуса с тремя гнездами для пробирок. В задней стенке корпуса вмонтировано матовое белого цвета стекло, рассеивающее свет. В боковые гнезда вставлены одинакового размера запаянные пробирки со стандартно окрашенным раствором, а в среднее гнездо градуированная пробирка для исследуемой крови. На всех пробирках имеются две круговые контрольные метки, нижняя из них соответствует ѐмкости 0,2 мл, верхняя - 2 мл. Для определения гемоглобина в градуированную пробирку гемометра наливают 0,1 н. раствора соляной кислоты до нижней метки. В капиллярную пипетку, прилагаемую к прибору, насасывают 20 мм3 (0,02 мл) крови. Конец пипетки вытирают ватой, опускают ее на дно пробирки в раствор соляной кислоты и выдувают кровь. Не вынимая пипетки из пробирки, несколько раз промывают ее верхней частью раствора. После этого содержимое пробирки тщательно перемешивают и оставляют на 5 минут в штативе для полного гемолиза эритроцитов. Гемоглобин, вступая в реакцию с соляной кислотой, образует солянокислый гематин, который имеет коричневую окраску. Через 5 мин в пробирку по каплям, при постоянном помешивании стеклянной палочкой, добавляют дистиллированную воду до тех пор, пока цвет жидкости не совпадет с цветом стандартного раствора в пробирках, расположенных по бокам гемометра. Затем пробирку с полученным рабочим раствором достают из гемометра и смотрят на выгравированную на ней шкалу. По нижнему мениску жидкости определяют содержание гемоглобина в г%, если полученную цифру умножить на 10, то будет выражение количества гемоглобина в г.

Определение по методу Сали .

Колориметрическое определение гемоглобина производится гемометром Сали. Этот метод основан на образовании солянокислого-гематина из деци нормального раствора соляной кислоты и гемоглобина, который имеет коричневую окраску и доводится дистиллированной водой до цвета стандартных растворов. Гемометр состоит из штатива с тремя гнездами (рис).

Рис. Гемометр Сали.

Задняя стенка штатива представляет собой пластинку из матового стекла. В боковые гнезда вставлены одинаковые запаянные пробирки - цветные стандарты. Среднее гнездо с градуированной пробиркой для исследуемой крови. На пробирке нанесена шкала, показывающая количество гемоглобина в грамм % (т. е. сколько грамм гемоглобина содержится в 100 мл. крови). В градуированную пробирку наливают 0.1% раствор HCl до нижней круговой метки (0,2 мл). В капиллярную пипетку набирают 0,02 мл крови. Кровь, приставшую к кончику капилляра, удаляют ваткой. Опускают капилляр на дно градуированной пробирки и осторожно выдувают из него кровь так, чтобы верхний слой раствора остался прозрачным. Не вынимая капилляраиз верхнего слоя раствора, 2-3 раза промывают его. После этого содержимое пробирки тщательно перемешивают и оставляют на 5 минут в штативе для полного гемолиза эритроцитов. Гемоглобин, вступая в реакцию с соляной кислотой, образует солянокислый гематин, который имеет коричневую окраску. Затем к раствору по каплям прибавляют дистиллированную воду и перемешивают стеклянной палочкой до получения одинакового окрашивания со стандартом. Деление на шкале, до которого поднялась жидкость, позывает количество гемоглобина. Грамм-процент переводят умножения полученный результат на 10, что соответствует содержанию гемоглобина в 1 л крови (г/л).

Состав крови у здоровых сельскохозяйственных животных

69. Определение времени свертывания крови. Противосвертывающая система крови в организме Свертывание крови – защитная биологическая реакция, предохраняющая организм животного и человека от потери крови. Свертывание крови является сложным процессом, в котором участвует свыше 15 факторов (рис.). Свертывание – переход крови из жидкого состояния в желеобразное. Оно происходит при повреждении сосуда и сопровождается образованием тромба. При травме происходит спазм сосуда и выделение серотонина – это приводит к гемостазу. Кровь может свернуться и в неповрежденном кровеносном сосуде, что вызывает нарушение ее циркуляции и кровоснабжения отдельных тканей и органов, поэтому в организме имеется противосвертываюшая система крови, препятствующая свертыванию ее в кровеносных сосудах.

Рис. Классическая схема свертывания крови Шмидта - Моравица.

Нанести по одной капле крови, вытекающей из надрезанного уха животного, на три предметных стекла. Одно стекло поместить в термостат при +40 о С, другое стекло положить на стол (при комнатной температуре), третье - на снег. Через каждую минуту наклонять стекла с кровью и повторять до тех пор, пока кровь не свернется. Определить время свертывания крови у различных животных. К противосвертывающей системе относят: Антитромбопластины, антитромбины, гепарин, различные соли кислот. Система свертывания находиться под постоянным контролем нейрогуморальной регуляции(при страхе, боли, теипиратуре свертывание крови усиливается. Адреналин и норадреналин освобождают тромбопластин из стенок сосудов).

В крови взрослых людей и у многих видов животных различают типы гемоглобина, обозначаемые как HbA 1 (от англ. adult – взрослый), имеющий описанное выше типичное строение, HbA 2 и фетальный гемоглобин, HbF (от лат. fetus – плод).

HbA 2 также состоит их четырёх субъединиц: двух α– и двух β–цепей, он с меньшей скоростью мигрирует при электрофорезе, что и позволило выделить его в отдельный тип. На долю HbA 2 приходится около 2,5% от всего гемоглобина.

HbF, фетальный гемоглобин (гемоглобин новорождённых) состоит из двух α– и двух γ-цепей. Последовательность аминокислот в α– и γ-цепях окончательно ещё не расшифрована.

Фетальный гемоглобин отличается от HbA 1 не только по составу аминокислот, но и по ряду физико-хиических свойст: спектральным показателям, электрофоретической подвижности, устойчивости к щелочной денатурации и др. Гемоглобин плода обладает большим сродством к кислороду, чем гемоглобин новорожденного или взрослого. Высокое сродство к О 2 фетального гемоглобина облегчает перенос кислорода от матери к плоду. Кровь новорождённого содержит до 80% HbF, но к концу молочного периода он почти полностью заменяется заменяется на HbA (в крови взрослого однако обнаруживатеся до 1,5 HbF от общего количества гемоглобина).

Существует метод цитологической дифференцировки гемоглобина F путем обработки мазка крови лимоннокислофосфатной буферной смесью с рН = 3,4. В этих условиях эритроциты, содержащие преимущественно гемоглобин А, подвергаются гемолизу и представляются на препарате в виде теней (стром). Эритроциты, в которых преобладает гемоглобин F, оказываются резистентными и контрастно окрашиваются.

Кроме того, в период эмбрионального развития у зародыша обнаруживается так называемый примитивный гемоглобин Р, характерный для желточного кроветворения.

Он характеризуется высокой щелочной резистентностью и малой электрофоретической подвижностью. Находится в эритроцитах зародыша до 18 - недельного возраста затем сменяется фетальным гемоглобином.

* данные приводятся по Boyd J.W. , The interpretation of serum biochemistry test results in domestic animals, in Veterinary Clinical Pathology, Veterinary Practice Publishing Co., Vol. XIII, # II, 1984

На содержание гемоглобина влияет возраст, пол, порода, кормление, физические нагрузки и высота над уровнем моря.

Среднее содержание гемоглобина в эритроците.

Важным диагностическим показателем, позволяющим оценить эритропоэз и провести дифференциальную диагностику различных форм анемии, служит среднее содержание гемоглобина в одном эритроците. (СГЭ) Эта величина отражает абсолютное количество гемоглобина, содержащееся в среднем в одном эритроците. Ее находят путем деления количества гемоглобина в определенном объеме крови на число эритроцитов в том же объеме.

Эритроциты с нормальным содержанием гемоглобина (26–36 пг) называютнормохромными. Если СГЭ патологически снижено, то эритроциты называют гипохромными, а если оно повышено – гиперхромными. Эти же термины употребляют и для обозначения различных форм анемии. Так, когда образование гемоглобина снижается в результате недостатка железа, содержание гемоглобина в расчете на эритроцит падает, и возникает гипохромная анемия. При других разновидностях анемии нарушается образование красных кровяных телец в костном мозгу, и в крови появляются деформированные эритроциты с высоким содержанием гемоглобина – гиперхромная анемия. После значительной кровопотери СГЭ сначала не изменяется (нормохромная анемия), а в последующем вследствие избыточной продукции эритроцитов содержание гемоглобина в них падает (гипохромная анемия).

Нормальная плазма содержит следы гемоглобина, не превышающие 10 мг%. Сильные увеличения (свыше 100 мг%) встречаются при всех гемоглобинуриях.

Измерение содержания гемоглобина.

Для измерения содержания гемоглобина существует много методов, в том числе:

1) определение количества связанного O 2 (1 г НЬ может присоединить до 1,36 мл O 2 . Количество кислорода устанавливают прибором ван-Слайка или прибором Баркрофта.)

2) анализ уровня железа в крови (содержание железа в гемоглобине составляет 0,347%);

3) колориметрия (сравнение цвета крови с цветом стандартного раствора). Гемоглобин колориметрируют как оксигемоглобин или редуцированный гемоглобин или же сперва превращают его в цветные производные (солянокислый гематин, щелочной гемоглобин, метгемоглобин, карбоксигемоглобин, циангемоглобин, азид-метгемоглобин и пр.)

4) измерение экстинкции (спектрофотометрия).

При проведении рутинных определений уровня гемоглобина отдают предпочтение последнему методу, так как при использовании первых двух способов необходима сложная аппаратура, а метод колориметрии неточен. ,

ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ