Помощь по Теле2, тарифы, вопросы

Изобретение относится к области иммунологии. Нативную культуру Y.pestis выращивают методом глубинного культивирования. Затем отбирают осадок и подвергают его микрофильтрации. Микрофильтрацию осуществляют с размером пор 0,2 мкм в режиме тангенциального потока жидкости при рабочем давлении 0,15-0,2 МПа и производительности его фильтрату 6-8 дм 3 ч -1 . Способ позволяет ускорить процесс получения концентрата микробных клеток и одновременно увеличить выход концентрата с единицы объема среды. 3 табл.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ

Изобретение относится к технологии производства медицинских иммуно-биологических препаратов, а именно к способам получения концентрата микробных клеток в производстве чумной живой сухой вакцины. Известен способ получения концентрата микробных клеток Y.pestis путем выращивания микробной массы на плотных питательных средах и смыва ее средой высушивания (Регламент производства 37-86 "Вакцина чумная живая сухая"). Общим с заявляемым способом является получение концентрата микробных клеток, пригодного для приготовления чумных вакцин. К недостаткам данного способа следует отнести необходимость смыва микробной массы с плотной питательной среды, вследствие чего в микробную взвесь попадают остатки питательной среды и продукты метаболизма, что отрицательно сказывается на качестве вакцин. Наиболее близким к заявляемому является способ получения концентрата микробных клеток в производстве вакцины чумной живой сухой (Регламент производства 377-97 "Вакцина чумная живая сухая"), предусматривающий выращивание нативной культуры чумного микроба, первичное осаждение микробной биомассы в аппарате-ферментере в течение 6 ч при температуре 18...20 o С, отбор осадка в аппарат-осадитель или 20-литровые бутыли и концентрирование осаждением в течение 18...48 ч при температуре 4...8 o С. Выход концентрата составляет 2... 3% от объема среды. Общим с заявляемым способом является получение концентрата микробных клеток, пригодного для приготовления чумных вакцин. К недостаткам данного способа следует отнести его продолжительность и относительно низкий выход концентрата с единицы объема среды. Задачей изобретения является ускорение процесса получения концентрата микробных клеток с одновременным увеличением выхода концентрата с единицы объема среды. Поставленная задача достигается тем, что концентрирование микробной массы осуществляют путем микрофильтрации культуры чумного микроба через мембраны с размером пор 0,2 мкм в режиме тангенциального потока жидкости. Сравнение существенных признаков предлагаемого технического решения и прототипа показывает, что общим для них является процесс культивирования микробных клеток в жидкой питательной среде, а также процесс первичного осаждения биомассы непосредственно в аппарате-ферментере. Отличием предлагаемого способа является то, что процеcc получения концентрата микробных клеток в производстве чумных вакцин осуществляют путем микрофильтрации культуры чумного микроба в режиме тангенциального потока жидкости через мембраны с размером пор 0,2 мкм. Возможность использования микрофильтрационного концентрирования микробных клеток в производстве чумных вакцин установлена нами экспериментальным путем и неизвестна из доступных источников информации. Сущность предложенного способа заключается в следующем. Нативную культуру вакцинного штамма чумного микроба после завершения процесса культивирования оставляют в аппарате-ферментере для первичного осаждения на 6 ч. Осаждение проходит при температуре 18...20 o С. Далее отбирается образовавшийся осадок в 20-литровые бутыли и подвергается микрофильтрации на мембранах с размером пор 0,2 мкм при температуре 18...20 o С, рабочем давлении 0,15. ..0,2 МПа, производительности по фильтрату 6...8 дм 3 ч -1 . Характеристика концентрата микробных клеток, полученного указанным способом, представлена в табл.1. В качестве образца сравнения дана характеристика осадка микробных клеток способа-прототипа по РП 377-97. По результатам, представленным в табл.1, видно, что концентрат микробных клеток, полученный с использованием метода микрофильтрации, по своей характеристике не уступает приготовленному традиционным способом и соответствует требованиям НТД. Наличие причинно-следственной связи между совокупностью существенных признаков заявляемого объекта и достигаемым техническим результатом, представлено в табл.2. Изобретение позволяет получать концентрат микробных клеток, по своим физико-химическим и биологическим характеристикам пригодный для использования в производстве чумных вакцин. Возможность осуществления заявляемого изобретения показана следующими примерами. Пример 1. Получение концентрата микробных клеток. Нативная культура Y. pestis штамма ЕВ, выращенная методом глубинного культивирования в аппарате-ферментере V=0,250 м 3 в течение 27 ч при температуре 26...28 o С, имеет следующие характеристики: рН=7,4 ед. рН, концентрация микробных клеток (по ОСО мутности ГИСК им. Л.А.Тарасовича) 40 млрд. кл. мл -1 , ПМФ отсутствует. После завершения процесса культивирования микробную суспензию оставляют в аппарате-ферментере на 6 ч при температуре 18...20 o С. Затем отбирают осадок в объеме 40 л в две 20-литровые бутыли и подвергают его микрофильтрации на ультра- микрофильтрационной установке "Сартокон-мини" через мембраны с размером пор 0,2 мкм при температуре 18...20 o С, рабочем давлении 0,15. . . 0,2 МПа, производительности по фильтрату 6...8 дм 3 ч -1 . В процессе фильтрации, после сокращения объема микробного осадка втрое, через каждые 10 мин отбирают стерильно пробы в объеме 5 мл для определения концентрации микробов по ОСО мутности ГИСК им. Л.А.Тарасовича. При достижении концентрации 150. . .170 млрд. кл. мл -1 процесс микрофильтрации прекращают. Общая продолжительность концентрирования двух 20-литровых бутылей составляет 12. . .18 ч. Выход концентрата микробных клеток 8...10 л (3,5...4% от объема среды). Пример 2. Концентрирование выбракованного полуфабриката чумной вакцины (по концентрации микробных клеток). Культивирование микробов Y. pestis проводится как указано в примере 1, однако вследствие ряда причин не удается вырастить нативную культуру с требуемой по регламенту концентрацией микробных клеток (по ОСО мутности ГИСК им. Л. А.Тарасовича), что приводит к выбраковке данной культуры. Применение метода микрофильтрации позволяет сконцентрировать нативную культуру с низким содержанием микробных клеток до микробной взвеси с требуемой концентрацией. Первичное осаждение и микрофильтрация проводятся, как указано в примере 1. Продолжительность процесса микрофильтрационного концентрирования составляет 10. . . 14 ч. Выход концентрата микробных клеток 4...5 л (1,5...2% от объема среды). Пример 3. Концентрирование плохоосаждаемых (седиментационно-устойчивых) культур. Культивирование микробов Y.pestis проводится, как указано в примере 1. Нативная культура по своим характеристикам соответствует требованиям регламента, но при осаждении в аппаратах-осадителях или 20-литровых бутылях по истечении 48 ч осадок не сформирован, что не позволяет получить микробную взвесь с требуемой концентрацией микробов. Весь объем неосаждаемой культуры подвергают микрофильтрации, как указано в примере 1, что позволяет получить микробную взвесь с требуемыми характеристиками. Выход концентрата микробных клеток составляет 8...10 л (3,5...4% от объема среды). Пример 4. Характеристика вакцины чумной живой сухой, приготовленной с применением заявляемого способа получения концентрата микробных клеток и способа-прототипа. Характеристика вакцины чумной живой сухой, приготовленной с применением заявляемого способа получения концентрата микробных клеток и способа-прототипа, дана в табл.3.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Способ получения концентрата микробных клеток в производстве чумных вакцин, предусматривающий осаждение биомассы в аппарате-ферментере и концентрирование, отличающийся тем, что концентрирование осуществляют микрофильтрацией через мембраны с размером пор 0,2 мкм в режиме тангенциального потока жидкости при рабочем давлении 0,15-0,2 МПа и производительности по фильтрату 6-8 дм 3 ч -1 .

лиофилизат д/пригот. суспензии для инъекций, накожного скарификационного нанесения и ингаляций: амп. 10 шт. Рег. №: ЛСР-005759/08

Клинико-фармакологическая группа:

Вакцина для профилактики чумы

Форма выпуска, состав и упаковка

Лиофилизат для приготовления суспензии для инъекций, накожного скарификационного нанесения и ингаляций в виде пористой массы серовато-белого цвета.

Вспомогательные вещества: сахароза, желатин, тиомочевина.

80-430 подкожных доз для взрослых - ампулы объемом 2 мл (10) - пачки картонные.

Описание активных компонентов препарата «Вакцина чумная живая »

Фармакологическое действие

Вакцина вызывает развитие иммунитета к чуме длительностью до одного года.

Показания

— профилактика чумы.

Прививкам подлежат дети с 2-х лет и взрослые, проживающее на энзоотичных по чуме территориях, а также лица, работающие с живыми культурами возбудителя чумы.

Режим дозирования

Вакцинацию проводят однократно подкожным, накожным, внутрикожным или ингаляционным способами. Ревакцинацию осуществляют накожным способом через один год, при неблагоприятной эпидемической обстановке -через 6 мес.

Вакцинация накожным, подкожным и внутрикожным способами.

Перед вскрытием каждую ампулу просматривают. Не подлежит применению препарат, целостность упаковки которого повреждена, с измененными физическими свойствами (посторонние примеси, не растворяющиеся хлопья), с истекшим сроком годности, при нарушении режима хранения.

Вскрытие ампул и процедуру введения препарата осуществляют при строгом соблюдении правил асептики и антисептики. Разведенная вакцина, сохраняемая с соблюдением правил асептики, может быть использована в течение 2 ч. Перенос вскрытой ампулы из одного помещения в другое не допускается. Неиспользованную вакцину уничтожают кипячением в течение 30 мин.

Непосредственно перед иммунизацией вакцину разводят 1,8 мл 0,9 % раствора натрия хлорида для инъекций. Препарат должен полностью раствориться в течение 3 мин. Ампулы с вакциной встряхивают. Растворенная вакцина - гомогенная взвесь без посторонних примесей и хлопьев. Полученную взвесь отбирают с помощью стерильного шприца из ампулы и переносят в стерильный флакон, содержащий 0,9 % раствор натрия хлорида для инъекций в объеме, соответствующем таковому, указанному на этикетке коробки для соответствующего способа введения. При этом учитывают объем 0,9 % раствора натрия хлорида, использованного для приготовления исходного разведения.

В зависимости от возраста прививаемых и способа введения используют следующие дозы вакцины.

Возраст прививаемых	Доза вакцины (количество живых микробных клеток) для введения способом:
	внутрикожным	подкожным	накожным	ингаляционным
14-60 лет 1)	1 доза - 300 млн живых микробных клеток (ж.м.к.) в 0,1 мл	1 доза - 300 млн ж.м.к. в 0,5 мл		1 доза -5 млрд ж.м.к. в 0,15 мл
Старше 60 лет	1/3 дозы-100 млн ж.м.к. в 0,1 мл	Не прививают	1 доза - 3 млрд ж.м.к. в 0,15 мл (3 капли)	Не прививают
10-13 лет	112 дозы -150 млн ж.м.к. в 0,1 мл	Не прививают	1 доза - 3 млрд ж.м.к. в 0,15 мл (3 капли)	Не прививают
7-9 лет		Не прививают	2/3 дозы - 2 млрд ж.м.к. в 0,1 мл (2 капли)	Не прививают
2-6 лет	1/3 дозы -100 млн ж.м.к. в 0,1 мл	Не прививают	1/3 дозы - 1 млрд ж.м.к. в 0,05 мл (1 капля)	Не прививают
Примечание: 1) женщин, кормящих грудью, прививают только накожно

Накожный способ.

Вакцинацию проводят на наружной поверхности средней трети плеча следующим образом: взрослым оспопрививательным пером слегка соскабливают (до покраснения) поверхностный слой эпидермиса на 3-х участках кожи, предварительно обработанной 70° этиловым спиртом. Расстояние между участками составляет от 3-х до 4-х см, площадь участка от 1 до 1,5 см 2 . При вакцинации детей эпидермис соскабливают на 1 или 2 участках кожи.

На каждый участок скарифицированной кожи пипеткой наносят по 1 капле вакцины, после чего индивидуальным оспопрививательным пером через каждую каплю вакцины крестообразно наносят 4 горизонтальные и 4 вертикальные линейные насечки длиной 1 см. Затем оспопрививательным пером в течение нескольких секунд тщательно втирают капли вакцины в скарифицированную кожу и дают подсохнуть в течение 5 мин. Насечки следует делать неглубокие, чтобы они не кровоточили (кровь может выступать только в виде мелких росинок). Для каждого прививаемого используют отдельное одноразовое оспопрививательное перо. Запрещается взамен перьев пользоваться иглами, скальпелями и т.п.

Подкожный способ.

Кожу в месте инъекции предварительно обрабатывают 70° этиловым спиртом. Вакцину вводят шприцем ниже угла лопатки или безыгольным инъектором БИ-ЗМ с противоинфекционным протектором ППИ-2 в верхнюю треть плеча позади дельтовидной мышцы.

Внутрикожный способ.

Количество доз и объем растворителя для подростков с 14 лет и взрослых до 60-ти лет указаны на этикетке коробки. Для вакцинации детей в возрасте 10-13 лет объем растворителя при втором разведении удваивают, для вакцинации детей в возрасте от 2 до 9 лет и взрослых старше 60 лет объем растворителя утраивают. Вакцину взрослым и детям вводят в объеме 0,1 мл внутрикожно в область наружной поверхности плеча левой руки после обработки кожи 70° этиловым спиртом с помощью безыгольного инъектора БИ-ЗМ с протектором противоинфекционным ППИ-2 или шприцем объемом 1 мл с тонкой иглой с коротким срезом.

Вакцинация ингаляционным способом.

Вакцинацию проводят в специальных помещениях стационарного или временного типа объемом от 50 до 150 м 3 , высотой от 2,5 до 4,5 м (соотношение длины и ширины не более чем 2:1). Указанные помещения должны быть приспособлены для быстрого проветривания, а стационарные ингаляционные должны быть оборудованы вытяжной вентиляцией.

Вакцину разводят 2 мл стерильного 10% раствора лактозы. Ампулу встряхивают до получения гомогенной взвеси. При обнаружении посторонних примесей, неравномерной взвеси использовать препарат запрещается. Полученную взвесь переносят в стерильный флакон с необходимым для дальнейшего разведения объемом 10% раствора лактозы (согласно указанию на коробке). При этом учитывают объем 10% раствора лактозы, использованный для приготовления исходного разведения. Температура 10% раствора лактозы должна соответствовать температуре, при которой хранился сухой препарат перед разведением.

Полученную микробную суспензию в количестве, определяемом объемом помещения (0,1 мл на 1 м 3 помещения), заливают в резервуар распылителя. Распыление производится с помощью пневматического распылителя эжекционного типа. Распылитель устанавливается вертикально, соплом вверх, в центре помещения на высоте 80-120 см от пола. Распыление производят сжатым воздухом под давлением 1,2 атм до полного израсходования суспензии, залитой в резервуар. Сжатый воздух подается на распылитель до конца сеанса иммунизации. Продолжительность сеанса иммунизации 5 мин. Одна человеко-доза для ингаляционного применения составляет (5±3)х10 6 живых микробных клеток.

Число людей, иммунизированных за один сеанс, определяется из расчета от 1,4 до 2 м 3 помещения на одного человека.

После каждого сеанса иммунизации ингаляционную вентилируют не менее 5 мин. При проведении иммунизации в палатке после каждого сеанса откидывают пологи не менее, чем на 5 мин. Персонал, проводящий вакцинацию, в случае необходимости входа в ингаляционную в течение сеанса и первых 5 мин после его окончания, должен быть одет в специальную одежду (нательное белье, носки, хлопчатобумажный комбинезон, противогаз, тапочки).

Проведенные разными способами прививки регистрируют в установленных учетных формах с указанием наименования препарата, изготовителя, даты прививки, дозы, способа введения, номера серии, срока годности, реакции на прививку.

Побочное действие

Прививки вакциной чумной живой могут сопровождаться как общей, так и местной реакциями, интенсивность которых зависит от метода вакцинации.

Накожная прививка может сопровождаться мелкой везикулярной сыпью по ходу насечек, иногда на месте прививки появляется инфильтрат в толще кожи. Реже наблюдаются регионарные лимфадениты. Указанные симптомы начинают появляться через 8-10 ч после прививки, достигают полного развития через 23-30 ч. Общая реакция возникает на первые сутки и выражается повышением температуры до 37,5°С.

После подкожных и внутрикожных прививок могут наблюдаться местные реакции в виде гиперемии, болезненности, инфильтрата диаметром до 50 мм, реже - увеличение регионарных лимфатических узлов. Местные реакции возникают через 6-10 ч, достигают полного развития через 24-48 ч и исчезают через 4-5 сут. Общая реакция выражается в недомогании, головной боли, повышении температуры до 37,5°С, у одного процента вакцинированных до (38,0-39,0) °С продолжительностью до 3 сут. Иногда наблюдаются тошнота и рвота.

После ингаляционной иммунизации у небольшого числа вакцинированных возможно возникновение недомогания, головной боли, болей в мышцах, повышения температуры до 38,5°С и очень редко до 40°С. Продолжительность реакции 1-3 сут. По времени возникновения наблюдаются два типа реакции: ранние, развивающиеся в первые двое суток и характерные для повторно прививаемых; поздние, появляющиеся на 5-7 сут, и чаще встречающиеся у первично привитых.

Перед массовым применением каждая серия вакцины должна быть испытана на группе людей в 50-100 человек, равнозначной по возрасту и состоянию здоровья основному контингенту прививаемых. Вакцина может быть использована для массовой вакцинации, если количество средних (повышение температуры тела до 37,6-38,5°С) и сильных (повышение температуры тела выше 38,5°С) реакций на ее введение не превышает соответственно 29% и 5% при подкожном методе введения, 1% средних реакций при накожном введении и 6% средних или 4% сильных реакций для ингаляционного метода введения.

Противопоказания

— острые инфекционные и неинфекционные заболевания, хронические заболевания в стадии обострения - прививки проводят не ранее, чем через 1 мес после выздоровления (ремиссии);

— первичные и вторичные иммунодефициты. При лечении стероидными препаратами, антиметаболитами, химио- и рентгенотерапии - прививки проводят не ранее, чем через 6 мес после окончания лечения;

— системные заболевания соединительной ткани;

— злокачественные новообразования и злокачественные болезни крови;

— распространенные рецидивирующие заболевания кожи (при накожной иммунизации);

— хронические заболевания органов дыхания (при ингаляционной иммунизации);

— аллергические заболевания (бронхиальная астма, анафилактический шок, отек Квинке в анамнезе);

— беременность и период лактации.

Беременность и лактация

Противопоказано при беременности и лактации.

Применение для детей

Прививкам подлежат дети с 2-х лет

Лекарственное взаимодействие

Условия отпуска из аптек

Для лечебно-профилактических и санитарно-профилактических учреждений.

Условия и сроки хранения

Хранят в соответствии с СП 3.3.2.1248-03 при температуре от 0 до 8 °С в недоступном для детей месте. Транспортируют в соответствии с СП 3.3.2.1248-03 при температуре от 0 до 8°С. Срок годности - 3 года.

Лекарственное взаимодействие

Не допускается введение вакцины чумной живой в сочетании с применением антибиотиков стрептомицинового, тетрациклинового ряда и сульфаниламидов в терапевтических дозах одновременно и ранее, чем через 14 дней после иммунизации.

Допускается одновременная накожная вакцинация взрослых против чумы, бруцеллеза и туляремии на разных участках наружной поверхности верхней трети плеча.

Фармакологическая группа:
МИБП-вакцина

Показания:
Профилактика чумы.

Побочные действия:
Вакцина слабореактогенна. Прививки могут сопровождаться как местной, так и общей реакциями, интенсивность которых зависит от индивидуальных особенностей привитых.

Международное название:

Вакцина чумная (Vaccine plague)

Торговое название:

Вакцина чумная живая сухая (Vaccinum pestosum vivum siccum)

Форма выпуска:

лиофилизат для приготовления раствора для подкожного, внутрикожного, накожного скарификационного и ингаляционного введения (флаконы) 2 мл

Описания:

Вакцина чумная живая сухая представляет собой взвесь живых бактерий вакцинного штамма чумного микроба ЕВ НИИЭГ, лиофилизированного в сахарозо-желатиновой среде с тиомочевиной или в сахарозо-желатиновой среде с глютаминовокислым натрием, тиомочевиной и пептоном или в лактозодекстриновой среде с тиомочевиной и аскорбиновой кислотой. Сухой препарат при осмотре невооруженным глазом должен иметь вид серовато-белой или желтоватой пористой массы и не содержать посторонних примесей. После добавления 0,9 %-ного (изотонического) раствора NaCl или 10 %-ного раствора лактозы препарат должен растворяться в течение 3 мин. с образованием гомогенной взвеси. Вакцина предназначается для предохранительных прививок против чумы.

Показания:

Показанием к проведению профилактических прививок является наличие эпизоотий чумы среди грызунов или возможность завоза инфекции больным человеком.

Режим дозирования:

Способы введения — вакцину применяют подкожно игольным или безыгольным методом, внутрикожно — безыгольным способом или накожно. Одна и та же серия вакцины может быть использована для любого способа вакцинации в зависимости от разведения. Прививки проводят врачи с соблюдением всех правил асептики. Под наблюдением врача прививки могут делать на фельдшерско-акушерском и фельдшерском пунктах фельдшера и опытные медсестры, получившие специальный инструктаж. Врач несет ответственность за правильный отбор лиц, подлежащих вакцинации. Перед вакцинацией прививаемых тщательно осматривают с измерением у них температуры. Проведение прививок при температуре 37град.С и выше запрещается. Все дети, подлежащие прививкам, должны обследоваться с учетом анамнестических данных (предшествующие заболевания, переносимость ранее проведенных прививок, наличие аллергических реакций на лекарственные препараты, пищевые продукты и др.). Дети с хроническими заболеваниями, аллергическими состояниями и др., проживающие в сельской местности, должны в обязательном порядке перед проведением прививки осматриваться врачом. О дне предстоящих прививок детям, посещающим дошкольные учреждения и школы, необходимо заранее оповещать родителей. Категорически запрещается проведение прививок на дому за исключением хозяйств отгонного животноводства на энзоотичной по чуме территории, где вакцинацию против чумы проводят специальные бригады вакцинаторов под руководством врача на оборудованной для этой цели машине или в одном из жилищ местного населения. Запрещается проведение вакцинации и прием больных в одном помещении. Недопустимо наличие гнойничковых заболеваний у медперсонала, проводящего прививки. Перед проведением массовых прививок каждая серия вакцины должна быть предварительно испытана на группе людей в 50 — 100 человек, равнозначной по возрасту и состоянию здоровья основному контингенту прививаемых. В дальнейшем вакцина может быть использована для массовой вакцинации, если количество средних и сильных реакций на введение не превышает соответственно 29 и 5 % для подкожного и внутрикожного введения, 1 % средних реакций для накожного метода. При проведении прививок следует учитывать, что подкожная и внутрикожная прививки вызывают более выраженную поствакцинальную реакцию, чем накожная, поэтому здоровые контингенты населения с 7 до 60 лет, не имеющие противопоказаний, можно прививать подкожным и внутрикожным методами, а детей с 2 до 7 лет, лиц старше 60 лет, женщин в первой половине беременности и кормящих прививать только накожно. Внутрикожным и подкожным безыгольным методами можно прививать здоровые контингенты с 18 до 60 лет, не имеющие противопоказаний.

Разведение и введение вакцины . Перед началом прививок тщательно просматривают ампулу (флакон) до и после разведения. Вакцина не подлежит употреблению при обнаружении в стекле трещин, хлопьев или осадка, неразбивающихся при встряхивании, а также при наличии посторонних примесей, с истекшим сроком годности, без этикеток и с недостающими сведениями на этикетках. Годную ампулу протирают ватой со спиртом и надпиливают ее шейку напильником, также предварительно протертым спиртом. В случае расфасовки вакцины во флаконах, после снятия металлического колпачка обрабатывают спиртом наружную часть резиновой пробки. Затем с помощью шприца, снабженного иглой, прокалывают резиновую пробку и вводят растворитель. В ампулу (флакон) вводят 1 — 2 мл растворителя (в зависимости от объема налитой вакцины). При необходимости большего разведения полученную взвесь отсасывают стерильным шприцем с длинной иглой и переносят во флаконы с необходимым объемом стерильного 0,9 %-ного (изотонического) раствора NaCl согласно указанию на этикетке. При этом учитывают объем изотонического раствора, внесенного в ампулу для растворения вакцины. При накожном методе вакцинации используют 0,9 %-ный (изотонический) раствор NaCl в ампулах, при внутрикожном и подкожном методах введения, в связи с большими объемами разведения, — во флаконах. Объединение содержимого нескольких ампул в одном флаконе разрешается только при вакцинации с помощью безыгольного инъектора. Вакцину разводят перед вакцинацией, закрывают стерильной ватой или марлевой салфеткой и используют в течение 2 ч. Остатки уничтожают кипячением. Для прививок используют шприцы, иглы и оспопрививательные перья, которые предварительно стерилизуют или сухим жаром в течение 1 ч. при 160град.С (для шприцев из термостойкого стекла), или в автоклаве (30 мин. при 1,5 атм), или кипячением не менее 45 мин. Время исчисляется с момента достижения соответствующей температуры или давления. Каждому прививаемому должен быть применен отдельно стерилизованный шприц, игла или перо. В шприц следует набирать только одну прививочную дозу. Запрещается использовать шприцы, иглы и перья, которыми проводили прививки вакциной БЦЖ.

Накожный способ . Для накожного применения вакцину разводят 0,9 %-ным (изотоническим) раствором NaCl в объеме, указанном на этикетке коробки с вакциной, и оставляют непосредственно в ампуле или флаконе. Для взрослого одна человеко-доза содержит 3 млрд. живых микробов в 0,15 мл. Кожу на месте введения вакцины дезинфицируют спиртом; сильно загрязненную кожу предварительно очищают бензином. Вакцину прививают на внутренней поверхности левого предплечья или наружной поверхности плеча. Вакцинацию производят следующим образом: оспопрививательным пером слегка соскабливают (до покраснения) поверхностный слой эпидермиса на одном, двух, трех (в зависимости от возраста прививаемых) участках кожи, которую предварительно очищают, как указывалось выше. Расстояние между участками 3 — 4 см, площадь каждого из них 1 — 1,5 см2. На каждый участок скарифицированной кожи пипеткой наносят по одной капле вакцины, после чего оспопрививательным пером через каждую каплю делают крестообразно 8 линейных насечек. Затем в течение нескольких секунд тщательно втирают ее в скарифицированную кожу. Насечки следует делать неглубокие, так как излишняя кровоточивость из них частично вымывает вакцину.

Подкожный шприцевой способ . Одна человеко-доза для подкожной прививки содержит 300 млн. Живых микробов в 0,5 мл. При проведении прививок перед каждым набором вакцины в шприц флакон следует встряхнуть. Вакцину вводить в область спины ниже угла лопатки строго под кожу или в левое плечо позади дельтовидной мышцы. Кожу перед введением вакцины обрабатывают так же, как при накожной вакцинации. После инъекции место смазывают 5 %-ной йодной настойкой.

Подкожный безыгольный способ . В случае необходимости проведения массовых прививок против чумы детям с 7 лет и взрослым до 60 лет подкожная вакцинация может быть проведена безыгольным инъектором. Стерилизацию всех частей инъектора проводят кипячением не менее 45 мин. или автоклавированием при температуре до 130 град.С в течение 30 мин. Однократная стерилизация обеспечивает стерильность инъектора в течение 24ч. При частой смене флаконов с вакциной, в случае непрерывного потока людей или при вынужденных перерывах в процессе проведения массовой вакцинации, инъектор подвергают дополнительной стерилизации 70град. спиртом. Во избежание свертывания остатков вакцины в инъекторе флакон с препаратом заменяют флаконом со стерильной дистиллированной водой и проводят промывку каналов головки инъектора 10 — 15 «выстрелами», соблюдая при этом меры предосторожности по предупреждению загрязнения окружающей среды вакцинным штаммом чумного микроба и меры предохранения вакцинаторов от вдыхания вакцинного аэрозоля ввиду опасности аллергизации. Затем таким же способом стерилизуют инъектор спиртом. Флакон с вакциной рекомендуется помещать на инъектор непосредственно перед выполнением инъекций прививаемым. Остатки спирта перед этим следует удалить дистиллированной водой, а объем вводимой вакцины отрегулировать на шкале инъектора в соответствии с возрастом лица, подлежащего вакцинации. Запробкованные флаконы для разведения вакцины стерилизуют сухим жаром в течение 1 ч. при 160 град.С и хранят не более 3 суток. Подготовка, порядок работы и проверка технического состояния инъектора осуществляется строго согласно техническому описанию и инструкции по эксплуатации. Вакцинацию безыгольным инъектором проводят согласно инструкции по его применению для подкожных инъекций препаратов в объеме 0,5 мл. Объем вводимого препарата меняется с учетом возраста прививаемого (см. ниже). Вводить вакцину только в область дельтовидной мышцы. Место инъекции обрабатывают так же, как при игольном способе вакцинации.

Внутрикожный безыгольный способ . Вакцинацию безыгольным инъектором проводят согласно инструкции по его применению для внутрикожных инъекций препаратов в объеме 0,1 мл. Однако человеко-доза содержит 300 млн. живых микробов. Вакцину вводят строго внутрикожно в левое плечо позади дельтовидной мышцы. Кожу перед введением вакцины обрабатывают так же, как и при других методах вакцинации. Внутрикожные безыгольные прививки сопровождаются почти во всех случаях незначительной болезненностью и воспалительной реакцией на месте введения. Сразу после инъекции на коже возникает папула диаметром до 10 мм в виде «лимонной корочки», которая рассасывается через 1 — 2 ч. Спустя 6 — 10 ч. появляется гиперемия и припухлость, которые достигают максимальной интенсивности (до 2,5 см в диаметре — слабая реакция, до 5 см — средняя реакция, свыше 5 см — сильная реакция) через 24 — 48 ч. и затем, постепенно уменьшаясь в размерах, исчезает через 6 — 7 дней. У отдельных лиц в центре припухлости может возникнуть плотная папула с переходом в пустулу с серовато-белым содержимым, которая затем покрывается корочкой, отпадающей на 8 — 10 сутки после вакцинации. На месте ее остается нежный рубчик, который впоследствии исчезает. За привитыми внутрикожным и подкожным методами необходимо обеспечить медицинское наблюдение в течение часа после иммунизации, так как в редчайших случаях у особо чувствительных лиц возможно возникновение шока.

Кратность и периодичность прививок . Вакцину прививают однократно. Она обеспечивает иммунитет длительностью до 1 года. При ежегодно практикующихся прививках одних и тех же контингентов населения ревакцинация проводится через 12 месяцев. Вакцинацию взрослого населения проводят не ранее чем через 1 месяц, детей — не ранее чем через 2 месяца после прививки другими вакцинами. Вакцинацию взрослых другими препаратами можно проводить не ранее чем через 1 месяц, а детей — не ранее чем через 2 месяца после прививки чумной вакциной.

Размеры первичной дозы. Для вакцинации и ревакцинации используют дозы: вакцинируемым взрослым и детям старше 14 лет доза вакцины (живых микробов) при подкожном способе введения — 300 млн. в 0,5 мл; при внутрикожном — 300 млн. в 0,1 мл; при накожном — 3 млрд. в 0,15 мл(3 капли глазной пипетки). Дети в возрасте от 10 до 14 лет — при подкожном способе введения — 1/2 дозы взрослого в 0,3 мл; при накожном — 3 млрд. в 0,15 мл (3 капли глазной пипетки). Дети в возрасте от 7 до 10 лет — при подкожном — 1/3 дозы взрослого в 0,15 мл; накожном — 2/3 дозы в 0,1 мл (2 капли). Дети от 2 до 7 лет при накожном способе введения-1/3 дозы в 0,05 мл (1 капля).

Побочные действия:

Нормальная реакция организма на введение препарата. Прививки вакциной чумной живой сухой могут сопровождаться общей и местной реакцией, интенсивность которых зависит, кроме индивидуальных особенностей привитых, от метода вакцинации. Накожные прививки сопровождаются главным образом местной реакцией, которая выражается в появлении на месте прививки отечности, гиперемии, мелкой везикулезной сыпи по ходу насечек, иногда инфильтрации. Реже наблюдаются лимфангоиты и регионарные лимфадениты. Местная реакция начинает проявляться через 8 — 10 ч. и достигает полного развития через 24 — 30 ч., в более редких случаях — через 48 ч. после вакцинации. Общая реакция в большинстве случаев бывает незначительной или отсутствует и может сопровождаться повышением температуры в течение 1 суток до 37,5 град.С, у 1 % вакцинированных температура может повышаться от 37,6 до 38,5град.С (средняя реакция). Местная реакция на подкожные и внутрикожные прививки сопровождается распространенной гиперемией, припухлостью, почти во всех случаях наблюдается болезненность. Реже припухают регионарные лимфатические узлы. Местная реакция начинает развиваться через 6 — 10 ч., достигает полного развития через 24 — 48 ч., исчезает через 4 — 5 дней. Общая реакция выражается в недомогании, головной боли, повышении температуры до 37,5град.С (слабая реакция), от 37,6 до 38,5град.С (средняя), от 38,6град.С и выше (сильная). Средние и сильные реакции могут наблюдаться в 29 и 5 % соответственно от общего числа вакцинированных. В редких случаях появляются тошнота и рвота. Общая реакция имеет место на 1 — 2 сутки и обычно исчезает через 1 — 3 суток после вакцинации. Для профилактики общих и местных реакций рекомендуется принимать ацетилсалициловую кислоту по 1,0 г трижды в первые и дважды на вторые и третьи сутки, а также димедрол по 0,05 г или тавегил по 1 таблетке (0,001) дважды в течение 3 суток.

Возможные осложнения при введении препарата и оказание необходимой помощи пациенту при осложнениях. В редких случаях введение чумной вакцины сопровождается значительными реакциями местного и общего характера. При чрезмерных местных реакциях целесообразно назначать внутрь антигистаминные препараты (димедрол 0,05 — 0,1). В случае шока или появления симптомов анафилактоидной реакции у привитых подкожным методом рекомендуется подкожное введение 1 мл адреналина (1: 1000) или 1 мл 5 %-ного эфедрина, или мезатона (1 % — 1,0). Показано также внутривенное введение 1 — 3 мл 10 %-ного раствора хлористого кальция, 20 — 25 мл раствора глюкозы (20 — 40 %), преднизалона (40 — 140 мг в 200 — 500 мл полиглюкина), 0,9 %-ного (изотонического) раствора NaCI с добавлением 0,3 — 0,5 мл адреналина (1: 1000), а также применение кислорода, кордиамина, коразола, кофеина и других симптоматических средств.

Противопоказакния:

Противопоказаниями к применению являются: острые инфекционные заболевания. После перенесения острых заболеваний прививки должны проводиться не ранее чем через 1 месяц после клинического выздоровления. Перенесшим инфекционный гепатит, менингококковую инфекцию прививки проводят не ранее 6 месяцев после выздоровления; активные формы туберкулеза и ревматизма; заболевания сердечно-сосудистой системы (декомпенсированные и субкомпенсированные пороки сердца, гипертония II и III степени, перенесенный инфаркт); язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки; острые и хронические заболевания почек, печени и желчного пузыря; тяжелые формы тиреотоксикоза, сахарный диабет, недостаточность надпочечников и другие болезни эндокринной системы; болезни крови и лимфоидной системы (злокачественное и резко выраженное малокровие, лейкозы, геморрагические диатезы); бронхиальная астма, астматический бронхит, эксудативный диатез и другие аллергические состояния, анафилактические реакции на пищевые, лекарственные и другие аллергены; тяжелые формы рахита и гипотрофии (II и III ст.); заболевания кожи в период клинических проявлений (экзема, нейродермит, фурункулез, распространенные гнойничковые заболевания кожи); вторая половина беременности; злокачественные новообразования, красная волчанка и другие коллагенозы; резко выраженное состояние инфантилизма; болезни нервной системы; травмы с остаточными явлениями, эпилепсия с частыми припадками, гидроцефалия в стадии декомпенсации и субкомпенсации и др. заболевания ЦНС; лечение стероидами, антиметаболитами, рентгенотерапия (прививки допускаются не ранее 6 месяцев после окончания терапии при отсутствии других противопоказаний).

Срок годности:

Срок годности вакцины, высушенной в сахарозо-желатиновой среде с тиомочевиной, — 2 года с последующим переконтролем и продлением еще на год, в сахарозо-желатиновой среде с глютаминово-кислым натрием, тиомочевиной и пептоном — 3 года с момента высушивания, с переконтролем через 3 и 5 лет и продлением его каждый раз еще на 2 года; в лактозо-декстриновой среде с тиомочевиной и аскорбиновой кислотой после контроля жизнеспособности через 6 месяцев с момента изготовления устанавливают срок хранения до 5 лет с последующим переконтролем и продлением еще на 2 года.

Условия хранения:

Вакцину хранят в темном сухом месте при температуре от -20 до +6град.С. При комнатной температуре (20 — 25град.С) вакцину можно хранить до 2-х месяцев, включая срок транспортирования.

Владельцы патента RU 2510825:

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа получения препарата на основе вакцинного штамма чумного микроба. Представленное изобретение предусматривает изготовление посевной нативной культуры чумного микроба, концентрирование микробной суспензии, приготовление вакцинной взвеси и получение сухой формы препарата, при этом приготовление посевной культуры включает культивирование микробов в жидкой питательной среде в бутылях в течение 48 ч при температуре 26…28˚С и непрерывной аэрации не менее 10 л·мин -1 пассированной стабилизированной стартовой культурой, полученной в результате трех последовательных пассажей через организм морских свинок и смешанной в соотношении 2:1 со стабилизирующей глицерино-лактозо-полиглюкиновой жидкостью, при приготовлении вакцинной взвеси используют оптимизированную по компонентному составу защитную среду высушивания, а лиофилизацию проводят соблюдая определенный режим. Представленное решение позволяет получить продукт с повышенной активностью при сокращении продолжительности процесса его изготовления. 3 ил., 6 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способам получения бактерийных препаратов на основе вакцинных штаммов чумного микроба, и может быть использовано для приготовления медицинских иммунобиологических препаратов.

В настоящее время в России единственным препаратом, используемым для специфической профилактики чумы, является вакцина чумная живая сухая, разработанная в 1937…1939 гг. на основе вакцинного штамма EV линии НИИЭГ [Файбич М.М., Карнеев Р.В., 1947 г.]. Длительное применение вакцины чумной живой сухой показало ее высокую эффективность при накожном, внутрикожном, подкожном и ингаляционном способах иммунизации.

Однако проблема сохранения высокоиммуногенных свойств вакцины во многом определяется стабильностью биологических свойств вакцинного штамма чумного микроба, входящего в ее состав, не только в процессе длительного хранения, но и на технологических стадиях производства препарата. Выпускаемые серии вакцины, как показывает практика, могут различаться между собой по физико-химическим свойствам, содержанию живых микробных клеток, термостабильности, остаточной влажности, иммуногенности и другим показателям. Поэтому поиск новых способов получения чумных вакцин, улучшающих их качественные характеристики, является актуальной задачей на современном этапе.

Известен способ получения вакцины чумной живой сухой на основе штамма EV линии НИИЭГ, применяемый в НИПЧИ г. Ставрополя [Промышленный регламент. Регистрационный номер ФГУН ГИСК им. Л.А. Тарасевича ПР №2334-09]. Способ заключается в последовательном приготовлении из производственной лиофилизированной культуры вакцинного штамма EV посевных культур I…III генерации: I генерации - выращиванием в пробирках на скошенном агаре Хоттингера, II генерации - в матрацах (бутылях) с бульоном Хоттингера или бульоном на основе ферментативного гидролизата казеина (ФГК), III генерации - культивированием в жидкой питательной среде (ЖПС) в бутылях, выращивании нативной культуры на плотной питательной среде (ППС) в АКМ-Ш (реакторе), приготовлении вакцинной взвеси и сухого препарата.

Наиболее близким к заявляемому является способ получения вакцины чумной живой сухой на основе вакцинного штамма EV, применяемого в 48 ЦНИИ Минобороны России [Промышленный регламент на производство вакцины чумной живой лиофилизата для приготовления суспензии для инъекций, ингаляций и накожного скарификационного нанесения. ПР 08461522-07-08. Утвержден 03.06.2009 г. Регистрационный номер ФГУН ГИСК им. Л.А. Тарасевича ПР №2120-09]. Способ заключается в последовательном приготовлении из производственной культуры вакцинного штамма EV посевных культур I…III генерации: I генерации - выращиванием микробов в пробирках на скошенной ППС на основе ферментативного гидролизата мяса крупного рогатого скота (ФГМ), II генерации - ЖПС на основе ФГМ во флаконах, III генерации - культивированием в ЖПС на основе ФГМ в бутылях, выращивании нативной культуры в ЖПС, в аппаратах - культиваторах (реакторах), концентрировании микробной взвеси, приготовлении вакцинной взвеси с использованием защитной среды высушивания следующего состава:

лиофилизации вакцинной взвеси по следующему технологическому режиму:

температура конденсатора - минус (50…70)°C;

температура замораживания материала - минус 30°C;

разрежение в сушильной камере - не более 300 мкм рт.ст;

скорость сушки - 2°С·ч -1 ;

время досушивания -10 ч.

Общим с заявляемым способом является аналогичность получения посевной культуры методом выращивания в ЖПС на основе ФГМ в бутылях и концентрирование микробной взвеси.

Основными недостатками способа-прототипа является следующее.

1. Получение традиционного посевного материала, включающее в себя ряд последовательных пересевов на плотных и в жидких питательных средах (посевные культуры I, II, III генераций), не гарантирующих стабильности основных биологических свойств и значительно снижающих резистентность вакцинного штамма чумного микроба к действию внешних факторов на последующих этапах приготовления концентрированной суспензии, вакцинной взвеси и сухой формы готового препарата.

2. Применение в качестве компонента защитной среды высушивания декстрина, который вследствие процессов коагуляции и дальнейшей седиментации, спровоцированной воздействием высокой температуры при автоклавировании, приводит к искусственному увеличению оптической плотности по сравнению с исходной. Это в дальнейшем способствует неадекватности оценки действительной концентрации, возрастанию оптической концентрации микробных клеток непосредственно в вакцинном препарате. Вышеуказанные обстоятельства ведут к нежелательному снижению одного из важнейших показателей качества вакцины чумной живой - процента живых микробных клеток.

3. Использование традиционного режима высушивания вакцинной взвеси с высокой гибелью микробов в условиях лиофильного стресса.

Все вышеперечисленные недостатки требовали серьезного поиска оптимальной схемы приготовления посевного материала, обеспечивающей стабилизацию основных биологических свойств микробов на ранних стадиях производства вакцины, оптимизации компонентного состава среды высушивания для полной протекции микробных клеток перед лиофилизацией и исключения возможных технических ошибок в определении концентрации микробных клеток на стадии приготовления вакцинной взвеси, отработки режимов лиофилизации, позволяющих снизить повреждающее воздействие низких температур и обезвоживания на микробные клетки в процессе сушки.

Задача изобретения заключается в сокращении продолжительности процесса получения вакцинного препарата с одновременным повышением его специфической активности.

Поставленная задача решается благодаря тому, что в заявляемом способе получения вакцины разработаны и оптимизированы (таблица 1):

1. Схема получения посевной культуры штамма чумного микроба, предусматривающая культивирование пассированной стабилизированной стартовой культуры (ПССК) в ЖПС в бутылях.

Для приготовления ПССК ампулу с эталонной культурой штамма чумного микроба ресуспендируют до первоначального объема в дистиллированной воде, а затем проводят последовательные трехкратные тестикулярные пассажи микробной культуры через организм восприимчивых животных (морских свинок). Пассированную микробную культуру стерильно выделяют из организма животных и смешивают в соотношении 2:1 со стабилизирующей жидкостью (глицерин, лактоза и полиглюкин). Приготовленную ПССК, предназначенную для получения посевной культуры в бутылях, разливают во флаконы по 60…80 мл и хранят в замороженном состоянии при температуре минус 18…22°C.

Культивирование микробов в ЖПС в бутылях проводят в течение 48 ч при температуре 26…28°C и непрерывной аэрации не менее 10 л·мин -1 . По окончании выращивания проводят биологический контроль культуры и передают ее в реактор для приготовления нативной культуры.

Сравнительная характеристика нативных культур вакцинного штамма чумного микроба, приготовленных по заявляемой схеме и схеме-прототипу, представлены в таблице 2.

2. Компонентный состав защитной среды высушивания: лактоза, г·л -1 - 300,0; тиомочевина, г·л -1 - 30,0; аскорбиновая кислота, г·л -1 - 30,0; полиглюкин, г·л -1 - 30,0; дистиллированная вода, л - до расчетного объема, водородный показатель среды в пределах 7,4…7,8 ед. pH (таблица 3).

Полиглюкин (полисахарид-структурообразователь)-отечественный декстран, полученный методом направленного синтеза. Молекулярный вес полиглюкина составляет (50…70)·10 3 ед. Являясь продуктом частичного гидролиза декстрина, он обладает идентичными свойствами, но значительно уступает в молекулярной массе. Полиглюкин химически инертен, практически не вступает в соединение с другими веществами. Безвредность, нетоксичность и апирогенность полиглюкина доказаны длительным и успешным применением его в области гемотрансфузиологии. Отсутствие побочного влияния на организм человека допускает его применение в качестве компонентов среды высушивания для вакцин.

В основе его действия на микробные клетки лежит процесс стабилизации конформационного состояния белковых молекул за счет восстановления внутримолекулярных водородных связей. Использование полиглюкина в качестве криопротектора позволяет значительно снизить деструкцию микробных клеток при замораживании и обезвоживании в процессе лиофилизации.

3. Технологический режим лиофильного высушивания по основным параметрам: температура конденсатора минус 60°C, температура замораживания материала минус 40°C, разрежение в сушильной камере (глубина вакуума) не более 100 мкм рт.ст., скорость сушки 3°C·ч -1 , время досушивания 6 ч (таблица 3, рисунки 1-3).

Сокращение продолжительности процесса получения вакцины, стабилизация биологических свойств чумного микроба на стадиях приготовления вакцинных полуфабрикатов и улучшение качественных характеристик сухой формы препарата обусловлено:

1) схемой получения посевной культуры вакцинного штамма чумного микроба, предусматривающей культивирование ПССК в ЖПС в бутылях;

2) применением оптимизированной по компонентному составу защитной среды высушивания;

3) оптимизированным по основным технологическим параметрам режимом лиофилизации.

Причинно-следственная связь между совокупностями существенных признаков заявляемого объекта и достигнутых результатов представлена в таблице 4.

Изобретение позволяет приготовить вакцину, соответствующую предъявляемым требованиям и обладающую стабильными биологическими свойствами на протяжении всего допустимого срока хранения.

Возможность осуществления заявляемого изобретения показана следующим примером.

Для приготовления посевной культуры чумного микроба хранившуюся при отрицательных температурах ПССК вносят в ЖПС на основе ФГМ в бутылях. Выращивание проводят в течение 48 ч при температуре 26…28°C и непрерывной аэрации не менее 10 л·мин -1 . По окончании выращивания культуры в бутылях проводят ее биологический контроль и передают в реакторы для приготовления нативной культуры. Выращивание микробной взвеси в реакторе проводят методом глубинного культивирования в соответствии с требованиями [Промышленный регламент. Регистрационный номер ФГУН ГИСК им. Л.А. Тарасевича ПР №2120-09].

Для приготовления среды высушивания навеску полиглюкина предварительно заливают 100…200 мл теплой 40…50°C дистиллированной воды и выдерживают 10…12 ч при температуре 18…24°C. Полученный гомогенный раствор фильтруют в стерильную посуду через марлевый фильтр.

Навеску лактозы заливают 500 мл дистиллированной воды и подогревают до 80…90°C при постоянном перемешивании до полного растворения. После этого полученный раствор разделяют на две части. В одной части растворяют аскорбиновую кислоту, а в другой - тиомочевину; растворение тиомочевины проводят при температуре 70…80°C. Раствор аскорбиновой кислоты нейтрализуют 40% раствором NaOH до величины 7,3…7,5 ед. pH. Приготовленные растворы тиомочевины и аскорбиновой кислоты фильтруют через марлевый фильтр и смешивают с раствором полиглюкина. Величина pH полученной смеси должна находиться в пределах 7,2…7,6 ед. pH. Корректировку величины pH производят 10% раствором NaOH.

Для корректировки оптической плотности при приготовлении вакцинной взвеси готовят также дополнительный раствор среды высушивания с содержанием компонентов в 10 раз меньшим, чем их содержание в основном растворе среды высушивания. Полученную среду высушивания стерилизуют в автоклаве (текучим паром - 40 мин; при 120°C - 20 мин или фильтрацией на фильтрующих установках типа "Sartorius" SM 16277 или "Сартокон-мини").

В бутыль с концентрированной взвесью чумного микроба при помощи вакуума добавляют среду высушивания из расчета 2:1 (2 части концентрированной взвеси, 1 часть среды высушивания). Содержимое бутыли тщательно перемешивают встряхиванием. После этого отбирают пробу вакцинной взвеси в количестве 200…300 мл для оценки ее биологических свойств. Вакцинную взвесь можно хранить при температуре 2…6°C не более 4 ч.

Вакцинную взвесь разливают в стерильные пенициллиновые флаконы по 2,0 мл в каждый с помощью автоматического дозатора над пламенем спиртовки.

Сублимационное высушивание проводят в установке TG-16. Для этого за 3 ч до загрузки охлаждают полки камеры до температуры минус 40°C, конденсатор до температуры минус 60°C. Кюветы с флаконами устанавливают на 1-5 полки сублиматора. В один из флаконов на полках №1, 3, 5 вставляют датчик температуры. Замораживание вакцинной взвеси проводят до температуры минус 40°C. После достижения указанной температуры вакцинной взвеси делают выдержку в течение 2 ч. Включают вакуумный насос и создают разрежение в установке не более 100 мкм рт.ст. Через 1 ч после создания заданной величины разрежения включают подогрев полок. Далее проводят постепенное повышение температуры до 0°C. Скорость сушки в этот период составляет 3°C·ч -1 . При достижении температуры в материале 0°C с помощью подогрева полок за 6 ч доводят ее до температуры 25…30°C. Скорость сушки в этот период составляет 5…6°C·ч -1 и досушивание проводят при этой температуре в течение 6 ч.

Сравнительные характеристики экспериментально-производственных серий вакцины чумной живой сухой, наработанных по заявляемому способу и способу-прототипу, а также в процессе длительного хранения представлены в таблицах 5 и 6.

Таблица 3
Сравнительная характеристика стадий технологического процесса получения чумной вакцины
Наименование стадии технологического процесса	Описание стадии технологического процесса
прототип (Промышленный регламент ПР №2120-09)	заявляемый объект
ТП - 14	Состав стабилизатора:	Состав стабилизатора:
Приготовление вакцинной взвеси	лактоза, г·л -1 - 300;	лактоза, г·л -1 - 300;
	декстрин, г·л -1 - 30;	полиглюкин, г·л -1 - 30;
Операция BP-14-5	тиомочевина, г·л -1 - 30;	тиомочевина, г·л -1 - 30;
Приготовление стабилизатора		аскорбиновая кислота, г·л -1 - 30;
		вода дистиллированная, л - до расчетного объема.
ТП-15. Розлив вакцинной взвеси и сублимационное высушивание		Технологический режим сублимационного высушивания по основным параметрам: температура конденсатора - минус 60°C;
Операция ТП-15-8 Сублимационное высушивание	температура замораживания материала - минус 30°C; разрежение в сушильной камере (глубина вакуума) - не более 300 мкм рт.ст; скорость сушки 2°C·ч -1 ; время досушивания 10 ч	температура замораживания материала минус - 40°C; разрежение в сушильной камере (глубина вакуума) - не более 100 мкм рт.ст; скорость сушки 3°C·ч -1 ; время досушивания 6 ч.

Таблица 4
Причинно-следственная связь между совокупностями существенных признаков заявляемого объекта и достигнутых результатов
Виды технического результата и их размерность	Показатели фактические и расчетные	Подробное описание, за счет чего стало возможным улучшение показателей предложенного объекта по сравнению с прототипом
прототип	заявляемый объект
Концентрация микробных клеток,			Использование оптимизированного компонента состава защитной среды высушивания и оптимизированного технологического режима лиофильного высушивания
млрд·мл -1: общая (по ОСО мутности ГИСК)	90	75
живых (чашечным методом)	24,5	26,1
	27,2	34,8
Иммуногенность ЕД 50 , ж.м.кл., для:			Использование пассивированной стабилизированной стартовой культуры
белых мышей	11350	9053
морских свинок	7360	5225
Сокращение продолжительности процесса получения вакцины, ч	491	337	Использование пассивированной стабилизированной стартовой культуры и оптимизированного технологического режима лиофильного высушивания

Таблица 5
Сравнительная характеристика биологических показателей вакцины чумной живой сухой в процессе длительного хранения (X ¯ ± I 95 , n=5)
Исследуемая серия вакцины	Концентрация микробов, N·10 9 м. кл.·мл -1 , определенная…	Процент живых микробных клеток	Схема получения посевных культур
по ОСО мутности ГИСК им. Л.А. Тарасевича	Чашечным методом
Свежеприготовленная	75,0±4,0	26,1±2,3	34,8	Заявляемая
Хранившаяся в течение… лет	1	75,0±3,0	25,7±1,9	34,2
	2	75,0±2,0	25,4+2,6	33,8
	3	75,0±2,0	23,3±2,0	31,1
Свежеприготовленная	90,0±2,0	24,5+1,3	27,2	Прототип
Хранившаяся в течение… лет	1	90,0±2,0	23,8+1,5	26,4
	2	90,0±2,0	23,2±1,5	25,7
	3	90,0±2,0	22,5±1,8	25,0

Таблица 6
Характеристика иммунобиологических свойств экспериментально-производственной серии вакцины чумной живой сухой
Показатель качества	Единица измерения	Требования НД (Промышленный регламент ПР №2120-09)	Результаты исследований серий препарата, полученных с использованием…способа
заявляемого	прототипа
Концентрация микробных клеток в 1 мл:
по ОСО мутности ГИСК	млрд	От 50 до 100	75	90
живых	млрд	-	26,1	24,5
Процент живых микробных клеток	процент	25,0, не менее	34,8	27,2
		Препарат должен
Специфическая безвредность	-	быть безвредным при подкожном введении морской свинке массой (275±25)г 15×10 9 микробных клеток (м.кл.) в 1 мл по ОСО мутности ГИСК им. Л.А. Тарасевича	Препарат безвреден при подкожном введении морской свинке массой (275±25) г 15×10 9 микробных клеток (м.кл.) в 1 мл по ОСО мутности ГИСК им. Л.А. Тарасевича
Иммуногенность (ЕД 50):		40000, не более	9053	11350
для белых мышей	ж.м.кл.
для морских свинок		10000, не более	5225	7360

Способ получения препарата на основе вакцинного штамма чумного микроба, предусматривающий изготовление посевной нативной культуры чумного микроба, концентрирование микробной суспензии, приготовление вакцинной взвеси и получение сухой формы препарата, отличающийся тем, что приготовление посевной культуры включает культивирование микробов в жидкой питательной среде в бутылях в течение 48 ч при температуре 26…28˚С и непрерывной аэрации не менее 10 л·мин -1 пассированной стабилизированной стартовой культурой, полученной в результате трех последовательных пассажей через организм морских свинок и смешанной в соотношении 2:1 со стабилизирующей глицерино-лактозо-полиглюкиновой жидкостью, при приготовлении вакцинной взвеси используют оптимизированную по компонентному составу защитную среду высушивания, включающую в себя: лактозу, г·л -1 - 300,0, тиомочевину, г·л -1 - 30,0, аскорбиновую кислоту, г·л -1 - 30,0; полиглюкин, г·л -1 - 30,0; дистиллированную воду, л - до расчетного объема, рН среды 7,4…7,8, а лиофилизацию проводят соблюдая следующий режим: температура конденсатора минус 60°С, температура замораживания материала минус 40°С, разрежение в сушильной камере (глубина вакуума) не более 100 мкм рт.ст., скорость сушки 3°С · ч -1 и времени досушивания 6 ч.

Похожие патенты:

Изобретение относится к биотехнологии. Способ получения спорового материала бактерий рода Clostridium предусматривает получение инокулята бактерий в полноценной синтетической питательной среде, засев инокулята и культивирования в подходящих условиях в питательной среде, включающей картофель, глюкозу, сернокислый аммоний и мел.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложена ассоциация штаммов бактерий-нефтедеструкторов, выделенных из нефтезагрязненной почвы, Acinetobacter species В-1037, Pseudomonas species В-989, Bacillus species B-1040, депонированных в ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор».

Изобретение относится к области биотехнологии. Штамм Bacillus subtilis subsp.subtilis BKM B-2711D обладает выраженным антагонизмом по отношению к Escherichia coli, Salmonella typhi, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes, резистентностью к антибиотикам стрептомицину и тетрациклину.

Сотрудники Саратовского филиала Федерального исследовательского центра вирусологии и микробиологии изучили, какие антитела и механизмы клеточного иммунного ответа активирует чумная живая вакцина у человека. Они выяснили, что присутствие в крови испытуемых специфических антител к белку Pla (активатору плазминогена чумы) служит надежным показателем успешной вакцинации. Научная опубликована в журнале PLoS Neglected Tropical Diseases .

Чума - это инфекционное заболевание, вызываемое бактерией Yersinia pestis (чумной палочкой). Инфекция переносится блохами, живущими на грызунах, в том числе на обильно населяющих города крысах. В прошлом чума уничтожала европейцев миллионами. За последние несколько десятилетий число случаев заражения удалось существенно снизить с помощью вакцинации. Однако это заболевание по-прежнему часто встречается в развивающихся странах. Чтобы препятствовать его распространению, необходимо хорошо понимать, как работает чумная вакцина, и повышать ее эффективность.

Саратовские биологи начали масштабную работу по выявлению механизмов действия живой чумной вакцины. Для этого они взяли образцы крови у 34 добровольцев 26-72 лет, неоднократно привитых против чумы втиранием взвеси живых микробов в специально поврежденную кожу, а также у 17 здоровых непривитых людей того же возраста. Позже людей первой группы разделили на тех, кто проходил вакцинацию менее чем за год до анализа крови (13 человек), и тех, кому делали прививку за год и более до участия в этом исследовании (остальные 21). Ученых интересовало состояние мононуклеарных лимфоцитов в крови испытуемых. Эти клетки обеспечивают иммунный ответ на вторжение в организм различных бактерий, в том числе и чумной палочки.

Исследователи определили, в каких количествах мононуклеарные лимфоциты привитых и непривитых от чумы граждан выделяют вещества, помогающие бороться с бактериями: гамма-интерферон (IFN-γ), фактор некроза опухоли альфа (ФНО-α), а также интерлейкины 4, 10 и 17А. Перед определением содержания названных молекул в мононуклеарных клетках кровь очистили от следов живой чумной вакцины - клеток Yersinia pestis и их фрагментов. В полученные от каждого испытуемого «очищенные растворы» мононуклеарных лимфоцитов добавили белок Pla - активатор плазминогена чумы, фермент чумной палочки, способствующий ее распространению по организму инфицированного и подавление иммунной реакции на Yersinia pestis .

Оказалось, что мононуклеарные лимфоциты вакцинированных выделяют существенно больше интерлейкинов 4 и 10, а также ФНО-α и IFN-γ в ответ на присутствие Pla. Клетки из крови привитых менее года назад были чуть более активны, чем лимфоциты привитых ранее, но эта разница не была статистически значимой. Тем не менее по какой-то причине мононуклеарные лимфоциты не вакцинированных от чумы испытуемых при наличии Pla производят в 3,4 раза больше интерлейкина-4, чем аналогичные клетки из крови привитых. И чем больше раз человеку вводили живую чумную вакцину в прошлом, тем меньше интерлейкина-4 в эксперименте вырабатывали его лимфоциты.

Также исследователи определили в крови испытуемых уровни антител из различных классов иммуноглобулинов, реагирующих на присутствие активатора плазминогена чумы Pla. Многие из них связывались не только с Pla, но и с другими белками. Когда ученым удалось выделить именно те антитела, которые реагируют только на присутствие Pla, оказалось, что больше всего их образуется у тех, кто был вакцинирован относительно давно. Как и в случае с интерлейкином-4, многократные прививки против чумы приводили к тому, что антител из подклассов иммуноглобулинов G1 и G2 в ответ на активатор плазминогена чумы вырабатывалось меньше. Однако в крови многократно привитых в присутствии Pla обнаруживали специфические антитела к этому белку из подкласса иммуноглобулинов G3, а у невакцинированных их не встречали. Напротив, антитела к активатору плазминогена чумы из подкласса иммуноглобулинов G4 присутствовали только у непривитых.

Из полученных данных авторы сделали вывод, что по иммунной реакции организма на активатор плазминогена чумы Pla можно судить об эффективности вакцинации, хотя Pla не единственное вещество, вырабатываемое чумной палочкой и провоцирующее иммунный ответ в теле человека. Однако при этом надо четко отслеживать, выделение и активация каких веществ связаны с появлением Pla в организме, а какие происходят неспецифически. Также ученые предполагают, что многократные введения живой чумной вакцины могут и не повышать эффективность защиты от чумы, так как уровень интерлейкина-4 и антител из подклассов иммуноглобулинов G1 и G2 в крови с каждой вакцинацией падает.