Testul imunosorbent legat de enzime (ELISA)

Testul imunosorbent legat de enzime (ELISA) se realizează în două etape: prima este interacțiunea anticorpilor cu antigenul, a doua este indicarea enzimatică a complexului antigen-anticorp datorită apariției culorii în amestecul de reacție și înregistrarea culorii vizual sau prin metoda spectrofotometrică. .

Există două opțiuni pentru ELISA: fază solidă și fază lichidă, care diferă în metoda de separare a componentelor reacției imunochimice. Comparativ cu metodele descrise anterior pentru detectarea antigenelor și anticorpilor, ELISA are avantaje semnificative:

sensibilitate ridicată, permițând detectarea de până la 0,05 ng/ml dintr-o substanță;

capacitatea de a utiliza volume minime de material de testat (1--2 µl);

posibilitatea de înregistrare instrumentală sau vizuală a reacției;

expresivitate și capacitatea de a automatiza toate etapele reacției.

ELISA este utilizat în prezent pe scară largă în practică pentru diagnosticarea multor boli infecțioase de etiologie bacteriană, fungică, infecții cu protozoare și helmintiază, dar mai ales infecții virale, în special hepatita A, B, C, D, E, G, infecție cu HIV, herpesvirus, rotavirus, adenovirus, astrovirus, parvovirus și alte infecții.

Blotting imun

Principiul metodei de imunoblotare este detectarea anticorpilor la antigenele individuale ale agentului patogen. Folosind această metodă, se determină anticorpi la antigenele HIV (glicoproteine ​​ale anvelopei virale, proteine ​​de bază și enzime virale). Rezultatele imunoblotării sunt evaluate ca pozitive, îndoielnice și negative în funcție de setul cantitativ și calitativ de anticorpi detectați.

Trebuie remarcat faptul că blotting imun este inferioară ca sensibilitate la ELISA; în unele cazuri, poate fi înregistrat un rezultat negativ dacă pacientul are infecție cu HIV. Cu toate acestea, posibilitatea înregistrării rezultatelor fals-pozitive în ELISA pentru infecția cu HIV necesită o abordare integrată a diagnosticului infecției cu HIV, luând în considerare, pe lângă rezultatele reacțiilor imunologice (ELISA, imunoblot), datele epidemiologice și clinice.

Reacția în lanț a polimerazei (PCR)

Metoda PCR a fost dezvoltată de biochimistul american Kary Mullis în 1983, pe baza utilizării ADN-polimerazei termostabile (Tag polymerase) pe care a descoperit-o. Principiul metodei este de a crește de 10 6 --10 8 ori numărul de copii ale unei anumite regiuni ADN a agentului patogen, catalizată in vitro de ADN polimerază în mod automat.

În condiții artificiale, reproducerea procesului de replicare a unei regiuni genomului specifică unei anumite specii sau gen de agenți patogeni este posibilă cu condiția ca secvența sa de nucleotide să fie cunoscută. Utilizarea metodelor de detectare a produselor de replicare a unor astfel de regiuni (ampliconi) ne permite să determinăm prezența unui agent patogen în proba de testat.

Completarea complementară a lanțurilor descrise mai sus începe numai în anumite blocuri de pornire, care sunt secțiuni scurte dublu catenare. Când astfel de blocuri sunt atașate la secțiuni specifice ale ADN-ului, procesul de sinteză a unui nou lanț este direcționat numai în secțiunea selectată și nu de-a lungul întregii lungimi a lanțului ADN. Pentru a crea blocuri de pornire în secțiuni date de ADN, sunt utilizați doi primeri oligonucleotidici, numiți primeri. Primerii sunt complementari secvențelor de ADN de pe granițele din stânga și din dreapta ale unui fragment specific și sunt orientați astfel încât completarea unei noi catene de ADN are loc numai între ei.

LA Avantajele metodei PCR ar trebui să includă:

sensibilitate ridicată, permițând determinarea a 10-1000 de celule într-o probă;

specificitate ridicată, deoarece materialul de testat dezvăluie un fragment de ADN unic pentru un anumit agent patogen;

universalitatea procedurii de detectare a diferiților agenți patogeni dintr-o probă biologică;

Viteză mare de analiză (4--4,5 h);

Posibilitatea de a diagnostica nu numai infecții acute, ci și latente.

Utilizarea PCR este eficientă pentru diagnosticarea unei game largi de infecții bacteriene și virale.

Recent, metode cantitative de analiză PCR au fost implementate cu destul de mult succes, făcând posibilă determinarea concentrației agentului patogen în material (încărcătură microbiană sau virală), de exemplu, pentru a evalua activitatea de replicare a virusului hepatitei B, virusului HIV C. .

Cu toate acestea, trebuie avut în vedere că metoda PCR are și limitările sale, în special, pentru diagnosticarea infecțiilor cauzate de autoflora oportunistă.

Hibridarea acidului nucleic

Hibridarea acizilor nucleici, precum PCR, vă permite să identificați agentul patogen dintr-o probă fără izolare prealabilă. Pentru a efectua analiza, este sintetizată o sondă ADN sau ARN monocatenar, complementară cu secvențele de nucleotide specifice ale agentului patogen. Sonda este marcată cu un radionuclid, enzimă sau altă etichetă ușor de recunoscut. Materialul studiat este supus prelucrării în scopul lizei microorganismelor prezente în biotestul, izolarea și denaturarea ADN-ului. Apoi, sonda este incubată cu proba de testat și se măsoară cantitatea de ADN marcat care a intrat în hibridizare cu ADN-ul din proba de testat. Reacția poate avea loc atât pe sorbanți în fază solidă, cât și în soluție, dar o condiție prealabilă este spălarea cantităților nelegate ale sondei marcate. Sensibilitatea metodei de hibridizare a acidului nucleic este inferioară celei din PCR și este de 10 3 celule microbiene în probă.

IMUNOBLOT(western blot) - o metodă de testare de laborator a serului sanguin pentru prezența anticorpilor la HIV; este un test mai precis decât ELISA și este utilizat pentru a confirma rezultatele ELISA. ELISA - test imunosorbent legat de enzime (ELISA) - un test de laborator care vă permite să determinați prezența anticorpilor HIV în sânge; test de anticorpi HIV.

Conform recomandărilor OMS, imunoblot (Western blot) este utilizat în diagnosticul infecției cu HIV ca metodă suplimentară de expertiză, care ar trebui să confirme rezultatele ELISA. De obicei, această metodă verifică de două ori un rezultat ELISA pozitiv, deoarece este considerată mai sensibilă și mai specifică, deși mai complexă și mai costisitoare.

Immunoblotting combină un test imunosorbent legat de enzime (ELISA) cu separarea electroforetică preliminară a proteinelor virale într-un gel și transferul lor pe o membrană de nitroceluloză. Procedura de imunoblot constă din mai multe etape (). În primul rând, HIV, purificat anterior și distrus în componentele sale constitutive, este supus electroforezei și toți antigenii incluși în virus sunt separați prin greutatea moleculară. Apoi, folosind metoda blotting, antigenele sunt transferate din gel pe o bandă de nitroceluloză sau filtru de nailon, care conține acum un spectru de proteine ​​caracteristice HIV, invizibile pentru ochi. Apoi, materialul de testat (ser, plasma sanguină a pacientului etc.) este aplicat pe bandă, iar dacă există anticorpi specifici în probă, aceștia se leagă de benzile proteice de antigen care le corespund strict. Ca urmare a manipulărilor ulterioare (similar cu ELISA), rezultatul acestei interacțiuni este vizualizat - făcut vizibil. Prezența benzilor în anumite zone ale benzii confirmă prezența în serul testat a anticorpilor la antigenele HIV strict definite.

Imunoblotting este cel mai adesea utilizat pentru a confirma diagnosticul de infecție cu HIV. OMS consideră seruri pozitive în care anticorpii la oricare două proteine ​​ale anvelopei HIV sunt detectați prin imunoblot. Conform acestor recomandări, dacă există o reacție doar cu una dintre proteinele învelișului (gp160, gp120, gp41) în combinație sau fără o reacție cu alte proteine, rezultatul este considerat îndoielnic și se recomandă re-testarea, folosind un kit de la o serie diferită sau de la o altă companie. Dacă și după aceasta rezultatul rămâne îndoielnic, studiile sunt continuate la fiecare 3 luni.

Pentru a efectua imunoblotting, în prima etapă, proteinele conținute în serul sanguin sunt separate într-un gel în funcție de greutatea lor moleculară și de încărcare folosind un câmp electric (electroforeză pe gel). Apoi, o membrană de nitroceluloză sau de nailon este plasată pe gel și „bătată” (aceasta este blotting). Acest lucru se realizează într-o cameră specială, care permite transferul complet al materialului de la gel la membrană. Ca urmare, modelul de aranjament al proteinelor care a fost pe gel este reprodus pe membrană (blot), care poate fi apoi ușor manipulat. Inițial, membrana este tratată cu anticorpi la antigenul dorit și, după spălarea materialului nelegat, se adaugă un conjugat marcat radioactiv care se leagă în mod specific la anticorpi (ca în ELISA). Locația complexului conjugat marcat antigen-anticorp rezultat este determinată prin autoradiografie folosind film cu raze X. După manifestarea sa, totul devine clar dacă există sau nu antigene în sânge.

Imunoblotting este o procedură de diagnostic efectuată în condiții de laborator, ale cărei rezultate dezvăluie anticorpi la agenții patogeni ai diferitelor boli. Unul dintre acestea este virusul imunodeficienței umane. Este imediat de remarcat faptul că un studiu precum imunoblotting pentru HIV este o măsură suplimentară care este prescrisă pentru a confirma un rezultat ELISA pozitiv.

Virusul imunodeficienței umane este o infecție cu progresie lent. Din momentul în care agenții patogeni intră în organism și până la apariția primelor simptome, trece adesea un timp destul de lung, care poate ajunge la câțiva ani.

În stadiul inițial de dezvoltare, manifestările clinice pot fi absente. O creștere a temperaturii generale, stare de rău, dureri în gât, simptomele caracteristice infecției cu HIV sunt confundate de o persoană cu o răceală comună, dar infecția continuă să progreseze. Prin urmare, specialiștii din centrele HIV recomandă efectuarea unui diagnostic cuprinzător în următoarele cazuri:

• dacă ați avut relații sexuale neprotejate cu un nou partener;
• dacă a fost refolosită o seringă sau un ac medical de unică folosință;
• dacă ți-ai făcut recent un tatuaj sau un piercing;
• dacă este detectată o altă infecție, a cărei cale de transmitere este sexuală (de exemplu, sifilis, vaginoză bacteriană, gonoree);
• dacă ați intrat în contact cu o persoană infectată.

Imunoblot pentru HIV se efectuează folosind ser sau plasmă. Un studiu pe o bandă necesită 1,5-2 ml de sânge sau 15-25 µl de ser.

Testul de diagnostic face posibilă detectarea anticorpilor nu numai împotriva virusului imunodeficienței umane, ci și a altor agenți patogeni. În timpul studiului, se folosesc truse speciale care sunt specifice diferitelor boli, de exemplu:

• HSV1 și HSV2 IgM/IgG (pentru a detecta infecția cu virusul herpes);
• Profil TORCH IgM (pentru a detecta toxoplasmoza, rubeola, infectia cu citomegalovirus, HSV 1 si HSV 2);
• EBV IgMTIgG (pentru a detecta infecția cu virusul Epstein-Barr);
• IgG HCV (pentru detectarea hepatitei virale de tip C).

Rezultatul imunoblotării poate fi pozitiv (când sunt detectați anticorpi) și negativ (când anticorpii sunt absenți în materialul biologic), precum și nedeterminat, fals pozitiv și fals negativ.

Unde poți fi testat pentru infecția cu virus și ce să faci în continuare?

Fiecare clinică, laborator privat, spital, clinică este specializată în astfel de activități de diagnosticare. Vă puteți testa la un centru de testare HIV. Unele clinici private oferă consiliere și testare pentru SIDA și HIV la domiciliu.

IMPORTANT! După ce ați primit rezultatele studiului, trebuie să vă adresați medicului dumneavoastră pentru a vă prescrie terapia adecvată.

Teste pozitive

Dacă rezultatele imunoblot sunt pozitive, aceasta nu înseamnă că infecția cu HIV se dezvoltă în organism. Pentru a confirma diagnosticul, sunt prescrise alte studii, de exemplu, imunofluorescența indirectă.

Deși metoda imunoblot este foarte sensibilă, datorită determinării imunoglobulinelor de clasa G, este posibil un rezultat fals pozitiv în primele 3 săptămâni după infecție. În acest caz, testul se repetă după un anumit timp.

Toate motivele pentru obținerea unui rezultat fals pozitiv sunt necunoscute. Cele mai frecvente surse sunt sarcina și administrarea recentă a unui vaccin imunosupresor. Dacă, după ce a trecut un anumit timp după expunerea la astfel de factori, imunoblotul pentru HIV este încă pozitiv, aceasta înseamnă că persoana este infectată.

Rezultat negativ

Un imunblot poate da un rezultat negativ, care semnalează absența anticorpilor împotriva infecției cu HIV în organism și, ca urmare, sănătatea completă.

O imunoblot negativă este adesea observată în „perioada fereastră” (primele 3 luni dintre infecție și apariția anticorpilor în sânge). În această perioadă, testul nu detectează anticorpii corespunzători, dar în alte lichide (sperma, secreții vaginale) aceștia pot fi detectați în volume mari.

Cum se face analiza?

Immunoblot permite identificarea anticorpilor prin examinarea sângelui și folosind electroforeza pe gel.

În primul rând, celulele bacteriene sau virionii sunt distruși prin ultrasunete, după care toți antigenii virusului sau celulele bacteriene sunt separați prin electroforeză. Rezultatul este un reactiv comercial plasat pe o peliculă specială de nitroceluloză.

În timpul imunobtajării, serul de testat este aplicat și pe materialul cu un antigen cunoscut. După ce se efectuează incubarea și spălarea anticorpilor nelegați, se începe un test imunosorbant legat de enzime, imunoglobulinele, care sunt marcate cu o enzimă și un substrat cromogen, care își schimbă culoarea la contactul cu enzima, sunt aplicate pe ser.

Dacă sunt prezenți anticorpi, se vor forma pete pe purtător.

Metoda liniară

Linear blot pentru HIV este un test imunologic indirect, a cărui metodă produce un indicator calitativ al autoanticorpilor din clasa IgG.

În timpul cercetărilor imunologice se folosesc substanțe virale sau antigene în format HIV. În laborator, proteinele HIV sunt combinate cu anticorpi individuali care au fost obținuți din serul sanguin. Apoi, incubarea este efectuată prin adăugarea de anticorpi marcați și imunoglobuline umane.

Diagnosticul HIV la nou-născuți

În corpul unui copil sub 9 luni născut dintr-o femeie infectată, sunt prezenți anticorpi împotriva HIV al mamei, ceea ce determină un rezultat ELISA fals pozitiv. Din acest motiv, se preferă testele virologice - analiza cantitativă a ARN și ADN PCR. Metoda de cultură pentru diagnosticarea infecției este mai sensibilă.

IMPORTANT! Indicațiile pentru efectuarea măsurilor de diagnostic pentru depistarea infecției cu HIV la nou-născuți sunt: ​​nașterea de la o femeie infectată, obținerea unui rezultat discutabil dintr-o analiză efectuată anterior.

Test de sarcina

Deoarece infecția cu HIV care se dezvoltă la o femeie însărcinată poate fi transmisă copilului nenăscut, este necesară diagnosticarea precoce pentru virusul imunodeficienței.

În primul rând, un test imunosorbent legat de enzime este utilizat ca test de screening. Măsura de diagnosticare ajută la detectarea anticorpilor împotriva infecției în serul sanguin. În ciuda rezultatelor exacte ale analizei în timpul sarcinii, sunt necesare teste repetate.

Un tip de ELISA este imunoblotting, care este adesea folosit în timpul sarcinii. Pe baza rezultatelor diagnosticului, este posibil să se identifice anticorpi la anumiți antigeni, care sunt distribuiți în funcție de greutatea moleculară prin electroforeză.

Cum să treci corect testul

Imunoblotting pentru HIV necesită o pregătire specială, ca și alte metode de diagnosticare a bolii. Dacă puteți efectua unele studii și obțineți rezultatele anumitor indicatori pe parcursul zilei (de exemplu, răspunsul la un alergen), atunci trebuie să donați sânge pentru un test imunologic doar dimineața.

Decodificarea rezultatelor

Decodare rezultatele imunoblot sunt efectuate de un lucrător de laborator. Dacă sunt detectate 2 din 3 proteine ​​HIV-1 sau HIV-2, aceasta indică prezența unei infecții corespunzătoare în organism. Studiul este efectuat pentru a confirma un imunotest enzimatic pozitiv. Prin urmare, reacția este testată și pentru proteine ​​precum gp120/160, gp41 în combinație cu p24. Acestea din urmă fac parte din cele trei gene SIDA - gag pol și env.

Diagnosticul primar implică studiul proteinelor p25, gp110/120 și gp160, care indică un stadiu incipient al dezvoltării bolii. Dacă al doilea imunotest serologic enzimatic dă un rezultat pozitiv, se efectuează o imunoblot. Dacă și acesta din urmă dă un rezultat pozitiv, se confirmă diagnosticul de HIV.

Probabilitatea unui rezultat pozitiv depinde de perioada care a trecut de la momentul infecției până la diagnostic:

• după 28 de zile – 60-65%;
• după 42 de zile – 80%;
• după 56 de zile – 90%;
• după 84 de zile – 95%.

Un rezultat fals pozitiv este posibil dacă colectarea de material biologic pentru un diagnostic suplimentar a fost efectuată în timpul sarcinii, în caz de dezechilibru hormonal sau de suprimare prelungită a funcției imune de către anumite medicamente pe care o persoană le ia.

Criterii de evaluare a analizei

Rezultatele analizei ELISA și imunoblot trebuie să îndeplinească următoarele criterii:

• blot-ul materialului biologic studiat coincide cu blot-ul probei de referință;
• greutatea moleculară a componentei principale identificate îndeplinește cerințele specificației.

Impuritatea detectată și conținutul acesteia trebuie să îndeplinească cerințele certificatului pentru materialul de referință.

Rezultate ininterpretabile

În unele cazuri, imunoblotting pentru HIV și SIDA nu corespunde unui rezultat negativ și pozitiv, iar medicul nu poate determina adevăratul motiv al informațiilor îndoielnice. Adesea, cauza interpretării greșite este infecția cauzată de un alt serotip.

Pentru a elimina îndoielile, PCR și ELISA sunt efectuate în dinamică. În absența simptomelor caracteristice bolii timp de șase luni și fără factori de risc, se vorbește despre sănătate deplină. În această etapă, activitățile de diagnosticare sunt finalizate.

Un rezultat discutabil poate fi obținut și dacă în organism se dezvoltă o altă boală infecțioasă, cancer sau reacție alergică.

Important! Dacă rezultatul este discutabil, o persoană nu poate fi donator de sânge sau alt material biologic.

Greșeli tipice la diagnosticarea infecției cu HIV

Colectarea materialului biologic, livrarea și prelucrarea materialelor utilizate în diagnosticarea de laborator trebuie să respecte următoarele reguli:

1. Se întocmește documentația de însoțire indicând denumirea sistemului de testare, data de expirare și seria acestuia.
2. Detaliile pașaportului subiectului, data și locul unde a fost colectat materialul biologic sunt complet indicate.
3. Serul nu se păstrează mai mult decât perioada stabilită; pentru testare se ia un volum admisibil de material de biopsie - cel puțin 2-5 ml.
4. Numărul de pe sticlă corespunde numărului indicat în direcție.
5. Colectarea materialului biologic are loc după reguli stabilite, și anume, din vena ulnară. Sângele testat nu trebuie să conțină cheaguri.

Pentru colectarea materialului se folosește o eprubetă uscată. Sângele din cordonul ombilical este adesea luat de la nou-născuți, indicând acest fapt în direcție.

O greșeală tipică făcută de medici este păstrarea materialului rezultat mai mult de 12 ore la temperatura camerei și mai mult de 1 zi la o temperatură de 4-8 grade Celsius. Datorită apariției hemolizei, rezultatele procedurii de diagnosticare sunt distorsionate.

Deci, greșelile tipice la diagnosticarea infecției cu HIV includ:

• colectarea necorespunzătoare a materialului biologic;
• depozitarea necorespunzătoare a materialului de biopsie;
• transportul necorespunzător al sistemelor de diagnosticare;
• stocarea pe termen lung a sistemului de testare.

Rezultatul este chiar afectat de calitatea apei folosite pentru clătirea recipientelor în care este plasat materialul biologic.

După primirea rezultatelor testelor, lucrătorul de laborator trebuie să emită o concluzie medicului. Dacă diagnosticul a fost efectuat în „perioada fereastră”, el ordonă repetarea diagnosticului după un anumit timp. În orice caz, pentru a pune un diagnostic de infecție cu HIV, un imunblot nu este suficient. Este necesar un diagnostic cuprinzător.

ELISA în fază solidă - o variantă de testare când una dintre componentele reacției imune (antigen sau anticorp) este sorbită pe un purtător solid, de exemplu, în godeurile plăcilor de polistiren. Componentele sunt detectate prin adăugarea de anticorpi sau antigeni marcați. Dacă rezultatul este pozitiv, culoarea cromogenului se schimbă. De fiecare dată după adăugarea unei alte componente, reactivii nelegați sunt îndepărtați din godeuri prin spălare,

La determinarea anticorpilor (figura din stânga), serul de sânge al pacientului, serul antiglobulinic marcat cu o enzimă și un substrat/cromogen pentru enzimă sunt adăugate secvenţial în godeurile plăcilor cu antigenul sorbit.

II. La determinarea unui antigen (figura din dreapta), se adaugă un antigen în godeuri cu anticorpi absorbiți (de exemplu, ser de sânge cu antigenul dorit), un ser de diagnostic împotriva acestuia și anticorpi secundari (împotriva serului de diagnostic), marcați cu o enzimă. , sunt adăugate și apoi un substrat/cromogen pentru enzimă.

ELISA competitivă pentru a identifica antigenele: antigenul țintă și antigenul marcat cu enzimă concurează unul cu celălalt pentru a lega o cantitate limitată de anticorpi serici imunitari.

Un alt test este un ELISA competitiv pentru determinarea anticorpilor: anticorpii doriti si anticorpii marcati cu enzima concureaza intre ei pentru antigenii adsorbiti pe faza solida.

Imunoblotting- o metodă foarte sensibilă pentru detectarea proteinelor, bazată pe o combinație de electroforeză și ELISA sau RIA. Imunoblotting este folosit ca metodă de diagnosticare a infecției cu HIV etc.

Antigenii patogeni sunt separați folosind electroforeză pe gel de poliacrilamidă, apoi transferați din gel pe hârtie activată sau membrană de nitroceluloză și dezvoltați folosind ELISA. Companiile produc astfel de benzi cu „bloturi” de antigene. Pe aceste benzi se aplică serul pacientului. . Apoi, după incubare, pacientul este spălat de anticorpii nelegați și se aplică ser împotriva imunoglobulinelor umane marcate cu o enzimă. . Complexul format pe banda [antigen + anticorp pacient + anticorp împotriva Ig umane] este detectat prin adăugarea unui substrat cromogen care își schimbă culoarea sub acțiunea unei enzime.

52. Interferoni, natură. Metode de preparare și utilizare.

interferonul se referă la proteine ​​importante de protecție ale sistemului imunitar. Descoperit în timpul studiului interferenței virusului, adică fenomenul când animalele sau culturile celulare infectate cu un virus au devenit insensibile la infectarea cu un alt virus. S-a dovedit că interferența se datorează proteinei rezultate, care are proprietăți antivirale protectoare. Această proteină a fost numită interferon.

Interferonul este o familie de proteine ​​glicoproteice care sunt sintetizate de celulele sistemului imunitar și de țesutul conjunctiv. În funcție de celulele care sintetizează interferon, există trei tipuri: α, β și γ-interferoni.

interferon alfa produs de leucocite și se numește leucocite; interferonul beta numit fibroblastic, deoarece este sintetizat de fibroblaste – celule de țesut conjunctiv, și interferon gamma- imun, deoarece este produs de limfocitele T activate, macrofage, celule natural killer, adică celule imunitare.

Interferonul este sintetizat constant în organism, iar concentrația acestuia în sânge se menține la aproximativ 2 UI/ml (1 unitate internațională - UI - este cantitatea de interferon care protejează o cultură celulară de 1 CPD 50 de virus). Producția de interferon crește brusc în timpul infecției cu virusuri, precum și atunci când este expus la inductori de interferon, cum ar fi ARN, ADN și polimeri complecși. Se numesc astfel de inductori de interferon interferonogene.

Pe lângă efectul antiviral, interferonul are protecție antitumorală, deoarece întârzie proliferarea (reproducția) celulelor tumorale, precum și activitatea imunomodulatorie, stimulând fagocitoza, celulele natural killer, reglând formarea de anticorpi de către celulele B, activând expresia majorului. complex de histocompatibilitate.

Mecanism de acțiune interferonul este complex. Interferonul nu afectează direct virusul în afara celulei, ci se leagă de receptori celulari speciali și afectează procesul de reproducere a virusului în interiorul celulei în stadiul sintezei proteinelor.

Utilizarea interferonului. Actiunea interferonului este mai eficienta cu cat incepe mai devreme sa fie sintetizat sau sa patrunda in organism din exterior. Prin urmare, este utilizat în scopuri profilactice pentru multe infecții virale, cum ar fi gripa, precum și în scopuri terapeutice în infecțiile virale cronice, cum ar fi hepatita parenterală (B, C, D), herpes, scleroza multiplă etc. Interferonul dă pozitiv rezultă în tratamentul tumorilor maligne și a bolilor asociate cu imunodeficiențe.

Interferonii sunt specifici unei specii, adică interferonul uman este mai puțin eficient pentru animale și invers. Cu toate acestea, specificitatea acestei specii este relativă.

Primirea interferonului. Interferonul se obține în două moduri: a) prin infectarea leucocitelor sau limfocitelor umane cu un virus sigur, în urma căruia celulele infectate sintetizează interferon, care este apoi izolat și din acesta se construiesc preparate de interferon; b) inginerie genetică - prin creșterea tulpinilor recombinante de bacterii capabile să producă interferon în condiții de producție. În mod obișnuit, sunt utilizate tulpini recombinante de pseudomonas și Escherichia coli cu gene de interferon încorporate în ADN-ul lor. Interferonul obținut prin inginerie genetică se numește recombinant. În țara noastră, interferonul recombinant a primit numele oficial „Reaferon”. Producerea acestui medicament este în multe privințe mai eficientă și mai ieftină decât medicamentul pentru leucocite.

Interferonul recombinant a găsit o utilizare pe scară largă în medicină ca agent preventiv și terapeutic pentru infecții virale, neoplasme și imunodeficiențe.

Ce este un imunblot? Aceasta este o metodă comună pentru diagnosticul de laborator al infecțiilor virale umane. Este considerată una dintre cele mai precise și fiabile modalități de a detecta prezența HIV. În fiabilitatea sa, depășește chiar și rezultatele imunoblot sunt considerate irefutabile și definitive.

Informații generale

Imunoblot - ce este? Pentru a recunoaște infecția cu HIV la o persoană, este necesar să se efectueze un test de laborator al serului sanguin pentru prezența anticorpilor. Tehnica de imunoblot este numită și Western blot. Este folosit pentru a detecta infecțiile virale umane ca metodă suplimentară expertă. Este necesar să se confirme ELISA - un test de laborator care vă permite să determinați prezența anticorpilor HIV în sânge. Un test ELISA pozitiv este verificat de două ori prin imunoblot. Este considerat cel mai sensibil, complex și costisitor.

Scop

Ce este un imunblot? Aceasta este o metodă de laborator pentru testarea serului de sânge pentru prezența anticorpilor împotriva virusului. În timpul studiului, un specialist separă mai întâi proteinele virale într-un gel și le transferă pe o membrană de nitroceluloză. Procedura de imunoblotting are scopul de a detecta HIV în diferite etape. În prima etapă, virusul purificat din părțile sale constitutive este supus electroforezei, iar antigenele incluse în compoziția sa sunt separate prin greutate moleculară.

Se reproduce într-o celulă vie, înglobând informațiile sale genetice în ea. În această etapă, o persoană devine purtătoare a virusului HIV dacă a fost infectată. Specificul bolii este că s-ar putea să nu se manifeste mult timp. Virusul distruge limfocitele, astfel încât imunitatea unei persoane scade și organismul devine incapabil să reziste infecțiilor. Dacă HIV este tratat corect și la timp, pacientul va trăi până la o vârstă înaintată. Lipsa terapiei duce inevitabil la moarte. Din momentul infectării, dar fără tratament, durata maximă de viață nu este mai mare de zece ani.

Particularități

Analiza imunoblot este o metodă fiabilă care vă permite să determinați prezența anticorpilor la antigenele HIV de primul și al doilea tip. Dacă o persoană este infectată, în două săptămâni apar anticorpii, care pot fi detectați mult mai târziu. Particularitatea HIV este că cantitatea de anticorpi crește rapid și rămâne în sângele pacientului. Chiar dacă sunt prezente, boala poate să nu se manifeste timp de doi sau mai mulți ani. Metoda ELISA nu determină întotdeauna cu exactitate prezența bolii, așa că este necesară confirmarea rezultatelor folosind imunoblotting și PCR dacă imunotestul enzimatic arată un rezultat pozitiv.

Indicatii de utilizare

Ce este un „imunoblot” a fost deja descoperit, dar cui este prescris acest studiu? Motivul pentru a fi testat folosind imunoblot este un rezultat ELISA pozitiv. Este necesar să se supună unui imunotest enzimatic pentru pacienții care vor fi supuși unei intervenții chirurgicale. În plus, femeile care planifică o sarcină, precum și orice persoană care este promiscuă, ar trebui să fie testată. Imunoblotting este prescris pacienților cu HIV dacă rezultatele ELISA sunt îndoielnice. Următoarele simptome alarmante pot fi un motiv pentru a consulta un medic:

• pierdere bruscă în greutate;
• slăbiciune, pierderea performanței;
• tulburări intestinale (diaree) care durează trei săptămâni;
• deshidratarea organismului;
• febră;
• ganglioni limfatici măriți pe corp;
• dezvoltarea candidozei, tuberculozei, pneumoniei, toxoplasmozei, exacerbarea herpesului.

Pacientul nu trebuie să se pregătească înainte de a dona sânge venos. Nu trebuie să consumați alimente cu 8-10 ore înainte de test. Cu o zi înainte de donarea sângelui, nu este recomandat să beți băuturi alcoolice sau de cafea, să faceți exerciții fizice intense sau să experimentați anxietate.

Unde se face analiza?

Unde pot fi testat pentru HIV? Studiile ELISA și imunoblot sunt efectuate în clinicile private ale orașului, rezultatele sunt prezentate în 24 de ore. Diagnosticul urgent este de asemenea posibil. În instituțiile medicale publice, testele ELISA și imunoblotting sunt efectuate gratuit, în conformitate cu legislația Federației Ruse. Femeile însărcinate, precum și pacienții care suferă spitalizare sau intervenții chirurgicale, sunt obligați să se supună testelor pentru boli infecțioase.

Cum se desfășoară cercetarea?

Cum se efectuează analiza ELISA? Imunoblotul pozitiv/negativ confirmă sau infirmă rezultatele imunotestului enzimatic. Procedura de cercetare este destul de simplă. Specialistul ia sânge venos, care nu durează mai mult de cinci minute. După prelevarea probelor, locul de injectare trebuie dezinfectat și acoperit cu o bandă. Eșantionarea se efectuează pe stomacul gol, așa că după procedură nu va strica să mănânci un baton de ciocolată neagră sau să bei o băutură caldă dulce.

Pentru a primi o recomandare pentru un test gratuit la o instituție medicală publică, trebuie să vizitați un medic generalist. În general, imunoblotting nu diferă de alte analize de sânge în ceea ce privește metoda de prelevare. Metodologia cercetării este simplă. Dacă există un virus în sângele unei persoane, organismul începe să producă anticorpi pentru a-l distruge. Fiecare virus are propriul său set de proteine ​​antigene. Detectarea acestor anticorpi este baza tehnicii de imunoblot.

Preț

Cât costă analiza? Imunoblot pentru HIV nu este un test ieftin. În medie, o examinare de screening folosind metode imunologice enzimatice costă între 500 și 900 de ruble. Imunoblotting este un studiu de verificare, al cărui cost este de la trei la cinci mii de ruble. Metodele mai complexe sunt mult mai scumpe. De exemplu, va trebui să plătiți aproximativ 12.000 de ruble.

Interpretarea rezultatului

Cele mai comune metode de diagnosticare a infecției cu HIV sunt testele imunosorbente legate de enzime și imunobloturile. Ele sunt utilizate pentru determinarea anticorpilor împotriva virusului imunodeficienței în serul sanguin. Prezența infecției este de obicei confirmată prin două teste: screening și confirmator. Interpretarea rezultatelor studiului trebuie efectuată de un medic, care pune, de asemenea, un diagnostic și prescrie tratament. Dacă imunoblotul este pozitiv, înseamnă că un virus este prezent în corpul uman.

Un rezultat pozitiv nu ar trebui să fie un motiv pentru un tratament independent, deoarece fiecare pacient poate avea o imagine diferită a bolii. Analiza calitativă include screening și verificare. Dacă pacientul nu are un virus, rezultatul este indicat ca „negativ”. Dacă este detectat prin screening, se efectuează un studiu suplimentar de verificare. Un imunblot este un test care confirmă sau infirmă o screening. Dacă pe banda de testare apare întunecare în anumite zone (locații ale proteinelor), se pune un diagnostic de HIV. Dacă rezultatele sunt îndoielnice, testele sunt efectuate în termen de trei luni.

Puteți preveni infectarea cu virusul imunodeficienței dacă respectați anumite reguli: evitați sexul ocazional, folosiți prezervativ în timpul contactului, nu luați medicamente. Dacă boala este detectată la o femeie însărcinată, este important să urmați cu strictețe recomandările medicului curant și să nu uitați să treceți la examinări pentru prezența virusului.