15.1. Caracteristicile laboratoarelor microbiologice și imunologice

Toate lucrările cu microbi se desfășoară în laboratoare, care, în funcție de sarcinile principale, pot fi cercetare, diagnosticare sau producție.

Sistemul de sănătate include:

Laboratoare de diagnostic clinic de tip general sau special (biochimic, bacteriologic, imunologic, citologic etc.) care fac parte din spitale, clinici, dispensare si alte institutii medicale si preventive;

Laboratoarele bacteriologice ale Supravegherii Sanitare și Epidemiologice de Stat (GSN);

Laboratoarele sanitare și bacteriologice ale GSN;

Laboratoarele sanitare și chimice ale guvernului de stat;

Centrale (TsNIL), probleme, industrie, laboratoare educaționale ale universităților;

Laboratoare specializate (în special infecții periculoase etc.).

În prezent, laboratoarele și instituțiile de laborator mai mari (departamente, institute, întreprinderi de producție), de regulă, sunt specializate și lucrează cu unul sau altul grup de microbi.

Aceștia lucrează cu viruși în laboratoare de virologie care au echipamentul adecvat și folosesc metode speciale de cercetare. Există laboratoare micologice și protozoologice. Natură specializată

Sunt, de asemenea, dobânditoare laboratoare bacteriologice, în care munca se concentrează asupra anumitor grupe de bacterii, de exemplu, rickettsial, tuberculoză, leptospiroză, anaerobă, etc. Studiile imunologice sunt efectuate în laboratoarele imunologice, deși anumite tipuri de cercetări pot fi efectuate și în laboratoare microbiologice, de exemplu, serodiagnosticul bolilor infecțioase.

Lucrările de laborator cu microbi patogeni se desfășoară în laboratoare special echipate care asigură condiții de funcționare și măsuri de siguranță, eliminând posibilitatea de infectare a personalului și scurgerea microbilor în afara laboratorului.

Necesitatea unei reglementări clare a condițiilor de lucru cu microbi, care sunt periculoase în diferite grade pentru lucrătorii de laborator și populația din jur, a condus la dezvoltarea unei clasificări a microbilor, împărțindu-i în 4 grupe în funcție de gradul lor de pericol biologic (clasificarea OMS). ). În Rusia, în conformitate cu recomandările OMS, microbii patogeni sunt, de asemenea, împărțiți în 4 grupuri: Grupa 1 - agenți patogeni ai infecțiilor deosebit de periculoase; grupa 2 - agenți patogeni ai bolilor epidemice umane foarte contagioase; Grupa a 3-a - agenți cauzali ai bolilor infecțioase, alocați unor grupuri nosologice independente; Al 4-lea grup - microbi patogeni condiționat - agenți cauzali ai infecțiilor oportuniste. Numerotarea grupurilor de microbi adoptate în Rusia diferă în ordine inversă față de clasificarea OMS, unde microbii cu cea mai scăzută patogenitate aparțin grupului 1 și în special cei periculoși grupului al 4-lea.

În conformitate cu împărțirea microbilor în grupuri în funcție de gradul de pericol biologic, laboratoarele sunt, de asemenea, împărțite în categorii. Conform nomenclaturii OMS, există 3 categorii de laboratoare microbiologice:

Laboratoare de bază (de tip principal sau general), care, datorită caracteristicilor specifice lucrării, pot fi dotate cu diverse dispozitive de protecție;

Laboratoare de securitate (izolate) și laboratoare cu regim special (izolare maximă).

Siguranța muncii în laboratoarele de toate categoriile este asigurată prin respectarea rutinei și regulilor de lucru în laborator, respectarea cerințelor pentru spațiile de laborator și echipamentele acestora și dotarea laboratoarelor cu echipamente adecvate.

monitorizarea medicală a stării de sănătate a angajaților, educarea și instruirea personalului în procedurile de siguranță în laborator.

15.2. Echipamente pentru laboratoare microbiologice si imunologice

Spațiile de bază ale laboratorului trebuie să fie spațioase pentru a asigura desfășurarea în siguranță a lucrărilor de laborator. Pereții, tavanele și podelele trebuie să aibă o suprafață netedă, ușor de curățat, impermeabilă la lichide și rezistentă la dezinfectanții utilizați în mod obișnuit în laborator. Suprafața meselor de lucru trebuie să fie impermeabilă, rezistentă la dezinfectanți, acizi, alcalii, solvenți organici și căldură moderată. Mobilierul de laborator trebuie să fie durabil. Spațiul de sub mese și dintre mobilier trebuie să fie ușor accesibil pentru curățare. Laboratorul trebuie să aibă o autoclavă pentru dezinfecția deșeurilor.

Echipamentul de bază de laborator trebuie să limiteze sau să prevină contactul microbiologului cu materialul infecțios și trebuie să fie realizat din materiale durabile, impermeabile la lichide și rezistente la coroziune. Echipamentul trebuie proiectat și instalat astfel încât să poată fi curățat, dezinfectat și inspectat cu ușurință.

Laboratorul este dotat cu un microscop, un autoclav, termostate, dulapuri de uscare și sterilizare, un aparat de coagulare a zerului, un distilator, centrifuge, cântare de laborator, un pH-metru, FEC, un agitator magnetic și o baie de spălare.

Spațiile de lucru ale laboratorului trebuie să fie dotate cu alimentare cu apă rece și caldă, electricitate, vid, oxigen, aer de înaltă presiune etc. Unele birouri sunt dotate cu cutii si hote.

Spațiile necesare includ laboratoare de infecții intestinale și picături, sanitar-bacteriologice, serologice, precum și spații auxiliare: pregătire medii, spălare, sterilizare (curată și murdară), înregistrare, depozite, baie angajat, vivarium. În laboratoarele cu puncte de testare pentru transportul microorganismelor, acestea vor dota suplimentar o zonă de recepție, o cameră de tratament și toalete pentru colectare.

material. Spațiile sunt amplasate în așa fel încât fluxurile murdare și curate să nu se traverseze sau să nu se atingă.

Pentru spațiile laboratoarelor de înaltă securitate trebuie respectate aceleași cerințe ca și cele prevăzute pentru laboratorul de bază. În plus, acest tip de laborator ar trebui să fie separat de acele părți ale clădirii în care circulația angajaților nu este restricționată. Instalațiile pentru spălarea mâinilor trebuie să fie echipate cu o pedală de picior sau un mecanism acţionat cu cotul pentru deschiderea apei. Ferestrele trebuie să fie închise și sigilate. Ușile de intrare în incinta laboratorului trebuie să se închidă automat și să poată fi lacăt. Ventilația de evacuare este proiectată astfel încât cea mai scăzută presiune să fie creată în încăperile cu cel mai mare risc de infecție. În acest caz, mișcarea aerului va avea loc din încăperile auxiliare în direcția camerei principale de lucru. Aerul evacuat este eliberat în mediu numai după ce a fost filtrat prin filtre bacteriene. Atunci când echipează laboratoarele de înaltă securitate cu echipamente, acestea sunt ghidate de recomandările elaborate pentru laboratoarele de bază, cu plus că toate lucrările cu material infecțios în ele se desfășoară în cutii de protecție. În modul laboratoarelor maxim izolate, există o serie de caracteristici pentru a asigura siguranța biologică maximă a personalului, a publicului și a mediului. Intrarea și ieșirea din laborator se realizează printr-un punct de control sanitar. La intrare este necesară schimbarea completă a hainelor în haine speciale; la ieșire, înainte de schimbarea hainelor, este necesară igienizarea țintită (duș, dezinfectanți) a personalului. Pentru a reduce riscul de intrare a materialelor infecțioase în mediu, se folosește boxul. Prin utilizarea cutii (desktop, laminar) creează bariere fizice pentru a preveni posibilul contact al personalului de lucru cu materialul infecțios.

15.3. Reguli de lucru într-un laborator microbiologic

Regulile de bază pentru lucrul într-un laborator de bază includ:

Interzicerea lucrului cu pipeta folosind gura;

Interzicerea de a mânca, de a bea, de a fumat, de a păstra alimente și de a folosi produse cosmetice în zonele de lucru;

Menținerea curățeniei și ordinii;

Dezinfectați suprafețele de lucru cel puțin o dată pe zi și după fiecare contact cu material infecțios;

Personalul care se spală pe mâini după ce a lucrat cu materiale infecțioase, animale și înainte de a părăsi laboratorul;

Efectuarea tuturor lucrărilor astfel încât să se minimizeze posibilitatea formării de aerosoli;

Decontaminați toate materialele contaminate înainte de eliminare sau reutilizare.

15.4. Principiile diagnosticului microbiologic al bolilor infecțioase

Cel mai important loc în diagnosticul de laborator al bolilor infecțioase îl ocupă diagnosticul microbiologic specific, care se realizează în laboratoare bacteriologice, virusologice, imunologice și de altă natură. Se compune din trei etape: pre-analitică, analitică și post-analitică.

Prima etapă a diagnosticului microbiologic este preanalitice, inclusiv luarea de material pentru cercetare. Alegerea materialului de testat este determinată de patogeneza și tabloul clinic al bolii infecțioase. Materialul de testat este preluat, dacă este posibil, în condiții aseptice, plasat în recipiente sterile și livrat la laborator cât mai repede posibil (de preferință în decurs de 1 oră). În unele cazuri, însămânțarea materialului se efectuează la patul pacientului. Uneori este permisă depozitarea pe termen scurt a materialului în condiții reglementate. Materialul studiat este însoțit de un document care trebuie să indice momentul colectării, natura materialului, sursa acestuia și să definească cu precizie scopul studiului.

Materialul pentru cercetarea în microbiologie medicală este diverse fluide biologice și patologice ale corpului (sânge, puroi, urină, spută, lichior, fecale, vărsături, apă de spălat etc.) și țesut - material de biopsie de la o persoană vie sau autopsie de la un cadavru. În microbiologia sanitară, obiectele de mediu (aer, apă, produse alimentare etc.) sau tampoane din acestea sunt luate pentru cercetare. La colectarea materialului

Pentru cercetarea microbiologică, trebuie respectate următoarele reguli:

Materialul este preluat direct de la sursa de infecție sau se examinează scurgerea corespunzătoare (puroi, urină, bilă etc.);

Cantitatea de material ar trebui să fie suficientă pentru a efectua studiul și pentru a-l repeta dacă este necesar;

Materialul este luat, dacă este posibil, în perioada inițială a bolii, deoarece în această perioadă agenții patogeni sunt izolați mai des, sunt mai mulți, au o localizare mai tipică;

Materialul este luat înainte de începerea chimioterapiei antimicrobiene sau după o anumită perioadă de timp după administrarea medicamentului antibacterian, necesar pentru îndepărtarea acestuia din organism;

Trebuie prevenită posibilitatea ca agenți antimicrobieni (dezinfectanți, antiseptice, antibiotice) să intre în material;

Transportul materialului la laborator trebuie efectuat cât mai repede posibil, în condiții care exclud moartea unor specii instabile de microbi, sau trebuie plasat în medii speciale de transport;

În timpul transportului, trebuie respectate toate reglementările de siguranță biologică;

Materialului este atașat un document de însoțire, care conține informațiile de bază necesare efectuării unui studiu microbiologic (numele, prenumele, patronimul pacientului, numărul istoricului medical, diagnosticul clinic etc.).

15.5. Metode de diagnostic microbiologic

Etapa analitică include metode microscopice, culturale, biologice, serologice și alergologice de diagnostic microbiologic.

Metoda microscopică constă în prepararea preparatelor (native sau colorate prin metode simple sau complexe) din materialul studiat și microscopia acestora cu ajutorul diferitelor tipuri de echipamente microscopice (luminoasă, în câmp întunecat, în contrast de fază, fluorescent, electronic etc.). În bacteriologie, metoda microscopică se numește bacterioscopică, în virologie - virusoscopică.

Metoda de cultură constă în inocularea materialului de testat pe medii nutritive artificiale, culturi celulare sau embrioni de pui pentru a izola și identifica o cultură pură a agentului patogen sau a agenților patogeni. În bacteriologie se numește metoda de cultură bacteriologic, in micologie - micologic, în protozoologie - protozoologice, in virologie - virusologic.

Metoda biologică (experimental sau biotest) constă în infectarea animalelor sensibile de laborator sau a altor obiecte biologice (embrioni de pui, culturi celulare) cu materialul de testat. Este utilizat pentru a izola o cultură pură a agentului patogen, a determina tipul de toxină, activitatea medicamentelor antimicrobiene pentru chimioterapie etc.

Metoda serologică constă în determinarea titrului de anticorpi specifici din serul sanguin al pacientului, mai rar - în detectarea unui antigen microbian în materialul de testat. Reacțiile imune sunt utilizate în acest scop.

Metoda alergologica constă în identificarea unei alergii infecțioase (HRT) la un alergen de diagnostic al medicamentului microbian. În acest scop, se efectuează teste de alergie cutanată cu alergenii corespunzători.

Valoarea diagnostică a acestor metode este inegală. Metoda principală de diagnostic microbiologic este metoda bacteriologica, deoarece vă permite să izolați și să identificați microbul patogen, i.e. cauza principală a bolii. Alte metode sunt mai puțin informative, deoarece fac posibilă detectarea modificărilor în organism cauzate de prezența unui microbi în el. Al doilea loc în importanță este metoda serologica, întrucât interacţiunea dintre antigen şi anticorp este caracterizată printr-un grad ridicat de specificitate. Conținutul informațional al celorlalte trei metode este scăzut și servesc de obicei ca o completare a metodelor bacteriologice și serologice. Astfel, microscopia materialului studiat nu ne permite întotdeauna să vedem și să identificăm microbii la microscop. Ele pot fi detectate numai atunci când materialul este foarte contaminat cu ele. Chiar și găsind bacterii la microscop, este imposibil să le identificăm morfologic la specie. După cum se știe, diversitatea tuturor speciilor de bacterii este redusă la 4 forme morfologice principale: coci, bastonașe, forme contorte și ramificate. Prin urmare, conform micro-

În imaginea scopică, bacteriile observate pot fi atribuite foarte provizoriu unui taxon mare, de exemplu, coci gram-pozitivi. Numai în cazuri izolate, când bacteriile au o morfologie unică, pot determina microscopic genul lor. Conținutul informațional al metodei microscopice a ciupercilor și protozoarelor este mai mare, deoarece ciupercile și protozoarele, fiind eucariote, au dimensiuni mai mari și o morfologie mai caracteristică.

Capacitățile de diagnosticare ale metodei biologice sunt limitate de faptul că animalele de laborator sunt imune la majoritatea agenților patogeni ai infecțiilor antroponotice umane, deci nu este posibil să se provoace o infecție experimentală în ele.

Posibilitățile metodei alergologice sunt limitate de faptul că majoritatea microbilor din corpul uman nu provoacă HRT.

Deoarece studiile microbiologice sunt unul dintre cele mai costisitoare tipuri de cercetare de laborator, microbiologul se confruntă cu sarcina de a face un diagnostic microbiologic de încredere cu cel mai mic timp, efort și bani. Prin urmare, se folosesc 1-5 metode de diagnosticare pentru a face un diagnostic, astfel încât setul de metode selectat să garanteze răspunsul corect.

De o importanță deosebită sunt metodele de diagnosticare expresă, care permit realizarea unui diagnostic microbiologic într-o perioadă scurtă de timp (de la câteva minute la câteva ore) din momentul în care materialul de testat este livrat la laborator. Metodele expres includ RIF, ELISA, RIA, PCR, utilizarea biocipurilor, cromatografia, etc. Caracteristicile diagnosticului infecțiilor anaerobe sunt descrise în materialele discului.

Alături de metodele clasice tradiționale de diagnosticare microbiologică, în ultimii ani au devenit din ce în ce mai importante metodele de diagnostic biologic molecular (sonde ADN, PCR, reacție în lanț al ligazei - LCR, cromatografia, electroforeză, imunoblot, biocipuri etc.).

Metodele de diagnostic biologic molecular se bazează pe identificarea ADN-ului și ARN-ului specific unei specii microbiene date și includ hibridizarea bazată pe sonde ADN și diagnosticare bazată pe PCR.

Post-analitic Etapa diagnosticului microbiologic constă în interpretarea clinică a rezultatelor de laborator. În acest caz, medicul curant trebuie să evalueze semnificația etiologică a microbilor izolați de la pacient, să ajusteze chimioterapia antimicrobiană empirică administrată pacientului pe baza datelor de monitorizare microbiologică etc.

15.5.1. Metode de diagnostic microbiologic al infecțiilor bacteriene

În bacteriologie, metodele bacterioscopice, bacteriologice și biologice sunt utilizate pentru a detecta agenții patogeni din materialul studiat.

Avantajele metodei bacterioscopice sunt simplitatea, viteza și eficiența. Cu toate acestea, găsește o aplicație limitată, deoarece poate fi utilizat numai dacă există caracteristici morfologice sau tinctoriale ale agentului patogen și conținutul său suficient în materialul studiat. Această metodă este orientativă.

Principala și cea mai precisă metodă de diagnosticare a infecțiilor bacteriene este bacteriologică, care este utilizată pentru aproape toate bolile, în ciuda deficiențelor sale: durata studiului (de la 4-5 zile la 2 luni), pericol (deoarece o cultură pură a agentului patogen). se acumulează), cost comparativ ridicat. În cazul în care conținutul agentului patogen în cantități suficiente este de așteptat în materialul de testat, inocularea materialului se efectuează pe medii nutritive dense pentru a obține colonii izolate. Cu un conținut scăzut de microbi, materialul de testat este mai întâi semănat pe medii nutritive lichide - medii de îmbogățire. Cultura pură izolată se identifică prin proprietăți morfologice, tinctoriale, culturale, biochimice, antigenice și toxigene (în funcție de tipul de agent patogen). Determinarea proprietăților enumerate vă permite să determinați tipul de agent patogen. În scopul marcajului epidemiologic, se realizează identificarea intraspecifică a culturii izolate: se determină fagovarul, biovarul etc.. În plus, pentru a prescrie un tratament rațional, de regulă, se determină sensibilitatea culturii izolate la antibiotice.

În diagnosticul microbiologic al bolilor cauzate de microbi oportuniști, reprezentanți ai microflorei normale, este obligatoriu să se determine numărul de agenți patogeni din materialul de testat.

Metoda biologică este neeconomică, inumană și, prin urmare, își găsește o aplicare limitată. Șoarecii albi, cobai, iepuri, maimuțe și alte animale sunt utilizați ca animale de experiment.

Diagnosticul unei boli infecțioase poate fi stabilit și folosind o metodă serologică, care face posibilă detectarea fie a anticorpilor specifici în serul pacientului, fie a antigenelor specifice direct în materialul de testat. Anticorpii la agentul cauzal al bolii apar, de regulă, până la sfârșitul primei săptămâni de boală. Incapacitatea de a le detecta în primele zile ale bolii este un dezavantaj serios al metodei, mai ales în cazurile în care boala este acută. În plus, multe boli necesită studierea dinamicii formării anticorpilor și identificarea unei creșteri a numărului de anticorpi, ceea ce, de asemenea, nu permite un diagnostic rapid. Dezavantajul acestei metode este că nu poate fi utilizată pentru a identifica cu exactitate agentul patogen și a determina antibiograma acestuia. Dar, în același timp, este o metodă complet sigură, relativ ieftină, care vă permite să faceți un diagnostic într-un timp scurt. În prezent, pentru o serie de boli, se determină nu numai cantitatea, ci și clasele de imunoglobuline.

Pentru unele boli, metoda serologică este utilizată pentru identificarea antigenelor specifice din materialul de testat. Deoarece antigenele specifice care alcătuiesc agentul patogen sunt prezenți în materialul patologic încă din primele minute ale bolii, această versiune a metodei serologice este utilizată pentru diagnosticare accelerată (în prima zi de boală) sau chiar rapidă (în câteva ore) a bolilor infectioase.

Ca metodă auxiliară pentru un grup mic de boli infecțioase, se utilizează metoda alergologică, care face posibilă identificarea sensibilității crescute la antigenul specific (alergen) care este agentul cauzal al bolii.

15.5.2. Metode de diagnostic microbiologic al infecțiilor virale

În virologie, metodele de diagnosticare de laborator a infecțiilor virale au propriile lor specificități, ținând cont de particularitățile biologiei virusurilor. Se folosesc metode de diagnostic de laborator virusoscopice, virologice și serologice.

Metoda viruscopică presupune detectarea virusului în materialul studiat la microscop. Un microscop electronic este folosit mai des, iar un microscop fluorescent este folosit mai rar. Microscopia cu lumină practic nu este utilizată din cauza dimensiunii neglijabile a virușilor. Numai pentru a detecta viruși mari folosind metode de supracolorare poate fi folosit un microscop cu lumină. În plus, folosind un microscop cu lumină, puteți identifica incluziuni intracelulare care se formează în celulele afectate în timpul unor infecții.

Metoda virologică constă în infectarea unui model biologic sensibil (animale de laborator, embrioni de pui sau culturi celulare) cu materialul de testat, indicând virusul și identificarea ulterioară a acestuia. Când animalele de laborator sunt infectate, virușii sunt de obicei identificați pe baza tabloului clinic al bolii, modificărilor patologice și anatomice, provizoriu și în final, de exemplu, folosind reacția de hemaglutinare. Aceeași reacție face posibilă detectarea virușilor într-un embrion de pui, care, de regulă, nu prezintă modificări vizibile la autopsie. În cultura celulară, prezența virusului este determinată de efectul său citopatic (inclusiv formarea de incluziuni intracelulare), de hemadsorbție, de fenomenul de formare a plăcii, de reacția de hemaglutinare și de absența modificărilor de culoare a indicatorului. Identificarea virusului se realizează folosind reacții serologice (RPGA, RTGA, RN, RSK, ELISA etc.). Metoda virologică vă permite să determinați cu exactitate natura agentului patogen, dar necesită timp suficient (5-7 zile sau mai mult), costuri materiale semnificative și este nesigură.

O caracteristică specială a metodei serologice în virologie este studiul serurilor pereche. Primul ser se ia de la pacient în perioada acută la debutul bolii, se păstrează la o temperatură de 4-8°C, iar al doilea ser se ia după 10-14 zile. Seruri

investigate simultan. Boala este indicată prin seroconversie, adică. o creștere a titrului de anticorpi în al doilea ser față de primul. Seroconversia de 4 ori sau mai mare este diagnostic. Deoarece multe boli virale sunt acute, această versiune a metodei serologice este de obicei utilizată pentru diagnosticul retrospectiv.

Metoda principală de diagnostic de laborator al infecțiilor virale este virusologică.

Diagnosticul accelerat și expres al bolilor virale se realizează în același mod ca și în cazul infecțiilor bacteriene.

15.5.3. Caracteristicile diagnosticului microbiologic al micozelor

Pentru a diagnostica infecțiile fungice, se utilizează de obicei o metodă microscopică. Metoda micologică constă în inocularea materialului patologic pe medii nutritive speciale, izolarea unei culturi pure a agentului patogen și identificarea acesteia prin proprietăți morfologice, culturale și biochimice. Particularitatea acestei metode este durata sa - câteva săptămâni din cauza creșterii lente a ciupercilor. Detectarea anticorpilor în timpul testării serologice este posibilă din a 2-a-4-a săptămână de boală. Pentru unele boli, în materialul de testat sunt detectați antigeni specifici. Metoda alergologică este rar folosită. Adesea, pentru micoze, se folosește o metodă histologică, care constă în depistarea elementelor fungice (spori, capete conidiale etc.) în organele și țesuturile afectate de ciuperci. În acest scop, se prepară secțiuni histologice subțiri sau ultrasubțiri de țesut, se colorează folosind metode histologice și histochimice speciale și se examinează cu ajutorul microscopiei luminoase și, dacă este necesar, electronică.

15.5.4. Caracteristicile diagnosticului microbiologic al infecțiilor cu protozoare

Examenul microscopic al materialului patologic constă în prepararea atât a preparatelor native („picătură groasă”), cât și a frotiurilor colorate prin metoda Romanovsky-Giemsa, fiind principala metodă de diagnosticare a bolilor cauzate de protozoare. În unele cazuri, se folosesc metode de diagnostic serologic și alergologic.

15.6. Principiile diagnosticului imunologic al bolilor umane

Imunodiagnosticul este o ramură a imunologiei care studiază și dezvoltă metode de diagnosticare a bolilor infecțioase și neinfecțioase asociate cu funcția sistemului imunitar.

Multe boli infecțioase au suferit în prezent modificări semnificative, ceea ce se reflectă într-o creștere a proporției formelor ușoare, șterse și asimptomatice, o creștere a componentei alergice și o frecvență ridicată a infecțiilor mixte. Acest lucru complică diagnosticul tradițional al bolilor, astfel încât importanța imunodiagnosticului care vizează căutarea antigenelor patogeni sau a modificărilor imune specifice în corpul pacientului crește.

Imunoreactivitatea (starea imunitară, profilul imunitar) se referă la capacitatea sistemului imunitar de a genera un răspuns imun la un moment dat. Se caracterizează prin concentrația de imunoglobuline, numărul de limfocite și leucocite, raportul dintre celulele T și B și indicatori funcționali, în special capacitatea celulelor imunocompetente de a răspunde la stimulare.

15.7. Controlul calității testelor de laborator

Un element important al activității unui laborator microbiologic și imunologic este obținerea de rezultate exacte și comparabile ale testelor, pentru care este necesară monitorizarea calității studiilor efectuate. Controlul calității poate fi intern și extern.

Controlul calității în laborator - un sistem de măsuri de control care se desfășoară într-un laborator separat de către personalul acestui laborator și au ca scop asigurarea unui nivel adecvat de calitate a muncii laboratorului.

Control extern de calitate - un sistem de măsuri de control care se desfășoară în cadrul Sistemului federal unificat de evaluare externă a calității (FSVOK) a cercetării de laborator de către grupuri de experți și au ca scop asigurarea organizării corecte a proceselor tehnologice pentru producerea cercetării de laborator.

Sistemul federal de evaluare externă a calității cercetării de laborator este format din secțiuni, în cadrul fiecăreia dintre ele

Se evaluează calitatea unui anumit tip de cercetare de laborator. Structura FSVOC include grupuri de experți pentru dezvoltarea și implementarea controlului extern al calității în diferite tipuri de teste de laborator.

Sarcini pentru auto-pregătire (autocontrol)

A.Denumiți o metodă de cercetare microbiologică care vă permite să stabiliți tipul de agent patogen:

1. Alergic.

2. Microscopic.

3. Cultural.

4. Biologic.

B.Numiți sarcina principală a metodei de cercetare bacteriologică.

B.În a 7-a zi de boală s-a prelevat ser de la un pacient cu suspiciune de infecție virală, în care au fost detectați anticorpi antivirali specifici. Evaluați fiabilitatea rezultatului cercetării obținute.

G.Numiți tipul de laborator către care trebuie trimis materialul de la un pacient suspectat de a avea o infecție deosebit de periculoasă.

• anamneză, examinare, auscultare, examinare a organelor ORL;
• teste cutanate (prick test, scarificare) cu o gamă largă de alergeni;
• teste provocatoare (nazale, conjunctivale și inhalatorie);
• examen de screening imunologic;
• studiul statusului interferonului;
• examenul de screening al alergiei (determinarea prin ELISA a nivelului de anticorpi IgE specifici, IgG la alergeni casnici, epidermici, alimentari, de polen);
• studiul funcției de respirație externă (RPF);
• analize generale de sânge, analize de spută, citologia secrețiilor nazale - conform indicațiilor.

Consultația inițială cu un alergolog-imunolog începe cu un interviu cu pacientul. La diagnosticarea alergiilor, este necesar să se afle de la pacient când au apărut simptomele bolii pentru prima dată, condițiile de apariție și dezvoltare a acestora, în care cazuri reacția alergică este cel mai exprimată, condițiile de viață și de muncă, prezența animalelor, dacă există boli alergice la rude etc.

Următoarea etapă este diagnosticarea bolilor alergice prin efectuarea de teste cutanate (prick test, scarificare) cu polen, menajer, epidermici și alergeni alimentari.

În timpul testării cutanate, alergeni specifici sunt aplicați pe piele sau injectați în piele. Prezența unei alergii este apreciată de reacția la acestea (roșeață, apariția unei reacții alergice la locul de aplicare/injectare a alergenului).

Pentru a identifica bronhospasmul ascuns, se efectuează un studiu al funcției respiratorii externe (PRF).

Pacienții cu răceli frecvente, exacerbări ale bolilor cronice, herpes, boli alergice, patologie ORL cronică, febră prelungită de grad scăzut, stări de imunodeficiență etc. sunt supuși unui studiu al stării imune (determinând starea sistemului imunitar) și al interferonului.

Ce este o imunograma

Imunograma este un studiu al principalelor indicatori ai sistemului imunitar uman. De obicei, principalii parametri ai apărării imune umane sunt determinați: numărul și capacitatea funcțională (de exemplu, indici fagocitari) a leucocitelor, procentul acestora; imunitatea celulară - numărul total de limfocite T și populațiile acestora; imunitatea umorală - nivelul imunoglobulinelor (anticorpilor) din clasele A, M, G, E și numărul de limfocite B; determinarea indicatorilor sistemului de compliment și interferonului.

După ce alergenul este detectat și se stabilește cauza bolii, se prescrie tratamentul. În prezent, au fost dezvoltate un număr mare de metode de examinare imuno-alergică a pacienților, inclusiv cele mai moderne metode de diagnosticare a alergiilor. Medicul alergolog-imunolog întocmește un plan individual de examinare în fiecare caz concret. La urma urmei, un diagnostic corect și elaborarea unui plan de tratament sunt posibile numai după o examinare cuprinzătoare.

Test de cădere.

Pentru efectuarea testelor de cădere a pielii se folosesc soluții apoase de substanțe. În mod obișnuit, se folosesc concentrații scăzute de alergeni, de exemplu, soluție de novocaină 0,25%, 50.000 de penicilină. O picătură de soluție de alergen se aplică pe pielea intactă (suprafața volară) a antebrațului și a abdomenului. În același timp, se efectuează un test de picătură de control cu ​​un solvent (soluție salină sau apă distilată).

Rezultatele testului de picătură se înregistrează după 20 de minute și la o zi după aplicarea soluției de testare a substanței medicamentoase. Dacă există hiperemie sau umflare la locul de aplicare a medicamentului, atunci reacția este pozitivă, acest medicament nu poate fi prescris.

Test de piele cu plasture.

Testele de plasture cutanate se fac pe suprafața volară a antebrațului, pe abdomen și pe spate. În acest caz, se aplică pe piele un tifon de 2x2 cm umezit cu o soluție de medicament de testat. Deasupra tifonului se pune hârtie comprimată sau celofan, apoi se lipește o bucată de bandă adezivă de 4x4 cm.Procedați la fel cu solventul de control (soluție salină).

Rezultatele se apreciază după 24-72 ore astfel: hiperemie (+); hiperemie, umflare, formare de papule (++); eritem luminos, umflături, papule, vezicule (+++); formarea de vezicule mari și necroză (++++). Tencuiala adezivă în locurile de contact direct cu pielea, de regulă, provoacă iritarea pielii (reacție imediată - hiperemie, umflare), astfel încât numai zona de piele în contact direct cu tifon umezit cu o soluție de medicament trebuie să fie evaluat.

În cazul unei creșteri accentuate a reacției alergice (mâncărime, senzație de arsură etc.), proba trebuie îndepărtată rapid și pielea spălată, iar acest medicament nu trebuie prescris.

Test cutanat de scarificare.

Înainte de a efectua acest test, pielea (spatele, abdomenul sau suprafața interioară a antebrațului) trebuie tratată cu alcool. Apoi, la o distanță de 5 cm unul de celălalt, se aplică o picătură de soluție de histamină 0,01% (control pozitiv), o picătură de alergen al medicamentului de testat și o picătură de lichid de diluare - ser fiziologic (control negativ). Folosind ace sterile sau scarificatoare se aplica doua scarificatii superficiale (nu sangereaza) de pana la 5-10 mm lungime, la o distanta de 3 mm una de alta. Reacția este evaluată după 20 de minute prin ștergerea picăturilor de alergen cu tampoane separate de bumbac. Este necesar să urmăriți după 24 de ore (pot fi reacții întârziate).

Dacă hiperemia se dezvoltă la locul scarificării și atunci când pielea este trasă, apare umflarea (albirea) la locul zgârieturilor, reacția este slab pozitivă (+).

Dacă o veziculă cu hiperemie la locul zgârieturilor este vizibilă pentru ochi și, atunci când este trasă, umflarea crește, atunci reacția este pozitivă (++).

Un blister cu un diametru de 10 mm cu hiperemie și pseudopode indică o reacție puternic pozitivă (+++).

Un blister care măsoară mai mult de 10 mm în diametru cu pseudopodie și hiperemie indică o reacție pozitivă într-un grad foarte ascuțit (++++).

Test sublingual provocator.

Înainte de a efectua testul, inspectați zona sublinguală. Pacientului i se administrează 1/4 dintr-o singură doză terapeutică de medicament de testat sub limbă. Dacă testul este pozitiv, după 10-20 de minute pacientul dezvoltă umflarea frenului limbii, umflarea buzelor și mâncărimi ale pielii; erupții cutanate urticariene unice sau răspândite. În acest caz, pacientul trebuie să îndepărteze imediat partea rămasă a medicamentului, să-și clătească gura fără a înghiți lichid și să ia antihistaminice.

Test provocator.

Oral:

Pacientului i se administrează 1/4 dintr-o singură doză terapeutică din medicamentul de testat. Dacă testul este pozitiv, în următoarele 2 ore pot apărea sufocare, elemente de vezicule izolate și febră. În acest caz, pacientului i se administrează un laxativ salin și i se prescriu antihistaminice.

Parenteral:

Un sfert dintr-o singură doză este injectat intramuscular în zona coapsei dacă medicamentul este administrat intramuscular; s/c - în zona antebrațului, dacă medicamentul este administrat subcutanat și evaluat după 20 de minute. Dacă rezultatul este negativ, se administrează o singură doză după două ore. Când se efectuează un test cu un medicament pentru administrare intravenoasă, se prepară o soluție pentru administrarea intravenoasă prin picurare și se administrează lent la 10-20 picături pe minut timp de 2-5 minute. În absența simptomelor clinice generale și a modificărilor hemodinamice, administrarea medicamentului continuă.

Testele provocatoare sunt efectuate de un medic sub control hemodinamic.

Test de inhibare a emigrării naturale a leucocitelor in vivo pentru diagnosticul specific al alergiei la medicamente (TTEL)

Pentru TTEL aveți nevoie de:
Echipament: (pentru un studiu)

1. 4 pahare chimice cu o capacitate de 50 ml.

2. 5 eprubete cu o capacitate de 20 ml.

3. Raft pentru eprubete (1).

4. 2 pipete (1,0 și 10,0 ml.).

5. Micropipete (2).

6. Camera de numărare a lui Goryaev (1).

7. Geam de ceas (1).

8. Microscop binocular (scop 20, aprox. 7)

Reactivi:

1. Soluție fiziologică pH 7,3-7,4 (pH-ul soluției se stabilește prin adăugarea de NaOH 0,1 M folosind un potențiometru PP-0,1).

2. Soluție 0,01% de colorant violet de gențiană în acid acetic 3%.

Medicamente:

Pentru studiu, formele solubile în apă de medicamente sunt utilizate în următoarele concentrații:

1. Penicilină - 1 µ/ml.

2. Cefalosporine (cefazolin, kofzol, cefamizin) - 1 mcg/ml.

3. Aminoglicozide (streptomicina, kanamicina, gentamicina) - 10 mcg/ml.

4. Macrolide (eritromicină) - 10 mcg/ml.

5. Cloramfenicol (cloramfenicol) -10 mcg/ml.

6. Tetracicline -10 pg/ml.

7. Medicamente sulfonamide - 100 mcg/ml.

8. Derivați de pirazolonă și acid acetilsalicilic - 100 μg/ml.

9. Anestezice locale (novocaina, lidocaina, trimecaina) - 100 mcg/ml.

10. Antibioticele altor grupe chimice - 10 mcg/ml.

Dacă pacientul are antecedente de reacții anafilactice la administrarea medicamentelor, atunci, indiferent de numele medicamentului, studiile încep cu o concentrație de medicament de 1 mcg/ml. În cazul unui rezultat negativ, testul se repetă cu același medicament în doză de 10 mcg/ml, iar dacă este necesar, apoi cu o doză de 100 mcg/ml.

Un singur studiu cu un medicament și o concentrație poate fi efectuat într-o zi. În timpul testului, este interzis să mâncați, să beți, să fumați sau să luați medicamente. Testul se efectuează într-o cameră de tratament.

Înainte și după plasarea TTEL in vivo, medicul examinează cu atenție pacientul, măsoară tensiunea arterială, ritmul cardiac și ritmul respirator.

Examenul durează 1,5 ore și constă în două etape.

Etapa I:

Pregătirea materialului pentru cercetare:

1. La o oră după masă, pacientul clătește bine gura cu apă fiartă pentru a o curăța mecanic timp de 2 minute.

2. La 30 de minute după prima clătire, clătiți segmentul anterior al gurii cu 10 ml de soluție salină (pH 7,3-7,4) timp de 2 minute.

3. Lichidul din cavitatea bucală (apa de clătire) este colectat în paharul nr. 1, ca porție inițială (martor).

4. După 15 minute, clătiți gura timp de 2 minute cu o soluție fiziologică cu concentrația inițială a medicamentului de testat diluată în ea. Această porțiune de lichid de spălare este colectată în cana nr. 2 și nu este utilizată în lucrările ulterioare.

5. După încă 15 minute, clătiți din nou segmentul anterior al cavității bucale timp de 2 minute cu 10 ml soluție fiziologică (pH 7,3-7,4) și colectați lichidul de spălare în cana nr. 3.

6. După aceasta, după 15 minute, segmentul anterior al cavității bucale se clătește timp de 2 minute cu 10 ml soluție fiziologică (pH 7,3-7,4) și se colectează lichidul de spălare în cana nr.4.

Etapa II:

Colorarea și numărarea leucocitelor din materialul colectat. Pregătirea și vizualizarea frotiurilor colorate.

1. După primire, lichidul de spălare din cavitatea bucală în paharul nr. 1 (porțiunea de control) este imediat amestecat bine cu o micropipetă și plasat într-o cantitate de 0,2 ml pe un pahar de ceas.

2. Adăugați acolo 0,04 ml de soluție de colorant violet de gențiană.

3. După 5 minute, amestecul studiat este plasat sub paharul măcinat al camerei lui Goryaev.

4. Numărarea leucocitelor se efectuează în 100 de pătrate mari ale camerei Goryaev și calculează numărul de leucocite în 1 mm cub.

În același mod, numărați numărul de leucocite din cupele nr. 3 și 4 (porțiuni de testare)

Indicele de emigrare a leucocitelor în cavitatea bucală se calculează folosind formula:

unde Nk este numărul de leucocite (neutrofile) din prima porțiune inițială, No este numărul de leucocite (neutrofile) din cupele experimentale nr. 3 și 4.

Testul este evaluat pozitiv atunci când numărul de celule conform indicelui de emigrare scade cu mai mult de 30%.

Anexa nr. 5.

Alergiile sunt o afecțiune destul de comună. După ce au mâncat o portocală, au mângâiat o pisică, au intrat într-o cameră cu praf sau au fost înțepați de o albină, oamenii încep să strănute și să simtă mâncărimi la ochi, iritații ale pielii și indigestie. Dar puțini oameni știu că alergiile sunt o afecțiune critică și uneori pot duce la umflarea tractului respirator superior, ducând la moarte. În multe cazuri, acest lucru poate fi evitat dacă boala este diagnosticată devreme.

Ce este o alergie?

Alergia este sensibilitatea crescută a organismului la anumite substanțe, exprimată printr-o reacție patologică. Sensul statului este următorul. Unele substanțe sunt alergene la sistemul imunitar uman. La prima întâlnire, sistemul de protecție pare să-și „amintească” de ele, iar atunci când se întâlnesc din nou, eliberează o cantitate mare de substanțe biologic active (histamină, leucotriene, prostaglandine), provocând leziuni ale țesuturilor corpului și întreruperea funcționării acestora. Acesta este așa-numitul stadiu fiziopatologic al alergiei. Poate duce la edem Quincke și moartea unei persoane prin sufocare, toate acestea putându-se dezvolta în doar câteva minute.

De o importanță deosebită în dezvoltarea unei reacții alergice sunt imunoglobuline clasa E. Aceștia sunt cei care reacționează atunci când întâlnesc din nou alergeni și sunt fixați împreună cu aceștia pe suprafața membranelor bazofilelor și mastocitelor, provocând eliberarea de substanțe biologic active.

Există diferite grupuri de alergeni:

• Produse alimentare.
• Deșeuri de animale și plante.
• Medicamente.
• Gospodărie (cel mai frecvent este praful).
• Substanțe care pătrund în organism prin contact direct cu insectele.
• Compuși chimici industriali.

Diagnosticul alergiilor este important, deoarece vă permite să identificați hipersensibilitatea organismului la un anumit produs sau animal sau plantă înainte de manifestarea patologiei și să evitați o întâlnire repetată.

Metode de diagnosticare a alergiilor

Principalele măsuri pentru a determina creșterea reactivității umane includ:

1. Teste cutanate.
2. Analiza conținutului de imunoglobuline E din sânge.
3. Teste provocatoare.
4. Teste de eliminare.

În plus, ar trebui să vă amintiți despre contraindicațiile pentru testare. Acest:

• Copii sub cinci ani.
• Vârsta după 60 de ani.
• Contraindicat femeilor însărcinate sau care alăptează.
• În caz de exacerbare a patologiilor altor sisteme de organe.
• Nu trebuie utilizat la pacienții care iau hormoni ca terapie.
• Este imposibil dacă istoricul medical indică cel puțin un caz de șoc anafilactic.

Să ne uităm la fiecare dintre diagnostice mai detaliat.

Teste cutanate

Acestea sunt efectuate pentru a determina dacă o persoană este sensibilă la o anumită substanță. Probele pot fi plasate în mai multe moduri:

• Metoda de scarificare. Antebrațul curățat și pregătit al pacientului este marcat în „celule” sau pătrate. Pe fiecare zonă se aplică o picătură de alergen, după care se face o zgârietură prin ea. Metoda, ca și cele ulterioare, este fără sânge și absolut nedureroasă.
• Teste de aplicare. În acest caz, pielea nu este zgâriată, ci pur și simplu se aplică tampoane de bumbac înmuiate în soluție.
• prick test. Sensul general este același ca și în scarificare, doar că nu fac zgârieturi, ci injecții folosind un ac special.
• Injectarea de soluții de alergeni sub piele.

Nu pot fi determinate mai mult de 15 componente într-o singură abordare. Există un număr mare de preparate făcute din păr de animale de companie, pene de păsări, polen, praf, ciuperci microscopice, alimente și compuși chimici.

O reacție pozitivă este considerată dacă există roșeață, mâncărime sau ușoară umflare a pielii la locul de aplicare.

Pacientul este de obicei controlat după 24-48 de ore, dar uneori poate apărea sensibilitatea după 15-30 de minute.

Rezultatul analizei este dat sub forma unei liste, care indică la ce alergeni există o reacție pozitivă și există diferite grade de severitate: puternic, slab, îndoielnic, negativ.

Test pentru Ig E în sânge

In mod normal, imunoglobulinele de clasa E se gasesc in sange in cantitati mici. Cu toate acestea, o creștere a nivelului acestor corpuri poate indica prezența unor boli precum rinita alergică, urticaria, anafilaxia sistemică. Metoda este foarte informativă, dar funcționează doar în cazul alergiilor dependente de IgE, din fericire acesta este cel mai frecvent tip de alergii. În plus, o creștere a acestei clase de imunoglobuline indică nu numai sensibilitate, ci și helmintiaza și astmul bronșic.

Testul Ig E este mai eficient la copii. Doar creșterea acestor compuși nu garantează 100% prezența unei alergii; trebuie identificat antigenul specific alergenului care poate fi responsabil pentru reacția de sensibilitate.

Metoda are, de asemenea, avantaje incontestabile: poate fi folosită și în cazul exacerbarii bolilor altor organe; nu este contraindicată copiilor mici, persoanelor în vârstă, gravidelor și mamelor care alăptează.

În timpul testului, se prelevează sânge dintr-o venă la 3 ore după ultima masă.

Teste provocatoare

Uneori, când rezultatele testelor cutanate nu coincid cu simptomele sau imaginea este prea neclară, se prescriu teste provocatoare. Cu această metodă, o cantitate mică de alergen este injectată direct în plămânii persoanei prin inhalare sau pe membrana mucoasă a cavității nazale sau sub limbă, pe conjunctivă. Reacția este considerată pozitivă dacă se observă roșeață și mâncărime (în cazul ochilor), strănut și rinită (în cazul cavității nazale).

Teste de eliminare

Cel mai adesea folosit în diagnosticarea alergiilor alimentare. Dacă se presupune că un produs provoacă o alergie, atunci acesta este eliminat, adică eliminarea din dietă. Dacă simptomele alergiei au dispărut, atunci putem spune cu încredere că alergenul a fost identificat.

Când efectuați orice tip de diagnostic de alergie, este important să opriți în prealabil orice medicamente antialergice și antihistaminice. În plus, ar trebui să vă amintiți despre contraindicațiile pentru testare. Acest:

Cel mai adesea, se folosesc toate metodele, adică se folosesc diagnostice complexe. Unul dintre punctele sale importante este ținerea unui jurnal de către un alergolog, care notează momentul declanșării reacției alergice, durata acesteia și manifestările caracteristice. Folosind un jurnal, puteți stabili natura sezonieră a sensibilității, de exemplu, din cauza polenului unei anumite plante și, de asemenea, puteți dezvolta măsuri preventive, de exemplu, evitarea situației în apropierea unui obiect alergenic.

Astfel, diagnosticul alergiei este o procedură comună, nedureroasă și, în majoritatea cazurilor, sigură, care vă permite să identificați alergenul și să confirmați prezența sensibilității. Cu ajutorul unor teste complexe, puteți alege o strategie de tratament și prevenire care vă permite să evitați patologiile periculoase în viitor.

Metode specifice și nespecifice de examinare a pacienților cu alergii

Articolul enumeră metodele folosite de medicina modernă pentru diagnosticarea alergiilor.

Examinare fizică

Include examinarea pacientului, palparea, auscultarea (ascultarea sunetelor care însoțesc activitatea organelor) și percuție (ascultarea sunetelor atunci când anumite zone ale corpului pacientului sunt lovite).

Diagnosticul de laborator al alergiilor

Metoda de laborator pentru diagnosticarea alergiilor determină starea organismului pe baza testelor luate de la pacient. Majoritatea metodelor se bazează pe ELISA (testul imunosorbent legat de enzime) - o reacție specifică antigen-anticorp. Metoda chemiluminiscenței multiple și metoda imunofluorescenței folosind aparatul ImmunoCAP se bazează pe ELISA.

Chimia sângelui

Studiază starea organelor și sistemelor interne, prezența proceselor inflamatorii, determinând compoziția chimică a sângelui.

Examinare de screening pentru alergii

Obiectul de studiu este serul sanguin. Testele ELISA sunt efectuate pentru principalele grupe de alergeni. Metoda vă permite să restrângeți căutarea alergenului vinovat.

Determinarea IgG specifice

Obiect - ser de sânge. Testul ELISA IgG este efectuat cu antigene individuale pentru a identifica cu exactitate alergenul vinovat.

Indicatii: diagnosticarea alergiilor si intolerantelor alimentare.

• 50 U/ml - rezultatul este negativ;

• 50 - 100 U/ml - încălcare ușoară a toleranței;
• 100 - 200 U/ml - încălcarea moderată a toleranței;
• mai mult de 200 U/ml - o încălcare pronunțată a toleranței.

Studiul anticorpilor IgE specifici

Anticorpii IgE sunt responsabili pentru reacțiile de tip imediat. Determinat în serul sanguin prin ELISA. Este identificat agentul care provoacă alergii.

Indicații: incapacitatea de a identifica alergenul prin anamneză, refuzul testelor cutanate, antecedente de reacții sistemice, dermatită, hipo- și hiperreactivitate a pielii, evaluare cantitativă a anticorpilor, alergie alimentară dependentă de IgE.

Sângele este extras din vena ulnară. Cu câteva zile înainte de a dona sânge, excludeți alimentele alergene din dietă și contactul cu animalele și încetați să luați antihistaminice. Analiza se efectuează în perioada de remisie, sângele este luat pe stomacul gol.

Valoarea normală (de referință) a IgE din sânge este mai mică de 0,35 UI/ml

Dacă este detectată o alergie dependentă de IgE, este indicată imunoterapia specifică alergenului

Studiu de gaze din sânge

Se determină pH-ul, presiunea parțială a O2 și CO2 și cantitatea de bicarbonat din sângele pacientului.

Studiul profilului hormonal

Nivelul hormonilor suprarenalii este măsurat în sânge.

Analiza clinică a urinei

Se evaluează caracteristicile fizico-chimice ale urinei: culoare, transparență, densitate, aciditate, compoziție chimică. Prezența epiteliului, eritrocitelor, leucocitelor și bacteriilor este determinată în sediment.

Coprogram

Folosit în diagnosticarea alergiilor alimentare.

Analiza generală a sputei

Folosit în diagnosticarea alergiilor respiratorii. Se examinează cantitatea, consistența, culoarea, mirosul, caracterul (mucus, puroi, sânge, lichid seros), flora și elementele formate.

Teste reumatologice

Obiectul este sânge. Se analizează nivelul factorului reumatologic, fibrinogen, proteină C reactivă și antistreptolizină. Metoda vă permite să determinați prezența, localizarea și sursa inflamației țesutului conjunctiv.

Studii virologice

Obiecte: sânge, fecale, spută, lichid cefalorahidian. Se determină prezența virusurilor în organism.

Analiza bacteriologică a sputei și a altor secreții din mucoase și piele

Proba este inoculată într-un mediu nutritiv și coloniile crescute sunt ulterior analizate. Vă permite să identificați și să cuantificați prezența agenților patogeni ai bolilor infecțioase.

Examen citologic al secrețiilor, frotiurilor sau spălărilor din cavitatea nazală, mucoasa conjunctivală etc.

Metoda constă în examinarea celulelor dintr-o probă la microscop pentru a identifica patologiile și leziunile lor morfologice și cauzele acestora.

Metode specifice de examinare alergologică

Acest grup de metode de diagnosticare a alergiilor este efectuat pe pacient și are ca scop identificarea agentului care provoacă alergia.

Teste cutanate (scarificare)

Se evaluează reacția locală la contactul alergenului cu pielea.

Există următoarele tipuri de teste cutanate:

picatură: preparatul alergen se aplica sub forma unei picaturi pe pielea intacta;

Exemplu de diagnosticare a căderii (poate fi mărit)

Indicații: antecedente medicale care indică natura alergică a bolii.

Contraindicatii:

Motive pentru rezultate false:

• Încălcarea tehnologiei probei;
• Depozitarea necorespunzătoare a preparatelor alergene;
• Reactivitate redusă a pielii;
• Luând antihistaminice.

Un rezultat pozitiv indică sensibilizarea organismului; dacă se potrivește cu rezultatele anamnezei, se trage o concluzie despre natura alergică a bolii; dacă există o discrepanță, se efectuează teste suplimentare.

Dacă reacția la testul Mantoux este pozitivă, se efectuează un diagnostic diferențial al alergiilor post-vaccinare și infecțioase, adică se determină ce a provocat reacția locală - bacilul Koch sau anticorpi fără infecție.

Testul este efectuat de un alergolog folosind soluții de alergeni plasate pe pielea antebrațului. Se aplică până la 15 probe în același timp.

Fragment dintr-o poveste de pe canalul TV MIR - efectuarea testelor cutanate pentru copii

Teste de eliminare

Timp de câteva săptămâni, contactul pacientului cu posibili alergeni este eliminat, ceea ce duce la o îmbunătățire a stării generale. Când expunerea la alergenul dorit este reluată, pacientul prezintă din nou simptome de alergie.

În acest fel, substanța care provoacă reacția alergică poate fi determinată cu exactitate. Metoda este cea mai eficientă pentru alergiile alimentare și la medicamente și dermatita de contact.

Teste provocatoare

Alergenul este aplicat pe membrana mucoasă a organului țintă, provocând o reacție alergică locală.

La diagnosticarea alergiilor, se folosesc următoarele tipuri de teste provocatoare:

• Nazal(indicatii: polinoza, rinita): alergenul este plasat in nara;
• Conjunctivala: alergenul este instilat sub pleoapa inferioară;
• Sublingual(alergie alimentară): alergenul este instilat sub limbă;
• Inhalare(indicații: astm bronșic): se inhalează un aerosol dintr-un preparat alergen;
  • Test de inhalare cu carbacol: confirmarea diagnosticului de astm bronșic;
  • Test de inhalare cu aer rece: studiul hiperreactivității bronșice nespecifice;
• Metode suplimentare examen de alergie:
  • Testul Duncan(pentru alergii la frig): puneti o bucata de gheata pe piele timp de 20 de minute;
  • Test termic(pentru alergii la căldură): puneți o sticlă cu apă fierbinte (40 o C) pe pielea antebrațului timp de 10 minute.

Metode funcționale de diagnosticare a alergiilor

Ele permit evaluarea funcționării sistemelor fiziologice ale corpului prin măsurarea instrumentală a manifestărilor externe ale muncii lor.

La diagnosticarea alergiilor, se evaluează funcționarea plămânilor și a tractului respirator:

Efectuarea fluxmetriei de vârf pentru astm (poate fi crescută)

• Fluxmetrie de vârf- măsurarea debitului expirator de vârf;
• Spirometrie și spirografie- se măsoară caracteristicile de viteză și volum ale respirației;
• Pneumotahometrie- măsurarea vitezei aerului în timpul inhalării și expirației forțate.

Metode de examinare instrumentală

Arsenalul de metode instrumentale pentru diagnosticarea alergiilor include:

• Rinoscopia anterioară: diagnosticul leziunilor mucoasei nazale.
• Rinomanometrie anterioară: măsoară îngustarea căilor nazale datorită testării alergiei nazale.
• Examene endoscopice: examinarea organelor interne printr-un endoscop.

Pe lângă cele tradiționale enumerate mai sus, există metode alternative de diagnosticare a alergiilor.

Metode alternative de diagnosticare a bolilor alergice

Dacă o boală alergică se manifestă cu simptome necaracteristice, sau diagnosticul este dificil prin metode tradiționale, se recurge la metode alternative de diagnosticare a alergiilor.

Testul leucocitotoxic

Se determină numărul de leucocite care poartă un antigen specific. Prezența unui antigen este determinată de modificarea aspectului leucocitei atunci când acesta reacţionează cu un alergen suspectat.

Test de alergie pentru detectarea IgG în ELISA

Folosit pentru a identifica agentul care cauzează alergii și pentru a diagnostica intoleranța alimentară.

Iată cum arată testarea rezonanței vegetative (poate fi mărită)

Testare VEGA (testare electrodermică) Metoda Voll

Studiul conductivității electromagnetice în organism. Conductivitate redusă indică un proces alergic.

Analiza părului și testarea alergiilor

Reflexul auriculocardic

Sunt evaluate modificările pulsului și ale fluxului sanguin la contactul cu un alergen.

Pentru a face un diagnostic precis, alergologul în timpul examinării folosește pe rând câteva dintre metodele enumerate pentru diagnosticarea alergiilor.

Programul „Bună ziua, doctore!” Metode moderne de diagnostic molecular al alergiilor

Diagnosticul alergiilor cu ajutorul testelor cutanate

Înainte de a începe tratamentul pentru o boală alergică, se efectuează un diagnostic de alergie, care vizează identificarea cu exactitate a alergenului care provoacă reacția negativă. De regulă, o analiză pentru identificarea unui alergen este efectuată prin teste cutanate, teste speciale (provocatoare), precum și prin teste de laborator imunologice. Aici puteți găsi o prezentare detaliată a tuturor metodelor de mai sus pentru diagnosticarea bolilor alergice și a caracteristicilor implementării acestora.

Diagnosticul bolilor alergice: semne directe și indirecte

Prima și extrem de importantă etapă în diagnosticarea bolilor alergice este un istoric medical colectat corect. Datele pe care pacientul le raportează medicului în timpul primei întâlniri permit ca examinarea alergologică ulterioară să fie îndreptată în direcția corectă.

Există semne directe și indirecte care indică sensibilitate la alergeni. De exemplu, un semn direct al unei alergii în gospodărie este apariția semnelor clinice ale bolii în timp ce curățați o cameră, în timp ce vă jucați cu jucării moi, când vizitați un circ sau o grădină zoologică și așa mai departe. Semnele indirecte ale alergiilor casnice sunt exacerbări frecvente ale bolii la domiciliu, manifestarea simptomelor mai des noaptea în pat și nu pe stradă în timpul mersului.

Semnele directe ale alergiei la polen includ apariția bolii (sau semnele crescute ale bolii) la contactul cu plantele cu flori, utilizarea parfumurilor cu polen și utilizarea medicamentelor pe bază de plante. Indirect, alergiile la polen pot fi indicate prin exacerbări în perioada primăvară-vară-toamnă, apariția unei reacții la consumul de miere, nuci, mere, pere, prune.

Structura alergenilor (în reacțiile alergice dependente de IGE) este următoarea.

Producția de IgE poate fi cauzată de alergeni de natură proteică sau de un complex proteină-carbohidrați. Polizaharidele în sine nu sunt capabile să stimuleze formarea IgE.

Pe baza greutății moleculare și imunogenității, antigenele sunt împărțite în două grupe: antigene complete și haptene.

Antigenii completi includ antigeni de polen, epidermă, ser animal și altele. Ele sunt capabile să inducă în mod independent sinteza anticorpilor IgE. Baza unui antigen complet este un lanț polipeptidic.

Antigenele incomplete, sau haptenele, sunt substanțe cu un nivel molecular scăzut care nu sunt alergeni în sine. Odată ajunse în organism, haptenele formează un complex cu proteinele tisulare sau serice, iar acest complex acționează deja ca un alergen.

Diferențele dintre antigenele complete și haptene sunt de o importanță fundamentală în diagnosticul bolilor alergice. Antigenii completi pot fi identificați utilizând diagnosticul de testare cutanată. Cu toate acestea, este aproape imposibil să se determine o haptenă și să se producă un medicament de diagnostic pe baza acesteia (singura excepție este penicilinele).

Testele cutanate, testele provocatoare și testele de laborator ajută la identificarea alergenilor.

Cum se identifică un alergen: test de laborator pentru o reacție alergică

Teste imunologice de laborator. Cel mai bine stabilit test de alergie efectuat în laborator este determinarea anticorpilor IgE specifici alergenilor în serul sanguin. Metodele de laborator pot stabili doar prezența oricărei legături în procesul alergic, dar nu reflectă imaginea în ansamblu. Un test de reacție alergică este rezultatul participării simultane a tuturor componentelor mecanismului complex al procesului imunologic. În principiu, nu poate fi obținut în condiții de laborator, prin urmare testele sunt utilizate ca instrument de diagnostic auxiliar, deși important, și nu pot înlocui testarea pacientului însuși.

Cum se testează pentru alergii: teste cutanate

Teste cutanate. Testele cutanate de diagnosticare sunt folosite pentru a diagnostica majoritatea bolilor alergice.

Testele cutanate pentru alergeni nu sunt foarte informative în cazurile de afectare extinsă a pielii. Pentru a diagnostica alergiile la medicamente, testarea cutanată este utilizată extrem de rar, deoarece, de obicei, alergia este cauzată nu de medicament în sine, ci de metaboliții săi, care nu pot fi determinați. În ceea ce privește medicamentele, testele cutanate sunt efectuate numai cu alergeni proteici - de exemplu, cu insulină, seruri și peniciline.

Pe lângă reacțiile locale, pot apărea și reacții generale în timpul testării cutanate, de obicei la 10-180 de minute după testare. Prezența reacțiilor generale servește ca dovadă de încredere a sensibilității organismului la alergen.

Înainte de a identifica un alergen, medicii trebuie să țină cont de specificul efectuării testelor cutanate:

• Testarea pielii se efectuează numai în timpul remisiunii bolii.
• Se recomandă efectuarea testelor cutanate nu mai devreme de 3-4 săptămâni după o reacție alergică sistemică.
• Toate tipurile de teste cutanate pot da o reacție sistemică sub formă de șoc anafilactic sau exacerbare de la organul de șoc.
• Înainte de testarea pielii pentru alergii, ar trebui să încetați să luați antihistaminice în avans, iar perioada de întrerupere depinde în mare măsură de tipul de medicament.

Testele cutanate includ teste de plasture, teste de prick, teste de prick și teste intradermice.

Efectuarea de teste cutanate prick

Testele cutanate se folosesc atunci când se suspectează sensibilizarea la praf (acarieni de casă), polen, alergeni epidermici și alimente. Dintre toate tipurile de teste cutanate, acest tip de diagnostic de alergie este cel mai frecvent în Rusia.

Cum se efectuează aceste teste alergice în ambulatoriu? La efectuarea testelor de scarificare, soluțiile apoase de diferiți alergeni (praf, polen, alimente) sunt picurate pe pielea antebrațului la o oarecare distanță unul de celălalt. În locurile în care se aplică picăturile, acestea lezează ușor pielea fără a afecta vasele de sânge. După 10 minute, picăturile sunt îndepărtate, iar după alte 10 minute, se verifică dacă există eritem (roșeață severă) și vezicule.

Astfel de teste sunt destul de sensibile, iar tehnica lor este mai puțin standardizată decât testul prick. Prin urmare, este de preferat un test de înțepătură cutanată.

Prick test, teste conjunctivale și nazale pentru diagnosticul alergiei

prick test este o metodă de diagnosticare a alergiilor prin perforarea pielii printr-o picătură de soluție de alergen. Puncția ar trebui să fie suficient de adâncă, dar nu până la sângerare. Reacția este evaluată după 20 de minute. Testarea prin prick da rareori reacții fals pozitive.

Testul conjunctival- Acesta este un test de alergie prin instilarea unui alergen diluat în fisura palpebrală. Se efectuează dacă se suspectează conjunctivită alergică. Se efectuează extrem de rar din cauza posibilei reacții severe imprevizibile a ochilor.

Test de provocare nazală este un test de alergie care se efectueaza atunci cand se suspecteaza rinita alergica. Câteva picături de alergen în concentrații crescătoare (de la 1/100.000 la 1/10) sunt instilate în pasajul nazal secvenţial, la fiecare 15-20 de minute.

Testarea alergiei cu plasture

Teste ale pielii cu plasture (teste de plasture) este un test de diagnostic al alergiei care se foloseste atunci cand se suspecteaza dermatita alergica de contact si reactii fotoalergice. În ultimii ani s-a discutat posibilitatea utilizării lor la pacienții cu dermatită atopică. Testele sunt efectuate pe zonele neafectate ale pielii. Alergenii de testare includ cel mai adesea diverse substanțe chimice, inclusiv medicamente. Se folosesc sub formă pură sau în soluții în concentrații care nu provoacă iritații ale pielii la persoanele sănătoase.

Pentru stabilirea și evaluarea testelor cutanate sunt necesare 3-4 vizite ale pacientului la medic. Prima dată când alergenul este aplicat pe piele. De obicei, o bucată de tifon este umezită cu o soluție de alergen și se fixează pe pielea antebrațului, a abdomenului sau a spatelui. Rezultatele se evaluează după 20 de minute, 5-6 ore și 1-2 zile. Dacă la locul aplicării alergenului apare arsuri severe și mâncărimi, pacientul trebuie să consulte un medic. În acest caz, clapeta este îndepărtată mai devreme. Reacția este evaluată folosind o scală specială.

Analiză pentru depistarea unui alergen prin efectuarea de teste intradermice și provocatoare

Teste intradermice (injecții subcutanate cu alergeni) aproape niciodată folosit în diagnosticare. Testarea intradermică este efectuată foarte rar din cauza riscului ridicat de reacție sistemică.

Teste provocatoare- aceasta este testarea alergiilor prin identificarea sensibilizării (sensibilității), bazată pe introducerea directă a unui alergen în organul țintă. Cu toate acestea, cea mai fiabilă metodă de diagnostic alergologic este și cea mai periculoasă. Este imposibil de prezis reacția pacientului la provocare, prin urmare sunt necesare indicații stricte pentru implementarea acesteia. La fel ca testele cutanate cu alergeni, testele provocatoare pot fi efectuate numai în timpul unei perioade de remisie completă a bolii. Pe baza metodei de administrare a alergenilor se disting testele provocatoare nazale, conjunctivale și inhalatorii. La pacientii cu alergii alimentare, produsul alimentar suspectat este administrat pacientului pe cale orala.

Principalul avantaj al testelor provocatoare față de testele cutanate este fiabilitatea mai mare a rezultatelor. Dezavantajele sunt un risc crescut de reacții alergice severe și dificultăți în cuantificarea rezultatelor. În plus, într-o zi puteți efectua un test cu un singur alergen.

Ce metode sunt cele mai eficiente în diagnosticarea cauzelor alergiilor?

Când descoperiți probleme de sănătate la dumneavoastră sau la cei dragi care pot fi simptome de alergie, trebuie să consultați un terapeut sau dermatolog (în cazul în care simptomele sunt reacții ale pielii).

Tratamentul cu un alergolog specialist necesită o trimitere, care poate fi eliberată de un medic de familie sau de un dermatolog.

Simptome diagnostice ale alergiilor

În primul rând, cel mai important lucru este interviul - acesta include determinarea predispoziției familiei la educație boli alergiceși antecedente de reacții alergice.

Medicul întreabă despre simptomele bolilor: rinită sezonieră sau pe tot parcursul anului a sinusurilor, conjunctivită, urticarie, dificultăți de respirație, diaree, constipație.

Test de alergie folosind metoda Prick test

Institutul Național de Alergie și Boli Infecțioase, domeniul public

Studiu de caz al pacientului care indică apariția alergiilor, este o indicație pentru efectuarea examinărilor diagnostice și identificarea alergenului.

Diagnosticul alergiilor vă permite să începeți un tratament eficient și reduce severitatea simptomelor alergice, așa că nu trebuie să neglijați reacția alergică și să vă așteptați ca boala să dispară de la sine.

Diagnosticul bolilor alergice

Ce să faci dacă observi manifestări de alergie la copilul tău? Acesta poate fi un nas care curge, strănut, erupții cutanate și mâncărimi ale pielii, umflarea pleoapelor și buzelor ca răspuns la contactul cu polenul plantelor, animale și insecte, alimente sau praf de casă. Copiii predispuși la alergii sunt de obicei sensibilizați la mai mulți alergeni. Aflați exact ce părinți trebuie să contactați pentru a-i îndepărta din mediul copilului dacă este posibil. Oprirea contactului cu alergenul este una dintre principalele etape în tratamentul oricărei boli alergice. Astăzi vom vorbi despre metodele folosite pentru a le diagnostica.
Testarea cu alergeni de diagnosticare este efectuată de un alergolog într-o cameră alergologică. Înainte de aceasta, se poartă o conversație cu părinții și copilul, în timpul căreia se colectează informații detaliate despre evoluția bolii. Fii pregătit să răspunzi la întrebările medicului despre primele simptome, durata, factorii provocatori suspectați, medicamentele utilizate anterior și alte boli ale copilului.

Apoi, se efectuează o examinare și se prescrie o examinare inițială. Trebuie să donezi sânge și urină pentru o analiză generală, să faci fluorografie și un ECG. Fiți pregătiți pentru faptul că va trebui să consultați un dermatolog, otorinolaringolog, neuropatolog. Testele cutanate și testele provocatoare de alergie sunt folosite pentru a diagnostica alergiile la copii. Există contraindicații pentru implementarea lor:

Faza acută a unei boli alergice sau a oricărei alte boli;
infecție acută de orice localizare;
efectuarea terapiei cu glucocorticosteroizi sau antihistaminice;
stare decompensată din cauza bolilor organelor interne.

Când este cel mai bun moment pentru a testa cu alergeni? Sensibilizarea suspectată la polen este diagnosticată iarna cu câteva luni înainte de începerea înfloririi în masă, la alergenii casnici - vara, la alergenii animale - la câteva luni după ce contactul cu aceștia a fost eliminat. Adică, diagnosticele specifice sunt efectuate în timpul celor mai puține manifestări ale alergiilor, sau mai bine zis, în timpul absenței lor complete.  

Teste de scarificare:

Tehnica constă în evaluarea reactivității pielii la contactul cu diverși antigeni. Pentru test, alergenii de diagnosticare sunt utilizați în diluție scăzută (10.000 PNU). Pielea suprafeței volare a antebrațului este tratată cu o soluție antiseptică. Se scot 5 cm din articulația încheieturii mâinii și se face prima crestătură cu un scarificator steril. Se aplică o soluție de histamină 0,01% pentru a evalua răspunsul normal al pielii. După ce s-a retras 5 cm, se face o altă crestătură cu un nou scarificator și se aplică un lichid de control pentru a înregistra o reacție negativă pentru comparație. În continuare, se aplică picături de alergeni la o distanță de 5 cm unul de celălalt. În fiecare picătură, utilizați scarificatorul pentru a face 2 tăieturi paralele de până la 5 mm lungime. Rezultatul este evaluat după 20 de minute.
Reacția pielii la un antigen exogen sub formă de blister peste zona hiperemică este considerată pozitivă și este caracterizată pe o scară de la + la ++++. Prezența unui blister mai mare de 5 mm și a unui pseudopod indică o reacție puternic pozitivă (+++ și ++++).

Prick test (prick test):

O tehnică mai modernă și mai sensibilă. Picături de alergeni, solvent și histamină 0,1% se aplică pe pielea antebrațului din interior la o distanță de 2-4 cm unul de celălalt. Picăturile sunt străpunse cu un ac dintr-un kit standard de unică folosință. Timpul de evaluare a rezultatului este mai scurt: pentru histamină - după 10 minute, pentru alergeni de polen - 15 minute. Scala de evaluare este similară cu cea pentru probele de suprafață.

Test intradermic:

În cazul rezultatelor îndoielnice ale testelor cutanate superficiale la copiii cu suspiciune de sensibilizare la anumite antigene, acestea se administrează intradermic folosind seringi de insulină.  .
După ce a sterilizat pielea suprafeței volare a antebrațului, se injectează alternativ 0,02 ml de lichid (primul control, apoi se testează alergenii). Alergologul selectează individual diluția medicamentului: începând de la 1 PNU și terminând cu 1000 PNU. Rezultatul testului este înregistrat după 20 de minute folosind o scală plus. Un răspuns puternic pozitiv este indicat de un blister cu pseudopodii care măsoară mai mult de 15 mm pe fundalul înroșirii pielii.

Teste provocatoare:

Sunt copii la care, din cauza unei reacții puternice a capilarelor pielii la deteriorarea mecanică, testul de scarificare dă un rezultat fals pozitiv. În astfel de cazuri, medicul alergolog poate recomanda administrarea prin picurare nazală sau prin inhalare a alergenului. Testarea trebuie efectuată numai într-un spital înalt specializat, unde, dacă apare o reacție anafilactică, copilul va primi ajutor imediat.
Testul de cădere este indicat pentru rinita cauzată de polen sau praf de casă. Mai întâi, 3 picături de lichid de control sunt instilate într-o nară. Dacă după 15 minute nu a apărut nicio reacție, se pică 3 picături de alergen în diluția la care a apărut o reacție de testare intradermică fals pozitivă (blister de până la 4 mm, care se rezolvă mai lent decât la martor). Dacă nu există nicio reacție din partea mucoasei nazale după 15 minute, concentrația este crescută. Un test nazal provocator este pozitiv atunci când strănut, apare o senzație de congestie nazală și secreții mucoase.

Tehnici de laborator:

Permite determinarea Ig E monoclonale în perioada de exacerbare a alergiilor, cu activitate ridicată a răspunsului alergic. Folosit pe scară largă la copii. Cu ajutorul unor diagnostice certificate, în sânge sunt determinate imunoglobuline specifice pentru antigenele suspectate.

PRIST - metoda determină concentrația de Ig E nespecifică în ser folosind o bandă de testare impregnată cu radioimunosorbant.  

RAST este o tehnică bazată pe legarea serului specific Ig E de un alergen înregistrat pe o placă de testare. Ig E totală este spălată. La conținut se adaugă anticorpi marcați cu I125 la Ig E. Compusul radioactiv rezultat este înregistrat de un contor de scintilație.

ELISA - serul de sânge al copilului este aplicat pe o suprafață specială pe care sunt adsorbite antigenele (tablete de polistiren sau discuri de microceluloză). Pentru a determina concentrația de Ig E specifică, li se adaugă anticorpi marcați și reactivi corespunzători, care reproduc reacția în culoare. Intensitatea sa este estimată fotometric.
Reacția de a detecta Ig E specifică este un diagnostic modern de alergie care ar trebui să i se acorde preferință. Cu toate acestea, în unele cazuri clinice, testele pentru diagnosticarea reacțiilor dependente de anticorpi și a reacțiilor de tip întârziat nu și-au pierdut relevanța.