Термины "стволовые клетки", "пуповинная кровь", "криобанк" наши соотечественники впервые услышали сравнительно недавно — пять лет назад. В то время как в США первый криобанк стволовых клеток пуповинной крови "Cryo-Cell" был открыт в 1992 г. Тем не менее первое предположение о существовании стволовых клеток было высказано именно русским ученым. В 1909 г. профессор Военной медико-хирургической академии Санкт-Петербурга А. А. Максимов сделал сенсационное заявление о том, что в организме человека есть так называемые "стволовые" клетки, способные при определенных условиях превращаться в зрелые, дифференцированные клетки организма. Несколько позже профессор московского НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н. Ф. Гамалеи А. Я. Фриденштейн подтвердил предположение коллеги и, изучая возможности этих особых клеток, стал разрабатывать сферу их применения.

Сейчас, по словам профессора Б. В. Афанасьева, директора клиники трансплантации костного мозга Санкт-Петербургского Государственного медицинского университета им. И. П. Павлова, в России вопросами стволовых клеток занимаются ученые и практикующие врачи Москвы, Санкт-Петербурга и Новосибирска.

Зачем нужны стволовые клетки?

Единого термина для названия этих универсальных клеток пока не придумано. Их именуют и "стволовыми", и " клетками-предшественницами", и "запасными". В организме взрослого человека, особенно в костном мозге, существуют клетки, обладающие способностью превращаться практически во все виды клеток взрослых тканей, например в клетки мышц, печени и другие. В отличие от дифференцированных, стволовые клетки обладают свойством неограниченного воспроизводства, в то время как дифференцированные клетки выполняют только лишь определенные функции (мышечные клетки — сокращаются, эритроциты — переносят кислород и т.д.), и не способны делиться неограниченно. Превращение стволовых клеток в дифференцированные происходит под действием клеток и субстратов, окружающих стволовую клетку, попавшую в ту или иную ткань. Мы знаем, что в норме стволовых клеток в организме чрезвычайно мало, но они являются универсальными "запасными" частями, которые используются организмом для восстановления разных тканей. "Починка" организма с помощью стволовых клеток происходит следующим образом: когда в какой-то ткани возникает повреждение, то ее гибнущие клетки посылают в кровь сигнал тревоги, выделяя особые вещества. Этот сигнал поступает в костный мозг, который начинает активно выбрасывать в кровь определенные клетки-предшественники. Те, в свою очередь, с током крови поступают к пострадавшему участку. Здесь сотни пришедших на помощь стволовых клеток делятся на миллионы, копируя погибшие и таким образом, восстанавливая их баланс.

В настоящее время эти возможности стволовых клеток используются в практической медицине при лечении более 60 опасных заболеваний. Среди них основное место занимают заболевания системы крови, различные онкологические заболевания, наследственные и аутоиммунные болезни. С этим связано то, что метод пересадки гемопоэтических стволовых клеток, т. е. клеток-родоначальников системы кроветворения, становится рутинным методом лечения этой тяжелой группы болезней. Как ни печальна статистика, но у 1 ребенка из 600 в возрасте до 14 лет может наблюдаться развитие такого заболевания.

В то же время исследования последних лет показали, что, стволовые клетки могут быть с успехом использованы и при лечении, например, сердечно-сосудистых заболеваний. Так, при инфаркте миокарда (состоянии, при котором нарушается кровоснабжение участка сердечной мышцы) костный мозг больного начинает сразу выбрасывать в кровь стволовые клетки, но для эффективного восстановления ткани сердечной мышцы их количества обычно недостаточно. В настоящее время ведутся исследования по имплантации стволовых клеток в зону сердечной мышцы, поврежденную при инфаркте миокарда. Такие операции проведены, например, в Бельгии, Германии. При этом пациенту в область поврежденной сердечной мышцы успешно имплантировали стволовые клетки, полученные из его же костного мозга. Следует отметить, что в данном случае стволовые клетки стимулируют образование мышечной ткани — непосредственно миокарда, а также сосудов поврежденной области.

Способы получения стволовых клеток

В настоящее время стволовые клетки для трансплантации получают в клинических условиях:

1. Из костного мозга. Это оперативное вмешательство проводится путем множественных пункций костей таза, грудины. При этом заготавливают около 1000мл костного мозга. Этот метод используется более 30 лет. Его недостатками являются необходимость наркоза и возможность развития послеоперационных осложнений, хотя встречаются они достаточно редко.
2. Из периферической крови. Аппараты — фракционаторы клеток крови — подсоединяются к венам больного или донора, и за одну две операции через них пропускают 10-20л крови. Эти процедуры проводятся на фоне введения человеку специальных лекарств (факторов роста), которые увеличивают содержание в крови стволовых клеток. Второй метод лишен недостатков первого, но более дорог, т.к. он требует использования дорогостоящей аппаратуры и факторов роста.
3. Из пуповинной крови. Стволовые клетки заготавливают в момент рождения ребенка, подвергают тщательному обследованию, замораживают и, в случаях их совместимости с каким-либо пациентом по антигенам главного комплекса совместимости — системе HLA, трансплантируют.

Количество стволовых клеток, которые распознаются по выявлению на их поверхности определенных антигенных структур, получаемых при заготовке материала для трансплантации из костного мозга, заготовленного от донора или больного, не превышает обычно 1*10 6 /кг, для концентрата стволовых гемопоэтических клеток из периферической крови — 1-10*10 6 /кг, для образца пуповинной крови — 1-4*10 6 /кг.

О третьем методе стоит рассказать более подробно. В пупочной вене новорожденного концентрация стволовых клеток относительно велика. Это связано с тем, что у новорожденных сохраняются элементы эмбрионального кроветворения, и сама плацента выделяет мощные стимуляторы этого процесса. Клетки крови, ответственные за иммунные реакции, у новорожденных менее зрелы, чем у взрослых, что ведет к снижению риска возникновения болезни "трансплантат против хозяина" и дает возможность успешно осуществлять трансплантации гемопоэтических клеток при наличии определенных различий в системе HLA реципиента и донора. Кроме того, сам процесс сбора такой крови осуществляется быстро и просто; он не требует какого-либо контакта с матерью и ребенком и, соответственно, безболезнен. Исследования последних лет доказали, что кровь, которая остается в пуповине, может быть собрана и заморожена для использования в будущем.

Теория и жизнь

В современной мировой медицине накоплен достаточный опыт реального излечения больных с помощью стволовых клеток. Примером тому может служить история шестилетней Кинси Моррисон, страдающей острой формой лейкемии 1 . Шанс на выздоровление, сама того не ведая, ей подарила новорожденная сестренка. Стволовые клетки малышки, взятые из пуповины после ее рождения, оказались абсолютно иммунологически совместимыми с клетками Кинси, в то время как никто из возможных 9 миллионов потенциальных доноров стволовых клеток в мире, данные о которых собраны в мировом Регистре доноров кроветворных клеток (включая ее мать), не подходил больной девочке.

Первая в Европе операция с использованием донорских стволовых клеток пуповинной крови от совместимого родственного донора была проведена в 1988 г. в Париже ребенку с анемией Фанкони 2 . Сегодня ребенок живет и здравствует. Этот пример стал одним из многих фактов успешного применения стволовых клеток пуповинной крови в лечении заболеваний крови. В целом стволовые клетки пуповинной крови были использованы более чем в 2 тысячах случаев трансплантаций.

В нашей стране заявлено существование регистра неродственных доноров на базе Гематологического центра, существуют также базы данных в Российском институте гематологии и трансфузиологии, Санкт-Петербургском медицинском университете — это банки данных на доноров, типированных по системе HLA и подписавших согласие на сдачу стволовых клеток в случае необходимости (из костного мозга или крови). За рубежом в 30 странах существует более 50 таких регистров, многие из которых имеют и банки образцов заготовленной и замороженной пуповинной крови. Если в национальные базы данных могут обращаться врачи и родственники больных, то в международные обращаются обычно через врачей (для этого существует определенный порядок, не всегда возможный для россиян).

Что такое криобанк?

Криобанки — это специально оборудованные хранилища стволовых клеток. В Европе и Америке криобанки стволовых клеток пуповинной крови начали появляться более 10 лет назад. Сегодня в общей сложности их 45. В этих банках хранятся образцы пуповинной крови, заготовленные от новорожденных-доноров, данные о которых включены в Национальные Регистры доноров гемопоэтических клеток. Заключив договор с таким банком, родители могут также сохранить "впрок" стволовые клетки и для своего ребенка. Клетки подвергаются тщательному обследованию, замораживаются по специальной программе и хранятся в жидком азоте при температуре — 196°С в состоянии полного анабиоза и могут быть использованы для лечения самого ребенка или его ближайших родственников. Иными словами, хранение собственных — аутологичных стволовых клеток — это биологическая страховка для ребенка в будущем, благодаря которой он имеет собственные здоровые "запасные" клетки на случай серьезной болезни. Ведь известно, что сегодня более 30% людей, нуждающихся в пересадке стволовых клеток, так и не находят подходящий трансплантат.

Технология сбора

Манипуляция осуществляется после рождения ребенка и пережатия пуповины: пуповина перерезается и кровь собирается в стерильный контейнер, содержащий антикоагулянт — раствор, предотвращающий свертывание крови. Обычно объем собранной крови колеблется от 60 до 120 мл. Эта процедура не представляет никакого риска ни для матери, ни для ребенка и может быть произведена как при обычном течении родов, так и при родах путем . Собранная пуповинная кровь упаковывается и помещается в специальный контейнер для перевозки, на который заранее нанесена вся необходимая информация.

Хранилище стволовых клеток разработано специально для их долгосрочного хранения. Оно представляет собой резервуар с жидким азотом объемом 500 л, оснащенный внутренней системой для размещения криобоксов с пробирками. Оно оборудовано сигнализацией и компьютерной системой, позволяющей круглосуточно следить за уровнем жидкого азота и за температурой в хранилище. К настоящему времени опыт хранения стволовых клеток насчитывает 15 лет, причем после размораживания клетки сохраняют все свои свойства. Размораживают образцы в водяной бане при температуре 40-41°С в течение 3-5 минут. Размороженные клетки должны быть сразу перелиты реципиенту.

Сроки "жизни" образцов пуповинной крови ограничены не столько длительностью хранения, сколько тем, что количества стволовых клеток, содержащихся в пуповинной крови, обычно бывает достаточно только для трансплантации детям до 10-14 лет. Поэтому сроки хранения пуповинной крови, взятой у конкретного новорожденного для возможной трансплантации ему же, ограничены указанными рамками. (Кстати, пуповинную кровь можно использовать не только для самих детей, но и для их родственников, которые совместимы с ними иммунологически и имеют показания для трансплантации и для которых количества этой крови будет достаточно).

Ученые, занимающиеся исследованием стволовых клеток, уверены, что в ближайшем будущем сфера их возможного использования значительно увеличится, т.к. научные исследования в этой области развиваются чрезвычайно динамично, и работа по созданию специальных банков пуповинной крови в России идет интенсивно. Услуги по хранению стволовых клеток пуповинной крови позволяют в какой-то степени обезопасить жизнь ребенка, и, возможно, других членов семьи. Как быстро они приживутся в нашей стране — покажет время, с единственной оговоркой, что сам шанс сохранения "клеток-лекарей" дается родителям только один раз — в момент рождения ребенка.

1 Лейкемия (лейкоз) — заболевание, известное большинству людей, под названием "рак крови".
2 Анемия Фанкони — наследственное заболевание, при котором поражаются стволовые клетки. Проявляется кровоточивостью, задержкой роста, гормональными нарушениями и склонностью к развитию лейкемии.

Любовь Фрегатова.
Д.м.н, профессор кафедры гематологии, трансфузиологии и трансплантологии Санкт-Петербургского ГМУ им. И.П.Павлова

Статья из октябрьского номера журнала.

Обсуждение

Здравствуйте. Я бы хотела сохранить стволовые клетки. Есть вопросы. Есть ли кто-то, кто сохранил? Поделитесь опытом. Очень нужно. Мне порекомендовали Гемабанк. Сохранял ли кто-то в этом банке? Как все это происходит? Как вы договаривались с врачом?

Поискала по сети криобанки в России. Оказывается возможность поместить на хранение пуповинную кровь в Москве уже есть давно. Вот банки:
Гемабанк www.gemabank.ru и Криомедика www.cryomedica.com и Новый Ковчег www.stvolovyekletki.ru .

09.06.2004 09:33:21, Ирина

Очень интересует возможность получения и сохранности стволовых клеток пуповины, в г.Екатеринбурге, т.к. ожидаемые роды в начале марта 2004 года.У нас это четвертые и последние роды. Заранее спасибо.

30.01.2004 21:13:35, Ольга

Еще хотелось бы узнать на будущее, в России есть ли возможность поместить эту пуповиввную кровь в криобанк. Если да, то где и на каких условиях.

Интересно,при заборе крови малыша ставят ли в известность его мать?Или "молча" собирают и используют в интересах науки или пополняют криобанк?Ведь существуют рекомендации не торопиться с перерезанием пуповины,чтобы маленький дополучил,как я понимаю,именно эти 60-120мл. крови.В общем хотелось бы узнать об этической стороне этого дела,т.К.пока ещё ни одна из знакомых родивших ни о чём подобном не упоминала,а речь ведь идёт о возможном спасении чьей-то жизни.С уважением-Мишель.

Комментировать статью "Лекарство из пуповины - перспектива использования стволовых клеток"

Пуповинный забор крови! Дорогие мамы! Кто-то воспользовался этим? Ооооооочень хочу пообщаться со всеми, кто владеет мы решили с мужем все-таки делать забор стволовых клеток из пуповинной крови и сохранять их, так как у нас у друзей пару недель назад...

Обсуждение

с точки зрения лечения ДЦП результатов не вижу... увы.... но я и не надеялась особо, просто хотелось использовать все возможности, благо они были

У меня есть такой опыт.

Вам же уже сказали, что эта кровь в случае "ЧЕГО" не подойдет конкретно этому ребенку?
Для него она никакой ценности нести не будет. Имеет смысл хранить для братьев и сестер с условиями что мама и папа одни и те же, и то, в случае совпадения 6 из 6, ну крайне редко 5 из 6 ее переливают.

В моем случае забор был у младшего ребенка при родах как подстраховка для среднего (онкология). Было направление (ходатайство) из больницы в центр переливания крови, с указанием причин забора. Там выдают баночку с каким-то содержимым и пакеты для крови и плаценты. В течение 12 часов после родов материал нужно привезти на станцию. Если роды в будни и рабочие часы, то они сами выезжают.
Технически роды ничем не отличаются. Но нужно заранее поставить в известность роддом, что вы к ним поступите для этой процедуры, вам дадут список роддомов, а в роддоме телефон акушера.

Девочки, а кто-нибудь делал/будет делать забор пуповинной крови и стволовых клеток? Я вот задумалась а может сделать? Единственное терзает вопрос по хранению эттого всего... есть ли проверенные ли компании у нас в стране или просто шарашкины конторы?

Обсуждение

Я делала в Криоцентре. Считаю, что раз возможность у меня была, надо делать.

недавно смотрела смешариков пинкод на эту тему..у меня опыта нет никакого в этой сфере но чую что у нас это больше вытягивание денег, чем реальная помощь когда надо.

Стволовые клетки пуповинной крови. Кто слышал про процедуру их сбора и хранения? Вроде, надумали мы собрать пуповинную кровь в этот раз и сохранить стволовые клетки... с девушкой из Криоцентра договорились... но вот теперь гложат сомнения.

Обсуждение

Мы собирали стволовые клетки у младших детей. Когда собирали у второго ребенка, я это делала "на всякий случай", когда у третьего, я уже была подкована, так как провела немало времени в РДКБ в отделении гематологии в качестве волонтера. Так вот, там я посмотрела как ищут эти самые клетки для больных детей, иногда доноров находили на другом конце земли, как это все сложно и как часто чужие клетки не работали после пересадки. После всего увиденного вопрос надо или нет, отпал сам собой!

Вижу минусы:
1) Не факт что стволовые клетки будут хранить в нужных условиях
2) Не факт, что через 5-10-15-20 лет наука будет стоять на том же месте. Сейчас уже стволовые клетки спокойно могут вырабатываться без сохранения криоматериала
Из плюсов - подстраховка (при чем под боооольшим вопросом)
Мы не стали.

Вроде, надумали мы собрать пуповинную кровь в этот раз и сохранить стволовые клетки... с девушкой из Криоцентра договорились... но вот теперь гложат сомнения. Деньги немаленькие, насколько это оправданно. Завтра поеду в р/д, там планировала пересечься как раз с девушкой...

Обсуждение

а разве сейчас в РД не у всех берут?
я в 2-ке рожала на фкрштатской, там взяли и 2 мес бесплатно хранили, потом можно продлить если хочешь. но я что-то не продлила.

у нас отговаривают - не стоит этих денег и нет гарантии, что наука продвинется.

Смысл забора этой крови - высокая концентрация стволовых клеток. они имеют доказанную эффектинвость при некоторых онкологических заболеваниях, в том числе лейкозах. Я пожертвовала пуповинную кровь на благо науки.

Согласно статистике, в мире ежегодно происходит примерно 200 млн родов, в процессе которых уничтожается около 20 тысяч тонн пуповинной крови. Хотя многие врачи уверяют, что она крайне ценна. Сегодня пропаганда по сохранению пуповинной крови начала активно развиваться, и всё чаще молодые родители подписывают контракты на её криоконсервацию, чтобы в будущем иметь своеобразную «страховку» для ребёнка. Ведь считается, что с помощью стволовых клеток, входящих в её состав, можно вылечить практически все заболевания, в т. ч. и грозу сегодняшнего дня — онкологию. Как именно работает пуповинная кровь и зачем осуществляют забор стволовых клеток в роддомах — в материале АиФ.ru.

Легче реакции, меньше инфекций

Как говорят врачи, пуповинная кровь и находящиеся в ней стволовые клетки значительно лучше и здоровее, чем другие варианты крови. Правда, речь чаще всего идёт о её востребованности при тяжёлых патологиях, требующих, например, длительного серьёзного лечения или пересадки. Плюсами собственных стволовых клеток являются:

• Меньший риск передачи скрытых вирусных инфекций
• Меньшая частота и тяжесть реакции «трансплантат против хозяина»
• Отсутствие риска для донора и т. д.

Стволовые клетки появляются у эмбриона с самого начала его формирования в утробе матери. Поначалу они являются внутренней клеточной массой, из которой позже формируются все ткани и органы человека. Такие клетки очень быстро делятся и превращаются в клетки 350 различных типов. Главное их свойство — защищать организм от различных патологических микроорганизмов. Как только они получают сигнал о «нападении», то направляются в очаг поражения и превращаются в дополнительные клетки того органа или тканей, которые борются с инфекцией. Таким образом, они могут помогать восстанавливать баланс и заменяют собой повреждённые части тела.

Но есть и минус: стволовые клетки с течением времени теряют свою работоспособность и ослабевают, им становится сложнее бороться с нагрузками. И тут на помощь могут прийти заготовленные заранее запасные варианты.

Концентрат высочайшего качества

Сегодня считается наиболее правильным производить забор крови у младенцев. Ведь у них стволовые клетки ещё «свежие», не деформированные и не «уставшие». Процесс забора крови из пуповины, которая, в принципе, после родов никому не нужна, т. к. всё своё предназначение уже выполнила, автоматизирован. Поэтому врачи на выходе получают концентрированный состав, богатый стволовыми клетками высокого качества. Жизнеспособность клеток после такого выделения, как показывают исследования, составляет 99,9%. Для проведения процедуры родителям выдаётся индивидуальный набор, который может быть дан на руки или сразу же доставлен в роддом. Забранную кровь можно даже транспортировать в другие регионы: об условиях нужно будет договариваться с персоналом криобанка.

Далее на помощь приходит процедура криоконсервации. Ведь только так можно сохранить кровь и клетки на долгий срок. При необходимости останется только разморозить их и проводить лечение. Как говорят эксперты, терапия таким средством в мире проводится уже 15 лет. В списке сфер, в которых борются с болезнями посредством такого лечения:

• Онкология
• Гематология
• Гастроэнтерология
• Генетика
• Гинекология
• Дерматология
• Кардиология
• Неврология
• Офтальмология
• Урология
• Флебология
• Хирургия
• Эндокринология

Как хранят клетки

Перед тем как отправлять клетки на хранение, их следует подготовить к заморозке. Для этого их помещают в специальные криоконтейнеры, которые представляют собой пластиковые пакеты или пробирки. Что именно будет использоваться, определяется количеством материала. Каждый образец стволовых клеток обязательно маркируют и используют для этого уникальный код, состоящий из цифр или штрихов. Позже вся информация заносится в специальную базу данных и дублируется, так что вероятность ошибок исключается на 100%.

Стволовые клетки подвергаются плавной заморозке в специальных установках, которые соблюдают оптимальную скорость охлаждения и позволяют сохранить их максимальную жизнеспособность.

Контейнеры с клетками после заморозки помещаются в отдельные боксы и погружаются в жидкий азот. Таким образом их защищают от внешнего воздействия, чтобы они сохраняли свою активность в течение длительного периода времени. Электронные датчики, которые есть в хранилищах, отвечают за контроль уровня азота круглосуточно без перебоев.

Стоит учитывать, что такая процедура не из категории дешёвых. Так, в среднем стоимость забора пуповинной крови составляет 70 000 рублей. А последующее хранение определяется условиями разных криобанков, но в среднем каждый месяц обойдётся в 10 000 рублей.

Радикальным методом лечения многих тяжелых гематологических болезней является , которые выделяют из ткани костного мозга или крови. Осуществить его возможно путем поиска подходящего донора, что довольно не просто. Вероятность существования неродственного донора, совместимого по HLA-антигенному составу, составляет 1:100000. Для этого необходимы целые регистры типированных доноров, исчисляемые несколькими сотнями тысяч человек. Частично решить эту проблему помогает заготовка пуповинной крови.

Клиническое использование

В пуповинной крови содержится большое количество стволовых клеток, которые могут быть использованы в будущем для лечения ряда серьезных заболеваний.

Кровь, полученная из плаценты, является богатым источником гемопоэтических клеток. Концентрация колониеобразующих единиц в ней значительно превышает их количество в крови взрослого человека даже после стимуляции факторами роста. Она приближается по своему составу к костномозговой ткани. Поэтому стволовые клетки, содержащиеся в пуповинной крови, могут успешно применяться в гематологии для лечения следующих заболеваний:

• миелодиспластические синдромы;
• некоторые врожденные заболевания ( , наследственные гемоглобинопатии, синдром Барра и др.).

Трансплантация гемопоэтических клеток, полученных из плацентарной крови, является перспективным направлением в медицине, которое уже применяется в неврологии (последствия травм, дегенеративные заболевания нервной системы), ревматологии (диффузные ), онкологии и других отраслях.

Эффективность такого лечения определяется:

• своевременностью диагностики и лечения заболевания;
• степенью гистосовместимости (по системе HLA) донора и реципиента;
• возрастом больного (дает хорошие результаты у детей младше 5 лет);
• количеством пересаженных стволовых клеток (если их мало, то повышается риск рецидива патологического процесса или несостоятельности трансплантата).

Заготовка

Пуповинную кровь получают во время родов через естественные родовые пути или путем кесарева сечения. На этапе планирования процедуры беременную женщину всесторонне обследуют и исключают у нее заболевания инфекционной природы ( , и др.).

Готовясь к родам, в асептических условиях подготавливают систему для забора крови. Она состоит из специального контейнера с гемоконсервантом и устройством для взятия крови.

При нормальных родах через естественные родовые пути забор крови может осуществляться в двух вариантах:

• Если плацента находится в полости матки и еще не отделилась, то эксфузия крови выполняется после наложения зажима на пупочный канатик и отделения новорожденного от плодного места. Для этого пуповину тщательно обрабатывают растворами антисептиков, после чего производят пункцию пупочной вены, располагая емкость для сбора материала на 50-70 см ниже живота роженицы, чтобы кровь стекала в нее самопроизвольно.
• Если плацента уже выделена из полости матки, то ее располагают на специальной рамке плодной частью книзу, затем также обрабатывают и пунктируют вену пупочного канатика, после чего получают кровь в контейнер.

Из артерии пупочного канатика дополнительно берется 10 мл крови для первичного этапа обследования на принадлежность к группе крови и скрытые инфекции.

После окончания процедуры контейнер отсоединяют и транспортируют в банк пуповинной крови в специальном холодильнике или дополнительном контейнере, защищенном от перепада температур. При этом длительность хранения крови с гемоконсервантом до ее фракционирования не должна превышать 24 часов. Иначе стволовые клетки гибнут.

Хранение стволовых клеток

В емкости с жидким азотом стволовые клетки хранятся до 25 лет.

Выделение гемопоэтических клеток из пуповинной крови проводится в асептических условиях.

• Для этого кровь подвергается центрифугированию на высоких оборотах, в результате чего от нее отделяется плазма.
• После этого приступают к осаждению эритроцитов путем добавления седиментирующего вещества (желатин, гидроксиэтилкрахмал).
• Полученную клеточную взвесь смешивают с физиологическим раствором и дважды центрифугируют.
• Затем с помощью шприца отделяют клеточный осадок и подготавливают его к заморозке и длительному хранению.

Полученные из пуповинной крови стволовые клетки хранятся при низких температурах в замороженном состоянии:

• в холодильных камерах с температурой -80 градусов (до 6 месяцев);
• в парах жидкого азота при температуре -150 градусов (несколько лет);
• в емкостях с жидким азотом и температурой -196 градусов (более 20 лет).

Для замораживания клеточной взвеси ее предварительно охлаждают до +4 градусов на ледяной бане или в условиях холодильника. Затем шприцом набирают эту взвесь и переносят ее в мешок для консервирования, добавляя по каплям ограждающий раствор, после чего мешок запаивается и помещается в специальный аппарат для программного замораживания. При этом сам процесс осуществляется по четырехступенчатой программе, что позволяет сохранить жизнеспособность клеток в течение длительного времени.

Для использования замороженных образцов стволовых клеток непосредственно перед трансфузией производится медленное размораживание клеточной взвеси на водяной бане с температурой +40 градусов. После тщательного перемешивания выполняется исследование на сохранность клеток и их жизнеспособность.

Лабораторное тестирование

Применение в клинической практике крови, полученной из пуповины, требует специального тестирования в условиях лаборатории. Это позволяет определить принадлежность по HLA-системе, оценить качество препарата и выявить потенциальную возможность заражения инфекционными заболеваниями.

Перечень необходимых лабораторных анализов включает:

• определение объема пуповинной крови и содержания в нем клеточных элементов (стволовых клеток, лейкоцитов, эритроцитов);
• анализ крови на маркеры вирусных гепатитов;
• биохимическое исследование крови ();
• выявление антител к ВИЧ, бледной трепонеме, ;
• посев крови на стерильность;
• определение HLA-генотипа, группы крови по системе АВ0 и резус-фактору.

Для проведения всех исследований в полном объеме необходимо около 10 мл крови. Из них 4 мл сразу берут для тестирования, а остальные 6 мл центрифугируют и замораживают, после чего снова исследуют. Это дает возможность оценить качество трансплантата и прогнозировать время приживления кроветворных клеток в организме больного.

Пуповинную кровь для исследований используют очень экономно с целью минимизации потерь гемопоэтических клеток.

• Определение групповой принадлежности, HLA-фенотипа, биохимических показателей производится в порции крови, взятой из артерии пуповины.
• Бактериологическое исследование осуществляется в оставшейся после центрифугирования эритроцитарной массе.
• Серологические исследования сыворотки крови с целью выявления инфекций проводят с использованием плазмы, полученной в процессе фракционирования.
• Оценка концентрации клеток-предшественников гемопоэза производится в клеточном осадке, полученном путем разделения крови на фракции.

Преимущества и недостатки использования пуповинной крови

В настоящее время многие родители задумываются о том, стоит ли заготавливать пуповинную кровь ребенка, важно это или нет? Для того чтобы ответить на эти вопросы, рассмотрим преимущества этого метода лечения.

1. Процедура является абсолютно безопасной (не наносит вред здоровью матери и ребенка).
2. Не требует дополнительного обезболивания.
3. Имеет низкий риск заражения инфекционными заболеваниями.
4. Предоставляет возможность длительного хранения гемопоэтических клеток.
5. Обеспечивает биологическое страхование жизни ребенка при развитии у него тяжелых заболеваний (особенно кроветворной системы).

Однако существуют и недостатки применения пуповинной крови как источника стволовых клеток.

1. Основным из них является относительно небольшой объем получаемого материала и потери его при заготовке и лабораторном тестировании.
2. Еще одним недостатком этой процедуры является ее высокая стоимость при небольшой вероятности применения у ребенка. Однако она малосопоставима со стоимостью пересадки костного мозга, которая исчисляется десятками тысяч долларов.

В настоящее время в России и других странах существуют специальные банки пуповинной крови. Это могут быть частные и государственные структуры. Последние преследуют цели создать определенный запас биологического материала, который может использоваться для научных исследований и лечения больных.

Частные банки занимаются хранением именных образцов, которыми можно воспользоваться в случае болезни. Они предлагают своим клиентам различные тарифы:

• Средняя стоимость забора и хранения пуповинной крови в Гемабанке составляет 65000 рублей, отдельно оплачивается каждый год хранения (7000 рублей).
• В банке стволовых клеток «Криоцентр» пакет хранения стволовых клеток (25 лет) имеет общую стоимость около 230 000 рублей.

Девочки, сегодня прочитала статью про забор пуповинной крови на стволовые клетки.

Сохранение пуповинной крови: зачем и как?

Среди множества мероприятий, которые предлагают беременным, особняком стоит забор и хранение пуповинной крови. Суть процедуры в следующем: сразу после родов из пуповины получают кровь, которая принадлежала плоду. Выделенные из неё клетки замораживают и хранят в специальном банке до тех пор, пока они не потребуются.

Ценность пуповинной крови заключается в том, что она содержит биологически активные стволовые клетки, и поэтому хорошо подходит для нужд клеточной терапии и трансплантологии.

Банки пуповинной крови делятся на именные - в них хранят кровь тех детей, родители которых заключили соответствующий контракт, и банки-регистры, создаваемые на основе безвозмездного донорства. Любой человек, которому для лечения требуется пуповинная кровь, может обратиться в банк-регистр. Однако проблема заключается в том, что подобрать подходящую кровь бывает очень трудно: необходимо соответствие по основным антигенным системам, иначе чужеродные клетки вызовут у пациента реакцию отторжения. К сожалению, в России коллекция у банков-регистров достаточно скудна, поэтому приходится искать кровь часто за рубежом, на что требуются время (от 6 месяцев до года) и немалые деньги (от 15000 Евро). Возможный выход из сложившейся ситуации - запасать собственную кровь ещё при рождении: она будет всегда доступна и в случае необходимости идеально подойдёт для трансплантации.

Чем ценна пуповинная кровь?

Пуповинная кровь богата кроветворными стволовыми клетками, т.е. клетками-родоначальниками элементов крови. Их используют для трансплантации, когда собственное кроветворение нарушается: при лейкозах, тяжелых нарушениях иммунной системы и других заболеваниях. Противники хранения пуповинной крови резонно замечают, что такие патологии, хоть и являются жизнеугрожающими, встречаются редко. Однако, с другой стороны, в перспективе предполагается, что стволовые клетки будут использоваться по более широким показаниям. В любом случае, уже сейчас успешно проведены тысячи трансплантаций пуповинной крови, спасшие жизнь больным с ранее считавшимися неизлечимыми заболеваниями.

Пуповинная кровь - не единственный источник кроветворных клеток, но у неё есть ряд преимуществ: лёгкое и безопасное получение, молодость, а потому высокая функциональная активность стволовых клеток и иммунологическая совместимость. Для того же, чтобы воспользоваться заранее заготовленной кровью, требуется от нескольких дней до нескольких недель.

Пуповинную кровь новорожденного можно использовать для лечения других членов семьи. Документированы успешные случаи пересадки родителям, бабушкам и дедушкам и даже двоюродным братьям и сестрам. Однако наибольшие шансы оказаться совместимыми имеют дети одних многодетных родителей.

Сохранять или не сохранять пуповинную кровь, каждые родители решают в зависимости от своего материального положения и от того, насколько нужной они считают эту процедуру. Следует учитывать, что забор пуповинной крови особенно показан для тех детей, в чьих семьях встречались тяжелые заболевания кроветворной системы или уже есть больные дети, которых можно вылечить пуповинной кровью брата или сестры, а также этническим меньшинствам, которым трудно найти совместимого донора в международных банках-регистрах.

Как проводится забор пуповинной крови?

После рождения ребёнка акушерка перевязывает и пересекает пуповину. Затем материнский конец пуповины обрабатывают стерильным раствором и с помощью иглы забирают из пупочной вены кровь в специальный стерильный контейнер с антикоагулянтом. Пуповинной крови обычно немного, около 80 мл, поэтому целесообразно дополнительно извлекать из плаценты всю имеющуюся в ней кровь.

Процедура абсолютно безболезненна и занимает несколько минут. Её можно провести как при нормальных родах, так и в ходе кесарева сечения. Более того, при многоплодной беременности технологически возможно собрать пуповинную кровь каждого из детей.

Как выделяют стволовые клетки?

Не позднее чем через сутки после забора образец попадает в банк. Прежде чем отправлять кровь на хранение, её нужно тщательно обработать. Вначале образец проверяют на инфекции, определяют группу крови и резус-фактор, затем «процессируют», то есть получают концентрат стволовых клеток. С помощью специального прибора удаляют избыток плазмы и практически все эритроциты. Полученный концентрат анализируют под микроскопом для определения жизнеспособности клеток. Следующий этап – заморозка клеток, которая не должна привести к их гибели. С этой целью добавляют криопротектор, предотвращающий образование «острых, рвущих клетки» кристаллов льда. Затем концентрат плавно замораживают до -90°С и помещают на карантинное хранение (пары жидкого азота, -150°С), где они находятся до того момента, пока не будут готовы результаты всех анализов. Наконец, приблизительно через 20 дней образцы переносят в постоянное хранилище (жидкий азот, -196°С).

На выходе получается от 5 до 7 пробирок концентрата. Помимо основных пробирок, заготавливают несколько пробирок-спутников - они содержат минимальный объём плазмы и клеток, достаточный для проведения анализа. Например, если владелец крови захочет использовать её для своего родственника и потребуется сделать проверку на совместимость, не надо будет размораживать основной образец - достаточно будет извлечь пробирку-спутник.

Как хранят стволовые клетки?

Клетки пуповинной крови хранятся в особых ёмкостях с жидким азотом в отдельной комнате, расположенной глубоко под землёй. Низкую температуру поддерживает специальная автоматизированная система, непрерывно контролирующая уровень жидкого азота. Она будет работать даже в случае отключения центрального электроснабжения. Банк пуповинной крови круглосуточно охраняется.

Исследования показывают, что в таком состоянии клетки остаются практически сохранными на протяжении многих лет. Уже сейчас не вызывает сомнения, что они не теряют своих свойств за 15-17 лет. Теоретически замороженные клетки могут храниться бесконечно долго.

Кому принадлежат стволовые клетки?

До совершеннолетия ребенка запас клеток пуповинной крови принадлежит его родителю или тому, кто указан в договоре хранения. После совершеннолетия сам ребёнок становится владельцем.

Сколько стоит договор?

За то, чтобы забрать, выделить и заморозить клетки пуповинной крови, придётся однократно заплатить около в 2000 Евро. В дальнейшем хранение образца обойдется в 3000 рублей в год (сумма прописывается в договоре и в последующем не меняется).

Что нужно сделать, если Вы хотите сохранить пуповинную кровь?

На любом сроке беременности нужно сдать анализы на инфекции и заключить договор. Затем сотрудники банка заранее доставят в роддом именной комплект с уникальным штрих-кодом, договорятся с врачом и акушеркой, обеспечат забор и доставку крови в банк, где из неё будут выделены стволовые клетки.

Не важно, предполагаются ли платные или бесплатные роды либо же кесарево сечение. Если женщина доставлена скорой помощью со схватками в ближайший роддом, следует позвонить по круглосуточному телефону и сообщить своё местонахождение - сотрудники банка договорятся с врачами.

Кто-нибудь пользовался данной услугой? Стоит она того или нет? Кто рожал в ЦПСиРе, вам предлагали данную услугу?

«Использование стволовых клеток можно считать естесственной формой «биологического» медицинского страхования жизни»

- Владимир Иванович, давайте сразу начнем с центрально­го вопроса: что такое стволовые клетки, чем они отличаются от других клеток организма?

Это уникальная группа клеток организма, способных размно­жаться и давать начало основным клеточным компонентам крови, кост­ного мозга и иммунной системы. Они способны к самовоспроизводству и выполнению необходимых функций, т.е. они могут формировать клетки практически всех известных тканей человека.

- Что является источником стволовых клеток для воз­можной трансплантации?

Во-первых, костный мозг (донорский или аутологичный 2), во-вторых, кровь пациента после проведения процедуры стимуляции кост­ного мозга, в-третьих, кровь, получаемая во время родов из пуповины и плаценты.

- Почему наиболее перспективным, по сравнению с другими источниками, считается использование клеток пуповинной крови?

Получение стволовых клеток из костного мозга и периферичес­кой крови связано с применением инвазивных (хирургических) методов или введением высокоактивных фармакологических препаратов и может проводиться только в условиях специализированных стационаров. Это направление сегодня также развивается.

- В чем же преимущество клеток пуповинной крови?

Это клетки уже сформированного организма - ребенка, кото­рый родился. В мире уже накоплен огромный опыт по их транспланта­ции: имеется более 3 тысяч случаев, из них примерно 90% удачных, в том числе удалось вылечить пациентов со злокачественными заболева­ниями. Стволовые клетки пуповинной крови обладают целым рядом пре­имуществ по сравнению с клетками из других источников: во-первых, они «молоды», т.е. обладают наибольшим потенциалом к делению и дифференцировке. Во-вторых, вероятность инфицирования пуповинной крови в процессе внутриутробного развития ребенка минимальна. По статистике, вирусы герпеса или цитомегаловирус обнаруживаются в крови пуповины менее чем в 1 % случаев (в крови взрослых людей - бо­лее 25%). В-третьих, стволовые клетки пуповинной крови обладают меньшей иммуногенностью 1 при аллогенных 2 трансплантациях. Успеш­ная трансплантация клеток пуповинной крови может быть выполнена даже при частичной несовместимости донора и реципиента, что недостижимо в случае использования костного мозга. В-четвертых, если срав­нивать трансплантацию клеток костного мозга и клеток пуповинной кро­ви, используемая доза стволовых клеток «молодой» пуповинной крови в несколько раз ниже аналогичной по эффекту дозы клеток из костного мозга взрослого человека.

Главное достоинство этих клеток (при «именном» хранении) - абсо­лютная генетическая идентичность тканям ребенка, из пуповинной крови которого они были получены, и частичная - в отношении организма матери и близких родственников. В этом случае современные клеточные технологии и прежде всего - использование стволовых клеток пуповин­ной крови можно считать естественной формой «биологического» меди­цинского страхования жизни и здоровья человека и членов его семьи.

Кроме того, замороженные стволовые клетки могут оказаться неза­менимой основой для новейших, пока неизвестных способов лечения многих заболеваний. Однажды полученные клетки могут храниться деся­тилетиями, и в случае необходимости их останется только извлечь из криогенного хранилища и разморозить, без потери времени на поиск (не всегда успешный) совместимого донора. Так что временной фактор здесь является еще одним преимуществом.

- Владимир Иванович, во всем мире клеточные технологии уже достаточно давно являются сферой научных и практичес­ких интересов. А какова степень исследованности проблемы стволовых клеток в российской науке?Какие научные центры занимаются этой проблемой?

В нашей стране изучением стволовых клеток занимаются многие НИИ, в том числе в Гематологическом научном центре академика А.И.Воробьева. Там очень сильная команда в отделении трансплантации костного мозга, которая занимается и прикладным аспектом стволовых клеток, фактически спасая людей.

Наш Центр акушерства, гинекологии и перинатологии является ро­доначальником клеточной терапии в российской медицине: еще в 80-90-е годы XXвека по заданию Минздрава мы разрабатывали эту проблему и получили хороший эффект, исследуя эмбриональные клетки, то есть клетки, забираемые у эмбриона после аборта. Сейчас идут активные ре­зультативные исследования стволовых клеток пуповинной крови.

- В вашем Центре создан один из первых российских банков стволовых клеток пуповинной крови. Что способствовало его созданию?

Дело в том, что этой деятельностью в мире занимаются уже более 15 лет. По данным зарубежных медиков, трансплантацию стволовых клеток пуповинной крови там используют достаточно широко для лече­ния около 100 заболеваний. У нас в России еще нет такого большого опыта, мы начинаем его создавать и накапливать. При создании нашего банка был учтен опыт аналогичных учреждений, существующих в США, Англии и Германии.

- Созданный вами «КриоЦентр» - это целиком коммер­ческая структура?

Да, сейчас на нашей базе создан первый в России коммерческий банк стволовых клеток, мы его организовали на средства спонсоров. В скором вре­мени планируется создание еще двух банков - в Москве и Петербурге. Но в дальнейшем мы предполагаем создание аналогичного государственного банка, как на Западе, где государство дает деньги на забор и хранение стволовых клеток, а если у кого-то возникла необходимость использовать их для лечения, в частности при злокачест­венных новообразованиях, то больница заказывает эту пуповинную кровь в банке: ее подбирают так же, как подбирают донорские сердце или печень. За это больница платит банку и получает нужный образец.

- Чем регламентирована деятельность «КриоЦентра»?

Все процедуры и процессы по забору и хранению пуповинной крови регламентированы Минздравом, а также соответствуют международным стандартам таких организаций, как Международная Ассоциация стволовых клеток и Международная Ас­социация клеточной терапии. Это организации, ко­торые существуют уже порядка 10 лет и выдают практически все регламентирующие документы, ка­сающиеся работы со стволовыми клетками.

- От каких болезней страхуют челове­ка и во многом - его семью стволовые клетки?

Эти клетки могут быть использованы при лечении большого количества как наследствен­ных, так и приобретенных заболеваний. Напри­мер, при серьезных заболеваниях крови они необ­ходимы для замены кроветворной ткани пациента. Они могут быть применены для лечения острых и хронических заболеваний сердечно-сосудистой, эндокринной, центральной нервной системы (ин­фаркт миокарда, инсульт, сахарный диабет), при генетических нарушениях, злокачественных обра­зованиях, болезнях опорно-двигательного аппа­рата, при тяжелых травмах. Причем возможно, что в недалеком будущем, с развитием новых клеточных технологий, сфера применения стволовых клеток может очень расшириться.

- А за этот срок работы со стволовыми клетками уже вы­явлены негативные тенденции при их использовании для лече­ния?

Пока мы не сталкивались с этим, видели только положительный результат, исследования продолжаются. Некоторые ученые говорят, что может пойти не та дифференциация трансплантируемой стволовой клет­ки в организме: стволовая клетка дифференцируется на 200 видов кле­ток, которые существуют в нашем организме. Это и костные, и сердеч­ные, и нервные, и мышечные, и все другие. Эта клетка настолько уни­кальна, что позволяет сформировать из себя все что угодно. Наша зада­ча - добиться того, чтобы давать этим стволовым клеткам определен­ный импульс, который бы позволял дифференцироваться в ту ткань, ко­торую мы хотим. Пока мы это не можем, пока мы их только вводим в ор­ганизм, и организм сам дает импульс для дифференциации. Если, напри­мер, случился инсульт, то мы вводим клетки в область мозга, где и прои­зошло кровоизлияние, и уже там эти клетки начинают преобразовывать­ся в нервные клетки. Если случился инфаркт, то мы вводим их или внут­ривенно, или непосредственно в сердце - они начинают формировать­ся и заменять кардиомиоциты 3 .

- А что вы можете сказать об исследовании эмбриональ­ных клеток, которые тоже относят к стволовым?

Эмбриональные клетки - это благодатный объект для науки, их потенциал огромен. Но вопрос их применения сегодня даже не стоит. И дело здесь даже не столько в морально-этическом аспекте, связанном с использованием абортивного материала, о котором много говорят, особенно на Западе. Дело в том, что ме­ханизм их дифференциации еще четко не выявлен, по­этому сначала их надо хорошо изучить, а потом думать о применении: эмбриональными клетками занимаются очень серьезно, но использовать их можно будет, может быть, через 30-40 лет, когда научатся ими управлять, а эта проблема настолько же глобальна, как и пробле­ма роста раковых клеток. В принципе, механизмы функ­ционирования у них практически одинаковы.

- Давайте вернемся к вопросу об использо­вании замороженных стволовых клеток други­ми членами семьи. Какова вероятность того, что хранящиеся в банке стволовые клетки мо­гут им пригодиться?

Высокий шанс оказаться иммунологически совместимыми есть у кровных родственников, т.е. у матери, братьев, сестер ребенка, чьи клетки хранятся в банке стволовых клеток. Тогда ребенок выступает донором 4 , а иммунологически совместимые с ним родственни­ки - реципиентами 5 . Наибольшие шансы оказаться совместимыми имеют близнецы и дети одних многодетных родителей.

- Эта вероятность имеет статистическое подтвержде­ние?

Статистически она относительно невысока: в случае злокачест­венных заболеваний - от 1 случая на 500 человек до 1 на 5000.

- На чем основана совместимость клеток донора и реципи­ента? Что может произойти, если стволовые клетки не по­дойдут пациенту?

Успех трансплантации определяется точностью подбора совмес­тимой пары «донор-реципиент» по определенным антигенам (белкам) так называемого комплекса гистосовместимости, т.е. свойством органа, ткани или клеток донора не отторгаться организмом реципиента. Преж­де чем производить трансплантацию, нужно провести так называемое HLA-типирование - по нему определяется степень совместимости. В идеальном варианте - это 6 совпадений из 6 возможных (3 гена ребе­нок наследует от матери, 3 - от отца). Если несовпадений - больше трех, то трансплантация не будет успешной ни при каких условиях. Либо трансплантат будет отторгнут иммунной системой реципиента, либо, что еще хуже, разовьется болезнь «трансплантант против хозяина» 6 .

- На Западе активно обсуждается возникшая в связи с развитием новых клеточных технологий проблема - выращи­вание детей «по заказу», т.е. когда в семье есть больной ребе­нок, родители рожают другого, чтобы использовать стволо­вые клетки для лечения больного. Как вы можете прокоммен­тировать эту проблему?

Это пока единичные случаи. Но они оправданы. Потому что в пер­вый раз, когда мать рожала, не было возможности сохранить клетки, а теперь ее ребенку нужна помощь.

- Итак, давайте теперь обратимся к насущному вопросу о том, когда и как именно происходит забор и хранение стволо­вых клеток из пуповины?

Процедура забора пуповинной крови занимает всего несколько минут и абсолютно безопасна как для матери, так и для ребенка. Она никак не влияет на течение родов и может проводиться как в ходе нормальных родов, так и при кесаревом сечении.

Происходит это так: рождается ребенок, пересекается пу­повина, и пуповинная кровь собирается специально обученным персоналом родового отделения в стерильный контейнер, со­держащий раствор антикоагулянта 3 . Далее собранная пупо­винная кровь незамедлительно доставляется в специализиро­ванную лабораторию, где из нее выделяются стволовые клет­ки. С момента получения пуповинной крови до начала выделе­ния стволовых клеток может пройти не более 12-24 часов (при условии правильного хранения). В последующие 24 часа количество жизнеспособных стволовых клеток значительно уменьшается.

- Какая доза крови берется?

Все, что удается собрать при родах, - это от 40 до 150 мл. Средний объем пуповинной крови, который удается собрать, - примерно 80-85 мл. Бывает и больше: 120, 130, 140 мл. Это уже за­висит от особенностей мамы, от срока беременности, от веса ребенка - такие чисто биологические параметры. Чем больше крови, тем больше клеток будет выделено, соответственно, трансплантация может быть вы­полнена более результативно. Дело в том, что трансплантация проводит­ся из расчета числа клеток к весу пациента. Соответственно, чем боль­ше клеток мы сохраним, тем старше будет возраст и больше вес паци­ента, которому они могут быть успешно трансплантированы. Если мы собрали 100-120 мл, то этих клеток заведомо достаточно для тран­сплантации взрослому.

- Можно ли оговорить с роженицей, что представитель «КриоЦентра» выедет с контейнером в выбранный ею роддом?

Заготовка пуповинной крови происходит пока только в родовом отделении Научного центра акушерства, гинекологии и перинатологии РАМН, но в ближайшее время с нашим банком будет сотрудничать еще несколько родильных домов. На первых порах мы готовы направлять для забора крови наших обученных сотрудников, но лучше, если это будут уметь делать акушеры и медсестры на местах.

- Где и как происходит выделение из пуповинной крови стволовых клеток? Зачем их выделять и почему просто нельзя хранить собранную кровь?

Дело в том, что содержание стволовых клеток в пуповинной крови относительно невелико - менее 1% от всех лейкоцитов. Эрит­роциты и прочие элементы крови являются ненужным балластом. В процессе выделения стволовых клеток кровь подвергается поэтапной обработке, в результате чего происходит освобождение от избытка плазмы, практически всех эритроцитов и большинства зрелых лейко­цитов. Выделенные стволовые клетки находятся в аутологичной 8 плазме, так что нет никаких чужеродных для человеческого организма компонентов. Данный способ является дорогим, но наиболее эффек­тивным.

Выделение стволовых клеток и их анализ проводятся с применени­ем только одноразовых расходных материалов, в специальном «чис­том» помещении, оснащенном подачей стерильного воздуха. Это единственное место, где образец крови контактирует с внешней сре­дой. Во всех остальных случаях он находится в герметично закрытой посуде. В лабораториях соблюдены все так называемые технические условия международного стандарта GMP.

- Какие делаются анализы?

Во-первых, определяется количество клеток (мы их считаем буквально поштучно); во-вторых, - группа крови, резус-фактор новорожденного, даже если это было сделано в родблоке - мы повто­ряем, чтобы не было ошибок. Здесь же происходит определение жиз­неспособности клеток перед замораживанием (мы должны убедиться, что после выделения они все живые), а также проверка на стериль­ность в плане бактериальной и грибковой инфекции. Ни один образец стволовых клеток не будет направлен на хранение вместе с остальны­ми, не будучи признанным «чистым» в отношении опасных инфекций. Время, необходимое для получения результатов тестирования, образ­цы стволовых клеток проводят на «карантинном» хранении, исклю­чающем контакт с другими пробами.

- Какова технология хранения выделенных клеток?

Стволовые клетки расфасованы в несколько ампул - в случае необходимости это позволит использовать нужное на данный момент количество клеток, а оставшиеся сохранить для будущих нужд, учи­тывая быстрое развитие новых клеточных технологий. Каждая ампу­ла с клетками помещается в герметично запаянный пластиковый пе­нал, обеспечивающий дополнительную защиту содержимого и марки­ровки. Вместе с основными хранятся маленькие ампулы-спутники, которые в случае необходимости извлекаются перед началом тран­сплантации; и по ним проверяются все нужные параметры. Клетки замораживаются в специальных установках - программных замораживателях, куда порционно подается жидкий азот и где температура плавно понижается с комнатной до -90 °С, по специальной програм­ме без колебания температуры. После этого их уже можно перекла­дывать в жидкий азот. Замораживатель параллельно рисует график снижения температуры, что является еще одним подтверждением правильности этой процедуры. Этот график впоследствии хранится в папке со всеми данными, характеризующими образец клеток. И потом клетки хранятся в сейфе-хранилище в жидком азоте при темпе­ратуре -196 °С - именно при такой температуре они сохраняют жиз­неспособность и биологическую активность на протяжении неограни­ченного времени.

- Сколько лет хранятся клетки?

Практически неограниченное время. Наш договор рассчитан на 15 лет - это срок, определенный большинством существующих в мире банков стволовых клеток, но при желании его можно продле­вать.

- Как отреагирует хранилище клеток на внезапное отк­лючение электроэнергии, разного рода аварии и техногенные катастрофы?

Чтобы построить такое помещение в нашем Центре, было затрачено очень много средств. Это сейф из металла, и если везде будет бушевать пожар, по техническим требованиям сейф и распо­ложенное в нем современное оборудование выдержат его в течение нескольких часов, образцам ничего не угрожает. При отключении электричества он автономно будет хранить образцы крови, так как здесь стоит электрогенератор.

- Проходит ли беременная женщина, решившая сохра­нить пуповинную кровь своего ребенка, какие-то обследования и зачем?

Если кровь ма­тери инфицирована, то она может инфициро­вать пуповинную кровь, поэтому при­мерно за 30 дней до предполагаемого вре­мени родов или непос­редственно перед ро­дами кровь матери должна быть дополнительно обследована на наличие возбудителей вирусных и бактериаль­ных инфекций, опасных для здоровья: ВИЧ, гепатитов, цитомегаловируса, токсоплазмоза, сифилиса, вируса Т-клеточного лейкоза челове­ка. Если анализы отрицательные, считается, что за месяц до родов мать уже практически не может инфицироваться СПИДом, гепати­том, но полученную во время родов пуповинную кровь мы проверяем, анализы повторяем, и, пока мы не убедимся в их чистоте, клетки у нас стоят на карантине.

- В каких случаях пуповинная кровь не может быть ис­пользована для трансплантации?

Есть абсолютные и относительные противопоказания. Абсо­лютными противопоказаниями являются: положительные результаты тестирования в отношении хотя бы одного из перечисленных заболе­ваний у матери; бактериальное или грибковое инфицирование пуповинной крови или выделенных стволовых клеток.

Относительные: низкое содержание стволовых клеток ввиду малого объема полученной пуповинной крови или её индивидуальных осо­бенностей.

- Во сколько обойдется процедура забора крови и ее хранение, а также предварительные анализы матери и тестирование полученного клеточного материала?

В формировании цены есть несколько составляющих: административные расходы (пакет документов, индивидуальный набор для забора пуповинной крови, получение пуповин­ной крови и т.п.), лабораторные анализы крови матери и пуповинной крови, выделение и хра­нение стволовых клеток, включая тесты и за­мораживание, всего получается 2350 евро. Хранение клеток в течение каждого последую­щего года - еще 100 евро. Если пуповинная кровь оказывается инфицированной и непри­годной для дальнейшего использования, удер­живается стоимость медицинских препаратов, и оговоренная сумма возвращается пациенту. Но все равно стоимость затрат на выделение и хранение аутологичных стволовых клеток из пуповинной крови в десятки раз меньше, чем поиск и приобретение аналогичных, но донорс­ких (аллогенных) - стоимость одного образца пуповинной крови, предоставляемого между­народными банками-регистрами для тран­сплантации, - от 18 000 до 25 000 долларов.

С Владимиром Кулаковым беседовала Ольга Молдавская.

1 Иммуногенность - способность вызывать некоторые осложнения, в т. ч. болезнь «трансплантат против хозяина»,

2 Алогенные - органы, ткани или клетки, происходящие из организма, отличного от организма пациента.

3 Кардиомиоциты - клетки сердечной мышцы, за счет которых сердце сокраща­ется.

4 Донор - пациент, предоставляющий свои органы, ткани или клетки для тран­сплантации.

5 Реципиент - пациент, которому производится трансплантация.

6 Болезнь «трансплантат против хозяина» - это тяжелое, иногда несовместимое с жизнью заболевание, являющееся осложнением трансплантации. Связано с имму­нологической несовместимостью тканей донора и реципиента. Клетки иммунной системы, образовавшиеся из трансплантированных стволовых клеток донора, восп­ринимают ослабленный организм реципиента в качестве «чужака» и начинают с ним бороться.