Ajutor la Tele2, tarife, intrebari

Co-cultivarea limfocitelor având molecule MHC-II de diferite haplotipuri determină transformarea și proliferarea blastică a acestora. Celulele care răspund aparțin limfocitelor T și sunt stimulate de determinanți străini MHC-II localizați pe limfocitele B și macrofage. Puterea reacției depinde de gradul de diferență dintre antigenele de histocompatibilitate. Pentru a evalua reactivitatea unui individ la o variantă alelica MHC, se prepară o cultură de limfocite unidirecționale. Pentru a face acest lucru, celulele stimulatoare sunt pre-tratate cu mitomicina sau iradiate, în timp ce celulele stimulatoare își pierd capacitatea de a se diviza, dar rămân viabile.

Reactivitatea într-o cultură mixtă de limfocite este unul dintre criteriile de evaluare a imunității celulare. SCL permite tiparea HLA, selectarea perechilor donor-recipient pentru transplanturi de țesuturi și organe și corelarea dintre antigenele HLA și anumite boli.

Pentru etapa reacției se folosește o suspensie de limfocite izolate din sângele pacienților (donator și primitor). Celulele care răspund spălate sunt suspendate în interior cantitate mica mediu 199 (0,5 ml) și după numărarea numărului de celule, se ajustează la 0,6 * 10 6 celule/ml. O suspensie de celule stimulatoare va fi preparată în mod similar cu adăugarea unei soluții de mitomicina C (500 μg de mitomicina C în 1 ml de soluție salină tamponată) la o rată de 0,1 ml per 1 ml de suspensie. Amestecul de celule este incubat timp de 40 de minute la 37 °C într-o baie de apă, agitând, apoi mediu rece 199 este adăugat la suspensie şi celulele sunt spălate de trei ori prin centrifugare. Sedimentul este suspendat într-un mediu de cultură nutritiv, aducând numărul de celule la 0,6 * 106 celule/ml.

Se adaugă 0,1 ml de suspensie celulară în soluție Hanks la godeurile unei plăci imunologice sterile cu fund rotund și se adaugă 0,1 ml suspensie celulară care poartă variante alelice MHC. La control se adaugă aceeași cantitate de soluție Hanks.

Rezultatele sunt înregistrate după incubarea celulelor la 37 °C timp de 3-5 zile, în funcție de configurația reacției folosind metoda morfologică sau izotopică (vezi RBTL).

În timpul transplantului măduvă osoasă selecția unui donator histocompatibil se efectuează pe baza rezultatelor tipării HLA a donatorului și a primitorului, precum și atunci când se determină compatibilitatea perechilor donor-receptor HLA-identice selectate în SCL, care este etapa finală a evaluării compatibilității. În acest scop, se utilizează o reacție SCL bidirecțională folosind o micrometodă de cultură într-o placă cu 96 de godeuri cu o evaluare a cantității de proliferare prin includerea de H3-timidină radioactivă în ADN-ul limfocitelor în proliferare.

2.2. Metode de interacțiuni celulare

Aproape toate metodele de interacțiuni celulare utilizate în imunogenetica clinică se bazează pe fenomenul de formare a blastului într-o cultură mixtă de limfocite, descoperit de cercetătoarea canadiană Barbara Bain. Reacția unei culturi mixte de limfocite (MLC) a făcut posibilă realizarea unui studiu fin diferențiat al complexului HLA și, în special, a uneia dintre subunitățile sale - locusul HLA-D. O serie de alte metode de interacțiuni celulare - limfoliza mediată celular (CML), testul de amorsare a limfocitelor (Primed Lymphocyte Typing) - se bazează pe metoda MLC sau o conțin ca parte integrantă.

2.2.1. Cultură de limfocite mixte (MCL)

Principiul metodei este prezentat în Fig. 10, din care reiese clar că două populații de limfocite genetic diferite interacționează între ele în cultura in vitro. Una dintre populații este tratată cu mitomicina C sau iradiată, în urma căreia își pierde capacitatea de a forma blasturi și de a încorpora timidina (3 HT), însă, fără a-și pierde proprietățile antigenice, își păstrează capacitatea de stimulare (stimulente; S; -populatie).

Celulele care răspund la stimulare (respondenții, populația R) se transformă în blasturi după câteva zile și includ timidina adăugată în cultură. Intensitatea reacției este măsurată cu ajutorul unui trasor de radiații pentru încorporarea 3H-timidinei.

Sunt cunoscute mai multe variante ale reacției unei culturi mixte de limfocite, dintre care două sunt propuse aici: tradiționalul și microvariantul implementat în tabletele Cook (Fig. 11).

Orez. 11. Echipamente pentru microvariante MLC și CML. 1 - tabletă cu fund rotund cu 96 de găuri; 2-pipetă automată („Pipetman”) cu program pentru diferite volume; 3 - pipeta automata ("Sigma") pentru un anumit volum; 4 - vârf de pipetă de unică folosință; 5 - cutie cu flux laminar

Versiunea tradițională a MLC (modificare de F. S. Baranova):

Limfocitele sunt izolate pe un gradient Ficoll-urografin așa cum este descris mai sus. Prima spălare este efectuată în PBS (NaCI - 8,0 g, Na2HP04 - 1,15 g, KH2PO4 - 0,2 g, KC1 - 0,2 g per 1 litru de H20); următoarele două sunt produse în mediu 199 cu ser AB 5% (pool de la 15 donatori);

Celulele care răspund sunt resuspendate în mediu 199 cu ser AB 10% şi concentraţia celulară este ajustată la 0,6 x 106 per ml;

Celulele stimulatoare izolate în același mod la o concentrație de 5 - 106 per 1 ml sunt tratate cu mitomicină C (60 y/ml) de la Serva și incubate timp de 40 minute la 37°C într-o baie de apă. După incubare, celulele sunt spălate de 3 ori cu mediu 199 cu ser AB 5%, resuspendate în mediu 199 cu ser AB 10%, aducând concentrația la 0,6 x 106 în 1 ml;

0,5 ml de celule care răspund și 0,5 ml de celule stimulatoare sunt amestecate într-un tub de centrifugă, se adaugă 0,04 ml de 10 ml de soluție Hepes (Serva) și se incubează timp de 144 de ore; experiența este plasată în trei paralele (triplet);

Cu 24 de ore înainte de sfârșitul incubației, se adaugă în eprubete 3H-timidină 1μCi (3,7x10 4 BC), proba de activitate specifică este de 5 mCi/mmol (18,5x10 7 BC/mmol) și se continuă incubarea;

La sfârșitul incubării, celulele sunt transferate în filtre millipore (0,6 - 0,9 microni) și spălate. soluție salină(37°C) și o soluție 5% răcită de acid tricloracetic (4°C). Filtrele se usucă și se pun în flacoane cu 5 ml lichid de scintilație (5 g PPO și 0,5 g POPOP - la 1 litru de toluen) *. Activitatea de încorporare a timidinei 3H este măsurată într-un contor p; rezultatul este exprimat în incluziuni absolute ale etichetei radioactive la 1 min sau în indicele de stimulare (SI) conform formulei:

* (PPO - 2,5-fenol-oxazol; POPOR - (1,4-di-2-15-fenoloxazolitbenzen).)

Valoarea CPM medie în trei prototipuri

SI = Valoarea medie a CPM în trei probe de control/Culturi spontane de celule care răspund servesc ca probe de control.

Versiune micro a MLC în tabletele Cook. La cel de-al 8-lea Atelier au fost elaborate cerințe care standardizează microopțiunea MLC, în conformitate cu care este prezentată mai jos:

Limfocitele sunt izolate într-un gradient izopac-ficoll și resuspendate în mediu RPMJ-1640*, aducând concentrația la 5x105 în 1 ml;

* (Mediul 199 amestecat cu ser uman din grupa AB (ser 5% luat de la mai multe persoane) poate fi utilizat.)

Celulele stimulatoare sunt tratate cu mitomicina C sau antrenament;

5x104 respondenți și același număr de stimulatoare sunt plasate folosind o micropipetă de tip Pipetman în fiecare godeu al unei microplăci cu fund rotund Cook;

Plăcile sunt incubate într-un termostat cu alimentare automată de 5% CO 2 timp de 120 de ore; apoi se adaugă lμmCi 3H-timidină în fiecare godeu la o activitate specifică a timidinei 6 Ci/mmol; toate manipulările sunt efectuate cu o pipetă Pipetman;

La 16 ore după adăugarea timidinei, culturile din fiecare godeu sunt transferate în filtre millipore folosind o pipetă automată și spălate cu soluție salină și apoi cu acid tricloracetic 5%; este convenabil să folosiți „recoltatoare” speciale pentru a transfera cultura în filtre millipore;

Activitatea de încorporare a timidinei a fost determinată așa cum este descris mai sus.

2.2.2. Limfoliza mediată celular (LMC)

LMC a fost utilizată în studiile imunogenetice relativ recent (din 1972), dar în În ultima vreme devine o tehnică din ce în ce mai populară, permițând un studiu detaliat al rolului verigii eferente a imunității la transplant și câștigând recunoașterea ca metodă informativă de monitorizare imunologică. Principiul metodei este prezentat în Fig. 12. Metoda se bazează pe tehnica propusă de J. Lightbody (1971), care este rezumată pe scurt după cum urmează.

1. LMC începe cu un test HLC convențional, în care celulele care răspund recunosc „stimulatori”, sensibilizează celulele care răspund și formează celule ucigașe sensibilizate.

2. A doua fază, în care celulele ucigașe sensibilizate se amestecă cu celule țintă marcate cu 51 Cr, constă în distrugerea acestora din urmă de către celulele ucigașe efectoare; celulele țintă pot avea același genotip ca „stimulatorii” din prima fază a MLC, sau pot fi celule ale unui „al treilea” partener, dotate cu determinanți antigenici comuni „stimulatorilor” sau fără aceștia.

3. Cantitatea de crom radioactiv eliberată din celulele țintă distruse și eliberată în mediul de cultură servește ca măsură a intensității efectului ucigaș.

Orez. 12. Principiul limfolizei mediate celular (LMC). Rândul I - sensibilizarea celulelor care răspund, formarea celulelor ucigașe; Rândul II - interacțiunea ucigașilor cu ținta; Rândul III - distrugerea celulei țintă; se obţine mediu de cultură 51 Cr

Trei variante de LMC sunt descrise aici: varianta traditionala modificat de L.P. Alekseev (1979), micro-versiune în tablete Cook, CML direct (Direct-CML -D-CML.

Opțiune tradițională[Alekseev L.P., 1979].

Metoda este împărțită în mai multe etape.

Primesc asasini:

Limfocitele periferice ale ambelor populații (celule R și celule S) sunt izolate în mod obișnuit, spălate de trei ori în gradient de densitate în mediu 199 cu ser AB 5% (10 min, 150 g);

1x106 celule R (0,8 ml) sunt amestecate în tuburi de centrifugă cu 2x106 celule S (0,2 ml) tratate cu mitomicină C şi incubate timp de 144 ore la 37°C;

Celulele sunt centrifugate la 150 g timp de 10 minute, iar sedimentul este resuspendat în mediu 199 cu adăugare de ser de viţel 20% (mediu 199 + adică), aducând concentraţia la 1x106 în 1 ml;

Unul dintre eșantioane este lăsat să studieze nivelul MLC, restul sunt folosite ca ucigași gata făcut.

Obținerea țintelor:

Limfocitele izolate în mod obișnuit sunt resuspendate în mediu 199 cu ser AB 20% și incubate cu fitohemaglutinină (0,003 mg/ml Wellcome) timp de 72 de ore la 37°C; concentrația celulară 1x106 în 1 ml;

Celulele sunt centrifugate timp de 10 min la 150 g, sedimentul este resuspendat în mediu 199 cu 5% ser AB și concentrația celulară este ajustată la 2x104 în 1 ml;

51 Cr 100 uCi/ml (3,7x106 BC/ml) este adăugat la suspensie şi incubat timp de 40 minute la 37°C;

Celulele sunt spălate de trei ori în mediu 199 cu adăugare de 5% ser AB (150 g, 10 min) și sedimentul este resuspendat în mediu 199 cu 5% ser AB. aducând concentraţia la 2x10 4 în 1 ml.

Stabilirea reacțiilor:

5x105 killers (0,5 ml) sunt amestecate cu 1x104 ţinte (0,5 ml), incubate timp de 4 ore (37°C) şi centrifugate la 150 g timp de 10 minute;

Supernatantul este aspirat și impulsul cauzat de 51 Cr este numărat pe un numărător; numărarea se efectuează în 0,5 ml de supernatant;

Nivelul de citoliză se calculează folosind următoarea formulă:

Ekper. ieșire 51 Cr - ieșire spontană 51 Cr/max, ieșire 51 Cr - ieșire spontană 41 Cr × 100.

Eliberarea spontană de crom este măsurată pe ținte incubate timp de 4 ore (37°C) fără celule ucigașe; randament maxim de crom - pe ținte complet distruse prin îngheț și dezgheț; Toate testele sunt efectuate în tripleți.

Microvarianta LMC în tablete [după Mawas S., 1976]:

Faza de obținere a ucigașilor este efectuată ca MLC în plăci cu fund rotund, dar celulele R și S sunt amestecate în cantități egale, 2x105 pa fiecare godeu și incubate la 37°C;

După 5 zile, celulele sunt colectate cu o pipetă Pasteur într-o eprubetă, numărul celor vii este numărat cu albastru de tripan și concentrația este ajustată la 10x10 6 în 1 ml;

Celulele țintă sunt cultivate cu PHA timp de 3 zile;

în ziua reacţiei, celulele ţintă sunt spălate (300 g) şi resuspendate într-un mediu de cultură, distribuind 1 ml în eprubete şi ajustând la 1x106 în 1 ml;

Se adaugă 200 μCi 51 Cr (7,4x10 6 BC) în fiecare tub cu celule țintă și se incubează timp de 1 oră la 37°C; spălați celulele de 3 ori; sedimentul este resuspendat și ajustat la o concentrație de 1x10 în 1 ml (viu);

Testul este implementat în microplăci cu fund rotund; pentru aceasta, în fiecare godeu sunt distribuite 0,7 - 1x106 celule killer (0,1 ml) şi 1x104 celule ţintă (0,1 ml); volumul total al suspensiei din fiecare godeu este de 0,2 ml, se adaugă 0,05 ml de mediu în fiecare godeu și se incubează (37°C) timp de 4 ore;

Plăcile sunt centrifugate la 800 g pe o centrifugă Beckman timp de 10 minute; supernatantul din fiecare godeu este transferat în eprubete și numărat pe un contor y;

Faza de producere a celulelor ucigașe (MLC) este efectuată pe mediu RPMJ-1640 cu adăugarea de 20% plasmă umană; pentru faza de ucidere, utilizați mediu MEM cu adăugare de 20% plasmă umană, preîncălzită.

CML direct (D-CML). LMC directă este o tehnică dezvoltată special în scopuri clinice care și-a găsit utilizare în monitorizarea imunologică. Schema acestei reacții este prezentată în Fig. 13.

Principala diferență față de LMC tradițională este că stadiul formării celulelor ucigașe (faza de sensibilizare) nu are loc in vitro, ci in vivo, adică în corpul uman sensibilizat prin transplantul unui organ sau țesut alogen. Datorită efectului țesutului alogenic, limfocitele primitorului sunt sensibilizate la antigenele tisulare ale donatorului și nu necesită tratament special in vitro; durata testului se reduce semnificativ în timp, deoarece doar țintele trebuie pregătite mai întâi.

Limfocitele obținute din sânge periferic sau, mai frecvent, din splina donatorului (vezi 2.1.2) și congelate prin oricare dintre metodele descrise mai sus (vezi 2.1.3).

2.2.3. Citotoxicitate mediată de celule dependente de anticorpi (ADCC)

Acest tip reacții celulare similar ca mecanism de acțiune cu LMC descris mai sus. Principiul reacției este prezentat în fig. 14. Componentele reacției sunt celulele țintă (celule donatoare sau limfocite alogene), serul (alogene sau primitoare), care conțin probabil anticorpi direcționați către determinanții celulelor țintă și celule efectoare (limfocite receptor sau limfocite alogene).

Celulele efectoare în acest tip Interacțiunea este realizată de așa-numitele celule K situate în sângele periferic. Spre deosebire de celulele ucigașe din LMC, acestea efectuează un efect citotoxic fără sensibilizare prealabilă, totuși, manifestarea efectului citotoxic al celulelor K este posibilă numai prin anticorpi direcționați către determinanții celulelor țintă. Liza specifică este măsurată prin eliberarea de 51 Cr dacă serul de testat conține anticorpi la determinanții țintă.

Determinanții țintă în ADCC pot fi practic specificitățile tuturor loci HLA, inclusiv HLA-D, HLA-DR, precum și determinanții aflați în afara sistemului HLA.

Această reacție complexă este cea mai răspândită în monitorizarea imunologică pentru detectarea anticorpilor celulelor B. În acest sens, au fost propuse mai multe modificări care prevăd îmbogățirea suspensiei de celule țintă cu limfocite B, adsorbția serului pe trombocite etc.

În plus, sunt luate în considerare o serie de alte caracteristici de răspuns din acest sistem. Serul de testare trebuie decomplementat, deoarece in caz contrar reacția poate fi citotoxicitate dependentă de complement mediată de anticorpi. De asemenea, se presupune că celulele efectoare pot provoca o anumită distrugere a țintelor în funcție de tipul de LMC.

În cele din urmă, întregul set de probe din testul de limfocitotoxicitate mediată celular dependent de anticorpi este după cum urmează:

Ținte + efectori + ser de testare (probă experimentală);

Ținte (proba de control, adică eliberarea spontană de 51 Cr);

Ținte + efectori (test de control pentru activitatea efectorului);

Ținte + ser de testare (control ser).

Limfocitele au fost izolate în mod obișnuit și resuspendate în RPMI-1640 + 10% ser fetal bovin; tratarea suspensiei cu fier carbonil pentru îndepărtarea monocitelor; se adaugă clorură de amoniu sau H2O pentru a liza celulele roșii rămase;

Se adaugă 51 Cr sub formă de soluţie de Na2Cr04 100 - 200 uCi ml (3,7x106 - 7,4x106 BC/ml) la suspensia de celule ţintă şi se incubează timp de 40 - 60 minute;

Celulele sunt spălate de trei ori în RPMI + 0,1% HSA, resuspendate în același mediu și ajustate la 2x108 în 1 ml; 50 µl dintr-o suspensie de celule marcate sunt plasați într-o eprubetă și apoi activitatea izotopică este calculată pe un contor γ pentru a identifica „asimilarea” izotopică completă; restul se toarnă în godeurile plăcii, 50 pl de suspensie (1x105 celule per godeu);

Suspensia de celule efectoare este adusă la 2x107 celule în 1 ml şi c. fiecare godeu este umplut cu 50 pl de suspensie (sau 100 pl), raportul dintre efectori la ţinte este 10:1 (sau 20:1);

Incubarea continuă timp de 4 ore într-o atmosferă de termostat umedă cu 5% CO 2 (durata de incubație poate fi prelungită până la 8 ore);

Se prepară mai multe diluții ale serului de testat în eprubete (1:25; 1:100) și se adaugă până la 50 µl din fiecare diluție în godeuri: și ser nediluat; configurația finală a testului arată așa cum se arată în tabel. 23.

Tabelul 23

Stadializarea ADCC. Toate opțiunile de probă, µl

* (În loc de serul de testare, este instilat un grup de seruri AB.)

** (În locul serului de testare, se instilează un ser HLA monospecific îndreptat împotriva țintelor (nu a efectorilor).)

Incubarea panourilor continuă timp de 4 ore într-o atmosferă umidificată cu 4% CO2; durata incubației poate fi prelungită până la 8 ore;

După incubare, jumătate din volumul din fiecare godeu (100 μl) este aspirat cu atenție cu o pipetă automată și plasat în tuburi de numărare a impulsurilor de 51 Cr; activitatea se numără pe un contor γ;

Calculele sunt după cum urmează:

% eliberare de 51 Cr = 2 × A op - activitate de fundal/B - activitate de fundal × 100;

% citotoxicitate = A op - A sp /100 - A sp × 100, unde A op este procentul de eliberare de 51 Cr în probele experimentale; A sp - % eliberare spontană; B - asimilarea completă a izotopului.

Cum rezultat pozitiv Se consideră citotoxicitate de 5% sau mai mare după 4 ore de incubare.

SKL - cultura mixta limfocite - MLC - cultura mixta de limfocite. Acest test constă dintr-un set de culturi care determină măsura în care soții își recunosc reciproc antigenele de histocompatibilitate.

Limfocitul - celula centrala sistem imunitar. Sistemul limfocitar poate fi comparat cu o stare, în care există superiori și subordonați, iar fiecare angajat îndeplinește o funcție de specialitate.

La CIR te poti testa pentru SCL

Dacă un limfocit întâlnește obiecte străine organismului (bacterii, viruși, celule străine etc.), atunci se dezvoltă un răspuns imun. Dacă despre care vorbim despre țesuturi sau celule străine, gradul răspunsului imun va depinde de similitudinea configurației antigenelor de histocompatibilitate (HLA, antigene leucocite umane, sau MHC, complex major de histocompatibilitate, (acestea sunt sinonime) antigene).

Răspunsul imun se exprimă prin apariția clonelor (descendenții unei celule) de celule strict specializate pe factori străini specifici). Cu alte cuvinte, dacă celulele imune încep să reacționeze la ceva, ele încep să se dividă. Și diviziunea celulară poate fi evaluată prin viteza de sinteză a ADN-ului. Cu cât se sintetizează mai mult ADN, cu atât mai multe celule se divid și cu atât se dezvoltă răspunsul imun mai activ. Gradul de sinteză a ADN-ului poate fi determinat prin includerea în cultura celulară a nucleotidei radioactive timidine - „blocul de construcție” al ADN-ului. Evaluarea unei culturi mixte de limfocite se bazează pe acest principiu.

Din punct de vedere tehnic, acest lucru se face după cum urmează. Sângele este luat de la soți, din care sunt izolate limfocitele. Aceste limfocite sunt plasate într-un mediu favorabil divizării mediu nutritiv. Dacă amesteci limfocite oameni diferiti, vor începe să reacționeze unul la altul. Cu toate acestea, dacă înregistrați pur și simplu activitatea unei culturi mixte de diferiți oameni, este imposibil să înțelegeți cum reacționează o anumită persoană, deoarece celulele tuturor participanților la cultura mixtă „intră în luptă”.

Pentru a evalua reacția individuală a fiecărui participant la cultură, celulele unuia dintre soți sunt expuse unui efect care face imposibilă diviziunea celulară. Cu toate acestea, proprietățile antigenice ale limfocitelor sunt păstrate. Într-o astfel de cultură, toată activitatea celulară va fi asociată numai cu celulele vii ale celuilalt soț. Prin compararea diferitelor combinații de culturi de celule vii și inactivate, se poate obține Informații importante despre gradul de asemănare imunologică a soților.

De fapt, în această analiză foarte intensivă în muncă, sunt testate 12 culturi diferite, iar reacția este evaluată în a 3-a și a 5-a zi de cultură.

Cele 24 de cifre rezultate oferă informații importante despre modul în care o femeie va reacționa la antigenele de histocompatibilitate ale soțului ei în timpul sarcinii.

Cert este că menținerea sarcinii este proces activ. La fel ca în cazul reacției de respingere, recunoașterea imunologică adecvată a intrusului este importantă pentru dezvoltarea toleranței imunologice în prima etapă. Dacă această recunoaștere este lentă sau dacă apare prea târziu, embrionul este atacat de celulele natural killer ale mamei și moare.

Utilizarea SCL, care a început în centrul nostru în primăvara anului 2000, a îmbunătățit semnificativ calitatea tratamentului pentru pacienții cu infertilitate, avort spontan și încercări nereușite FIV.

MCL (cultură mixtă de limfocite) este un test care vă permite să determinați gradul în care sistemele imunitare ale soților recunosc reciproc antigenele de histocompatibilitate ale celuilalt.

Un tip de celule sanguine, limfocitele, stau la baza sistemului imunitar. În același timp, există o anumită ierarhie între celulele leucocitelor, există celule principale, există celule subordonate, fiecare dintre ele își îndeplinește propria funcție.

Atunci când un limfocit întâlnește obiecte străine organismului (celule ale altui organism, viruși, bacterii etc.), se dezvoltă un răspuns imunitar. Puterea răspunsului imun va depinde de asemănarea structurii antigenelor de histocompatibilitate ( HLA- antigene).

Răspunsul imun se exprimă în apariția clonelor descendente ale unei celule, iar acestea sunt celule strict specializate pe factori străini specifici la care este necesar un răspuns. Cu alte cuvinte, reacția celule ale sistemului imunitar ceva se exprimă prin faptul că încep să se împartă. Diviziunea celulară poate fi evaluată prin viteza de sinteză a ADN-ului. Cu cât se sintetizează mai mult ADN, cu atât celulele se divid mai intens, cu atât sunt mai multe, cu atât este mai activă dezvoltarea răspunsului imun. Intensitatea formării ADN-ului poate fi detectată prin includerea unei nucleotide radioactive a unuia dintre „blocurile de bază” ale ADN-ului, timidina, în cultura celulară. Exact așa se evaluează o cultură mixtă de limfocite.

Tehnic se poate face așa. Se prelevează sânge de la ambii soți, din care se izolează limfocitele, care apoi sunt plasate într-un mediu nutritiv favorabil divizării. Când limfocitele de la diferiți oameni se amestecă, acestea încep să reacționeze una la alta. Cu toate acestea, dacă pur și simplu înregistrați activitatea de formare a ADN-ului într-o cultură mixtă de diferiți oameni, este imposibil să înțelegeți cum reacționează o anumită persoană la o altă persoană anume, deoarece celulele tuturor acelor oameni ale căror limfocite sunt plasate în mediu încep să "luptă".

Pentru a evalua răspunsul individual, celulele unuia dintre soți sunt expuse unei influențe care le face imposibilă divizarea. Cu toate acestea, proprietățile antigenice ale limfocitelor sunt păstrate. În acest caz, toată activitatea celulară din cultură va fi asociată numai cu celulele vii ale celuilalt soț. Prin compararea diferitelor combinații de culturi de celule vii și incapabile, se poate obține informatie necesara despre gradul de asemănare imunologică a soților.

Analiza implică studiul a 12 culturi diferite, evaluarea reacției în care se efectuează în zilele a 3-a și a 5-a.

Rezultatul sunt 24 de cifre care oferă informații despre reacția unei anumite femei la antigenele de histocompatibilitate ai soțului ei în timpul implantării și în timpul sarcinii.

Nu numai respingerea imunității, ci și apărare imună sarcina este un proces activ. Pentru dezvoltarea toleranței imunologice în prima etapă, este importantă recunoașterea imunologică corectă a ADN-ului soțului conținut în embrion. Dacă această recunoaștere este lentă, lentă și are loc prea târziu, atunci embrionul este atacat de celulele ucigașe naturale ale mamei și moare.

Analiza SCL permite nu numai evaluarea stării de recunoaștere imunologică a limfocitelor soților unul de celălalt, ci și monitorizarea procesului de tratament utilizând imunizarea cu limfocite, alegerea metodei și dozei de imunizare și evaluarea perspectivelor de utilizare a uneia sau alteia metode. de corectare a situaţiei. Prin urmare, după imunizare, testul pentru SCL trebuie repetat.

Primele raportări ale unei culturi mixte de limfocite (MLC) au apărut în 1964 în legătură cu fenomenul de transformare blastica. Studiul SCL se bazează pe același principiu ca și reacția de transformare blastică a limfocitelor (vezi secțiunea „Reacția de transformare blastică a limfocitelor”). Puterea reacției depinde de gradul de diferență dintre antigenele de histocompatibilitate. Antigenele HLA-A, -B-B- și -C de pe suprafața limfocitelor corespund antigenelor HLA-D, care pot fi detectate numai folosind SCL. În același timp, antigenele DR (legate de D) pot fi detectate folosind antiseruri (vezi secțiunea „Citotoxicitate dependentă de complement. Tiparea HLA-DR”). Ipoteza că serurile anti-DR permit tipizarea fină a întregului locus D pare mai puțin probabilă în prezent decât ipoteza că există doi loci distincti.

Cromozomul 6 uman cu complexul HLA și loci strâns distanțați (GLO; PGM 3).

În prezent, a fost stabilită cu precizie existența a 12 antigene DW și a 10 antigene OR. LD - 2 = locus D minor, a cărui existență poate fi presupusă pe baza analizei de recombinare

Chiar și pentru antigenele Ia umane, se discută în prezent un model cu trei locusuri, așa că termenul „DR” nu ar trebui să mai fie folosit ca sinonim pentru „moleculele de clasa II umană”.

Pentru a evalua reactivitatea (a unui individ) la un stimul alogen, se prepară un așa-numit SCL unidirecțional, în care celulele inactivate sunt utilizate pentru stimulare. Trebuie remarcat faptul că chiar și celulele stimulatoare inactivate (a se vedea mai jos) au capacitatea de a secreta factori mitogeni, precum și de a îmbunătăți într-o oarecare măsură sinteza ADN și biosinteza imunoglobulinei. Aceasta poate deveni o sursă ascunsă de erori. Interacțiunile care apar în timpul reacției alogene au fost bine studiate în modelul de șoarece.

Mecanismul de inducere a unei reacții alogene pentru a obține efectul limfocitolizei dependente de celule (modificare descrisă în lucrarea corespunzătoare)

MF - macrofag; TlNDH - inductor de celule helper; Tn - T-ajutor; рТ с - precursor al unei celule citotoxice; T s - celula citotoxică; triunghi - DR-antigen; dreptunghi - antigene HLA-A/B

Cu toate acestea, rămâne încă neclar ce tipuri de celule sunt implicate în răspunsul proliferativ. Studiul reacției primare a limfocitelor la celulele alogene este utilizat în următoarele cazuri:

Testarea reactivității SCL ca criteriu de evaluare a imunității celulare;

tastarea HLA-D;

Clarificarea relației dintre antigenele HLA-D și predispoziția la anumite boli;

Selectarea unei perechi donator-beneficiar.