Ajutor la Tele2, tarife, intrebari

Primele raportări ale culturii mixte de limfocite (MLC) au apărut în 1964 în legătură cu fenomenul de blastotransformare. Studiul SCL se bazează pe același principiu ca și reacția de transformare blastică a limfocitelor (vezi secțiunea „Reacția de transformare blastică a limfocitelor”). Puterea reacției depinde de gradul de diferență dintre antigenele de histocompatibilitate. Antigenele HLA-A, -B-B- și -C de pe suprafața limfocitelor corespund antigenelor HLA-D, care pot fi detectate numai folosind SCL. În același timp, antigenele DR (în legătură cu D) pot fi detectate folosind antiseruri (vezi secțiunea „Citotoxicitate dependentă de complement. Tipare HLA-DR.”). Ipoteza că serurile anti-DR permit tipizarea fină a întregului locus D pare mai puțin probabilă în prezent decât ipoteza că există doi loci distincti.

Cromozomul 6 uman cu complex HLA și loci strâns distanțați (GLO; PGM 3).

În prezent, existența a 12 antigene DW și a 10 antigene OR este bine stabilită. LD - 2 = D-locus minor, a cărui existență poate fi presupusă pe baza analizei recombinării

Chiar și pentru antigenele umane Ia, se discută în prezent un model cu trei locusuri, așa că termenul „DR” nu ar trebui să mai fie folosit ca sinonim pentru „molecule umane clasa II”.

Pentru a evalua reactivitatea (a unui individ) în raport cu un stimul alogen, se prepară un așa-numit SCR unilateral, în care celulele inactivate sunt utilizate pentru stimulare. Trebuie remarcat faptul că chiar și celulele stimulatoare inactivate (vezi mai jos) au capacitatea de a secreta factori mitogeni, precum și de a îmbunătăți într-o oarecare măsură sinteza ADN și biosinteza imunoglobulinei. Aceasta poate deveni o sursă ascunsă de erori. Interacțiunile care apar în timpul reacției alogene au fost bine studiate într-un model de șoarece.

Mecanismul de inducere a reacției alogene pentru a obține efectul limfocitolizei dependente de celule (modificarea este descrisă în lucrarea corespunzătoare)

MF - macrofag; T lNDH-inductor al celulelor helper; T n - T-ajutor; pT c - precursor al celulei citotoxice; T c - celula citotoxică; triunghi - antigen DR; dreptunghi - antigene HLA-A/B

Cu toate acestea, până acum rămâne neclar care tipuri de celule sunt implicate în răspunsul proliferativ. Studiul reacției primare a limfocitelor la celulele alogene este utilizat în următoarele cazuri:

Verificarea reactivității SCL ca criteriu de evaluare a imunității celulare;

tastarea HLA-D;

Elucidarea interdependenței dintre antigenele HLA-D și predispoziția la anumite boli;

Alegerea unei perechi donator-beneficiar.

2.2. Metode de interacțiuni celulare

Aproape toate metodele de interacțiuni celulare utilizate în imunogenetica clinică se bazează pe fenomenul de formare a blastului într-o cultură mixtă de limfocite, descoperit de cercetătoarea canadiană Barbara Bain. Reacția culturii mixte de limfocite (MLC) a permis un studiu fin diferențiat al complexului HLA și, în special, a uneia dintre subunitățile sale, locusul HLA-D. O serie de alte metode de interacțiuni celulare - limfoliza mediată celular (Cell-mediated Lympholysis - CML), testul de amorsare a limfocitelor (Primed Lymphocyte Typing) - se bazează pe metoda MLC sau o conține ca parte integrantă.

2.2.1. Cultură mixtă de limfocite (MCL)

Principiul metodei este prezentat în fig. 10, care arată că două populații de limfocite genetic diferite interacționează între ele în cultura in vitro. Una dintre populații este tratată cu mitomicină C sau iradiată, în urma căreia își pierde capacitatea de formare a blastului și de încorporare a timidinei (3 HT), însă, fără a pierde proprietățile antigenice, își păstrează capacitatea de stimulare (stimulente; S- populație).

Celulele care răspund la stimulare (respondenții, populația R) se transformă în blasturi după câteva zile și includ timidina adăugată în cultură. Intensitatea reacției este măsurată folosind o etichetă de radiație prin încorporarea de 3H-timidină.

Sunt cunoscute mai multe variante ale reacției unei culturi mixte de limfocite, dintre care două sunt propuse aici: una tradițională și una microvariantă implementată în plăci Cook (Fig. 11).

Orez. 11. Echipamente pentru microvariante MLC și CML. 1 - tableta fund rotund e 96 gauri; 2-pipeta automata ("Pipetman") cu program pentru diferite volume; 3 - pipeta automata ("Sigma") pentru un anumit volum; 4 - vârf de pipetă de unică folosință; 5 - cutie laminara

Versiunea tradițională a MLC (modificată de F. S. Baranova):

Limfocitele sunt izolate pe un gradient de ficoll-urografină așa cum este descris mai sus. Prima spălare este efectuată în PBS (NaCI - 8,0 g, Na2HP04 - 1,15 g, KH2PO4 - 0,2 g, KC1 - 0,2 g per 1 litru de H20); următoarele două sunt produse în mediu 199 cu ser AB 5% (grup de 15 donatori);

Celulele care răspund sunt resuspendate în mediu 199 cu ser AB 10% şi concentraţia celulară este ajustată la 0,6 x 106 în 1 ml;

Celulele stimulatoare izolate în același mod la o concentrație de 5 - 106 per 1 ml sunt tratate cu mitomicină C (60 y/ml) de la Serva și incubate timp de 40 minute la 37°C într-o baie de apă. După incubare, celulele sunt spălate de 3 ori cu mediu 199 cu 5% ser AB, resuspendate în mediu 199 cu 10% ser AB, aducând concentrația la 0,6 x 106 în 1 ml;

0,5 ml de celule care răspund și 0,5 ml de celule stimulatoare sunt amestecate într-un tub de centrifugă, se adaugă 0,04 ml de 10 ml de soluție Hepes (Serva) și se incubează timp de 144 de ore; experiența este pusă în trei paralele (triplet);

Cu 24 de ore înainte de sfârșitul incubării, se adaugă în tuburi 3H-timidină 1μCi (3,7x10 4 BK), per probă de activitate specifică 5mСi/mmol (18,5x10 7 BK/mmol) și se continuă incubarea;

La sfârșitul incubării, celulele sunt transferate în filtre millipore (0,6 - 0,9 microni), spălate ser fiziologic(37°C) și soluție de acid tricloracetic 5% răcită (4°C). Filtrele sunt uscate și plasate în flacoane cu 5 ml de lichid de scintilație (5 g de PPO și 0,5 g de POPOP la 1 litru de toluen)*. Activitatea de încorporare a 3H-timidinei este măsurată pe un contor p; rezultatul este exprimat în incluziuni absolute ale unei etichete radioactive în 1 min sau în indicele de stimulare (SI) conform formulei:

* (PPO - 2,5-fenol-oxazol; POPOP - (1,4-di-2-15-fenol oxazolitbenzen).)

Valoarea medie a CPM în trei prototipuri

SI = CPM medie a trei martori/Martori sunt culturi spontane de celule care răspund.

Varianta MLC micro în tablete Cook. La cel de-al 8-lea Workshop au fost elaborate cerințe care standardizează microvarianta MLC, în conformitate cu care este prezentată mai jos:

Limfocitele sunt izolate într-un gradient isopac-ficoll și resuspendate în mediu RPMJ-1640*, aducând concentrația la 5x105 în 1 ml;

* (Mediul 199 amestecat cu ser uman din grupa AB (ser 5% luat de la mai multe persoane) poate fi utilizat.)

Celulele stimulatoare sunt tratate cu mitomicina C sau antrenament;

5x10 4 reponderi și același număr de stimulenți sunt plasați folosind o micropipetă de tip Pipetman în fiecare godeu al unei microplăci Cook cu fund rotund;

Plăcile sunt incubate într-un termostat cu alimentare automată de 5% CO 2 timp de 120 h; apoi se adaugă lμmCi3H-timidină în fiecare godeu la o activitate specifică timidinei de 6 Ci/mmol; toate manipulările sunt efectuate cu o pipetă Pipetman;

La 16 ore după adăugarea timidinei, culturile din fiecare godeu sunt transferate în filtre millipore cu o pipetă automată și spălate cu ser fiziologic și apoi cu acid tricloracetic 5%; este convenabil să folosiți „recoltatoare” speciale pentru a transfera cultura în filtre millipore;

Activitatea de încorporare a timidinei este determinată așa cum este descris mai sus.

2.2.2. Limfoliza mediată celular (LMC)

LMC a fost utilizată în studiile imunogenetice relativ recent (din 1972), dar în În ultima vreme devine o tehnică din ce în ce mai populară, permițând un studiu detaliat al rolului verigii eferente a imunității la transplant și câștigând recunoașterea ca metodă informativă de monitorizare imunologică. Principiul metodei este prezentat în fig. 12. Metoda se bazează pe tehnica propusă de J. Lightbody (1971), care este rezumată după cum urmează.

1. LMC începe cu un test HLC convențional în care celulele care răspund recunosc „stimulatori”, sensibilizează celulele care răspund și formează ucigași sensibilizați.

2. A doua fază, în care ucigașii sensibilizați sunt amestecați cu celule țintă marcate cu 51 Cr, constă în distrugerea acestora din urmă de către celulele ucigașe efectoare; celulele țintă pot avea același genotip ca „stimulatorii” din prima fază a MLC, sau pot fi celule ale celui de „al treilea” partener, dotate cu determinanți antigenici în comun cu „stimulatorii” sau fără aceștia.

3. Cantitatea de crom radioactiv eliberată din celulele țintă distruse și eliberată în mediul de cultură servește ca măsură a intensității efectului ucigaș.

Orez. 12. Principiul limfolizei mediate celular (LMC). I row - sensibilizarea celulelor care răspund, formarea de ucigași; Rândul II - interacțiunea ucigașilor cu ținta; rândul III - distrugerea celulei țintă; ieșire din mediul de cultură 51 Cr

Trei variante de LMC sunt descrise aici: varianta traditionala modificat de L.P. Alekseev (1979), microvariantă în tabletele Cook, CML direct (Direct-CML -D-CML.

Opțiune tradițională[Alekseev L.P., 1979].

Metoda este împărțită în mai multe etape.

Primesc asasini:

Limfocitele periferice ale ambelor populații (celule R și celule S) sunt izolate în mod obișnuit, spălate în gradient de densitate de trei ori în mediu 199 cu ser AB 5% (10 min, 150 g);

1x106 celule R (0,8 ml) sunt amestecate în tuburi de centrifugă cu 2x106 celule S (0,2 ml) tratate cu mitomicină C şi incubate timp de 144 ore la 37°C;

Celulele sunt centrifugate la 150 g timp de 10 min, iar peletul este resuspendat în mediu 199 cu adăugare de ser de viţel 20% (mediu 199 + adică), aducând concentraţia la 1x106 în 1 ml;

Unul dintre eșantioane este lăsat să studieze nivelul MLC, restul sunt folosite ca ucigași gata făcut.

Primirea țintelor:

Limfocitele izolate convenţional sunt resuspendate în mediu 199 cu ser AB 20% şi incubate cu fitohemaglutinină (0,003 mg/ml Wellcome) timp de 72 ore la 37°C; concentrația celulară 1x106 în 1 ml;

Celulele sunt centrifugate timp de 10 min la 150 g, peletul este resuspendat în mediu 199 cu 5% ser AB, iar concentrația celulară este ajustată la 2x104 în 1 ml;

51 Cr 100 uCi/ml (3,7x106 Bq/ml) este adăugat la suspensie şi incubat timp de 40 min la 37°C;

Celulele sunt spălate de trei ori în mediu 199 suplimentat cu ser AB 5% (150 g, 10 min) iar peletul este resuspendat în mediu 199 suplimentat cu ser AB 5%. aducând concentraţia la 2x10 4 în 1 ml.

Declarație de reacții:

5x105 killers (0,5 ml) sunt amestecate cu 1x104 ţinte (0,5 ml), incubate timp de 4 ore (37°C) şi centrifugate la 150 g timp de 10 min;

Supernatantul este aspirat și impulsul cauzat de 51 Cr este numărat pe un contor ß; numărarea se efectuează în 0,5 ml de supernatant;

Nivelul de citoliză se calculează prin următoarea formulă:

ekeper. ieșire 51 Cr - ieșire spontană 51 Cr/max, ieșire 51 Cr - ieșire spontană 41 Cr × 100.

Eliberarea spontană de crom este măsurată pe ținte incubate timp de 4 ore (37°C) fără celule ucigașe; randament maxim de crom - pe ținte complet distruse prin îngheț-dezgheț; Toate testele sunt efectuate în tripleți.

Microvarianta LMC în tablete [după Mawas S., 1976]:

Faza de producere a ucigașului este efectuată ca MLC în plăci cu fund rotund, dar celulele R și S sunt amestecate în cantități egale la 2x105 PA fiecare godeu și incubate la 37°C;

După 5 zile, celulele sunt colectate cu o pipetă Pasteur într-o eprubetă, numărul de celule vii este numărat cu albastru de tripan, iar concentrația este ajustată la 10x106 în 1 ml;

Celulele țintă sunt cultivate cu PHA timp de 3 zile;

În ziua reacţiei, celulele ţintă sunt spălate (300 g) şi resuspendate în mediul de cultură, distribuindu-se 1 ml în eprubete şi aducând la 1x106 în 1 ml;

200 uCi51Cr (7,4x106 BK) sunt adăugate în fiecare tub cu celule țintă și incubate timp de 1 oră la 37°C; spălați celulele de 3 ori; sedimentul este resuspendat și ajustat la o concentrație de 1x10 în 1 ml (viu);

Testul este implementat în microplăci cu fund rotund; pentru aceasta, în fiecare godeu sunt distribuite 0,7 - 1x106 celule killer (0,1 ml) şi 1x104 celule ţintă (0,1 ml); volumul total al suspensiei din fiecare godeu este de 0,2 ml, se adaugă 0,05 ml de mediu în fiecare godeu și se incubează (37°C) timp de 4 ore;

Plăcile sunt centrifugate la 800 g într-o centrifugă Beckman timp de 10 minute; supernatantul din fiecare godeu este transferat în eprubete și numărat pe un contor y;

Faza de producție ucigașă (MLC) este efectuată pe mediu RPMJ-1640 suplimentat cu 20% plasmă umană; pentru faza de ucidere, mediul MEM este utilizat cu adăugarea de 20% plasmă umană, preîncălzită.

CML direct (D-CML). LMC directă este o tehnică dezvoltată special în scopuri clinice care și-a găsit utilizare în monitorizarea imunologică. Schema acestei reacții este prezentată în fig. 13.

Principala diferență față de LMC tradițională este că stadiul formării ucigașului (faza de sensibilizare) nu are loc in vitro, ci in vivo, adică în corpul uman sensibilizat prin transplantul unui organ sau țesut alogen. Datorită impactului țesutului alogen, limfocitele primitorului sunt sensibilizate la antigenele tisulare ale donatorului și nu necesită tratament special in vitro, durata testului se reduce semnificativ în timp, deoarece doar țintele trebuie pregătite mai întâi.

Țintele sunt limfocitele derivate din sânge periferic sau, mai frecvent, din splina unui donator (vezi 2.1.2) și congelate prin oricare dintre metodele descrise mai sus (vezi 2.1.3).

2.2.3. Citotoxicitate mediată de celule dependente de anticorpi (ADCC)

Acest tip reacții celulare similar ca mecanism de acțiune cu LMC descris mai sus. Principiul reacției este prezentat în fig. 14. Componentele reacției sunt celulele țintă (celule donatoare sau limfocite alogene), serul (alogene sau primitoare), care conțin probabil anticorpi direcționați către determinanții celulei țintă și celule efectoare (limfocite primitoare sau limfocite alogene).

celule efectoare în acest tip interacțiunile sunt așa-numitele celule K situate în sângele periferic. Spre deosebire de celulele ucigașe din LMC, acestea efectuează un efect citotoxic fără sensibilizare prealabilă, cu toate acestea, manifestarea acțiune citotoxică Celulele K sunt posibile numai prin medierea anticorpilor direcționați către determinanții celulelor țintă. Liza specifică este măsurată prin eliberarea de 51 Cr dacă serul de testat conține anticorpi la determinanții țintă.

Determinanții țintă în ADCC pot fi specificități ale aproape tuturor loci HLA, inclusiv HLA-D, HLA-DR, precum și determinanți din afara sistemului HLA.

Această reacție complexă este utilizată pe scară largă în monitorizarea imunologică pentru detectarea anticorpilor celulelor B. În acest sens, au fost propuse mai multe modificări, care implică îmbogățirea suspensiei de celule țintă cu limfocite B, adsorbția serurilor pe trombocite etc.

În plus, sunt luate în considerare o serie de alte caracteristici ale răspunsului din acest sistem. Serul de testat trebuie decomplementat, ca in caz contrar reacția poate avea loc ca o citotoxicitate dependentă de complement mediată de anticorpi. De asemenea, se presupune că celulele efectoare pot provoca o anumită distrugere a țintelor de tipul CML.

În cele din urmă, întregul set de probe din testul de limfocitotoxicitate mediată celular dependentă de anticorpi este după cum urmează:

Ținte + efectori + ser testat (probă experimentală);

Ținte (proba de control, adică eliberarea spontană de 51 Cr);

Ținte + efectori (test de control pentru activitatea efectorului);

Ținte + ser de testare (control ser).

Limfocitele sunt izolate în modul obișnuit și resuspendate în RPMI-1640 + 10% ser fetal bovin; tratarea suspensiei cu fier carbonil pentru îndepărtarea monocitelor; se adaugă clorură de amoniu sau H20 pentru a liza eritrocitele rămase;

Se adaugă 51 Cr la suspensia de celule țintă sub formă de soluție de Na2CrO4 100 - 200 uCi ml (3,7x106 - 7,4x106 BK/ml) și se incubează timp de 40 - 60 minute;

Celulele sunt spălate de trei ori în RPMI + 0,1% HSA, resuspendate în același mediu și ajustate la 2x108 în 1 ml; 50 pl de suspensie celulară marcată sunt plasați într-o eprubetă și activitatea izotopică este apoi numărată pe un contor y pentru a detecta "captarea" izotopică completă; restul este picurat în godeurile tabletei la 50 pl de suspensie (1x105 celule per godeu);

Suspensia celulelor-efectori este adusă la 2x107 celule în 1 ml și în. se pun 50 ui de suspensie (sau 100 ui) în fiecare godeu, raportul efector la țintă 10:1 (sau 20:1);

Incubarea durează 4 ore într-un incubator cu atmosferă umedă cu 5% CO 2 (durata incubației poate fi prelungită până la 8 ore);

Se prepară în eprubete mai multe diluții ale serului de testat (1:25; 1:100) și se adaugă în godeuri până la 50 µl din fiecare diluție: și ser nediluat; Setarea finală a testului arată așa cum se arată în tabel. 23.

Tabelul 23

Setarea ADCC. Toate opțiunile de probă, µl

* (În loc de serul de testare, este instilat un pool de seruri AV.)

** (În locul serului de testare, se instilează un ser HLA monospecific îndreptat împotriva țintelor (nu a efectorilor).)

Panourile sunt incubate timp de 4 ore într-o atmosferă umedă cu 4% CO2; durata incubației poate fi prelungită până la 8 ore;

După incubare, jumătate din volumul din fiecare godeu (100 μl) se aspira cu grijă cu o pipetă automată și se pune în tuburi pentru numărarea impulsurilor de 51 Cr; activitatea se numără pe un contor γ;

Calculele sunt după cum urmează:

% eliberare de 51 Cr = 2 × A op - activitate de fundal/B - activitate de fundal × 100;

% citotoxicitate = A op - A sp /100 - A sp × 100, unde A op - % eliberare de 51 Cr în probe experimentale; Si cn -% eliberare spontana; B - asimilarea completă a izotopului.

Cum rezultat pozitiv Se consideră citotoxicitate de 5% sau mai mare după 4 ore de incubare.

SKL ( cultura mixta limfocite) este un test care vă permite să determinați gradul de recunoaștere de către sistemul imunitar al soților a antigenelor de compatibilitate tisulară între ele.

Unul dintre tipurile de celule sanguine, limfocitele - stau la baza sistem imunitar. În același timp, există o anumită ierarhie între celulele leucocitelor, există celule principale, există celule subordonate, fiecare dintre ele își îndeplinește propria funcție.

Când un limfocit întâlnește obiecte străine organismului (celule ale altui organism, viruși, bacterii etc.), se dezvoltă un răspuns imunitar. Gradul de putere al răspunsului imun va depinde de asemănarea structurii antigenelor de compatibilitate tisulară ( HLA- antigene).

Răspunsul imun este exprimat în apariția clonelor-descendenți ai unei celule, în timp ce acestea sunt celule strict specializate în factori străini specifici care necesită un răspuns. Cu alte cuvinte, reacția celule ale sistemului imunitar ceva se exprimă prin faptul că încep să împartă. Diviziunea celulară poate fi măsurată prin viteza de sinteză a ADN-ului. Cu cât se sintetizează mai mult ADN, cu atât celulele se divid mai intens, cu atât mai multe dintre ele, cu atât răspunsul imunitar se dezvoltă mai activ. Intensitatea formării ADN-ului poate fi detectată prin includerea unei nucleotide radioactive a uneia dintre „cărămizile” ADN-ului, timidina, în cultura celulară. Așa se evaluează o cultură mixtă de limfocite.

Tehnic se poate face așa. Se prelevează sânge de la ambii soți, din care se izolează limfocitele, care apoi sunt așezate într-un loc favorabil divizării. mediu nutritiv. Limfocite mixte oameni diferitiîncep să reacţioneze unul la altul. Cu toate acestea, dacă pur și simplu înregistrați activitatea de formare a ADN-ului într-o cultură mixtă de oameni diferiți, este imposibil să înțelegeți cum reacționează o anumită persoană la o altă persoană anume, deoarece celulele tuturor acelor oameni ale căror limfocite sunt plasate în mediu încep să "luptă".

Pentru aprecierea răspunsului individual, celulele unuia dintre soți sunt supuse unei influențe care le face imposibilă diviziunea. Cu toate acestea, proprietățile antigenice ale limfocitelor sunt păstrate. În acest caz, toată activitatea celulară din cultură va fi asociată numai cu celulele vii ale celuilalt soț. Comparând diferite combinații de culturi de celule vii și incapacitate, se poate obține informatie necesara despre gradul de asemănare imunologică a soților.

Analiza presupune studiul a 12 culturi diferite, evaluarea reacției în care se efectuează în zilele a 3-a și a 5-a.

Ca rezultat, sunt obținute 24 de cifre, care oferă informații despre reacția unei anumite femei la antigenele de compatibilitate tisulară ai soțului ei în timpul implantării și în timpul sarcinii.

Nu numai respingerea imunității, ci și apărare imunitară sarcina - proces activ. Pentru dezvoltarea toleranței imunologice în prima etapă este importantă recunoașterea imunologică corectă a ADN-ului soțului conținut în embrion. Dacă această recunoaștere este lentă, lentă, prea târziu, atunci fătul este atacat de celulele natural killer ale mamei și moare.

Analiza SCL permite nu numai evaluarea stării de recunoaștere imunologică a limfocitelor soților unul de celălalt, ci și controlul procesului de tratament utilizând imunizarea cu limfocite, alegerea metodei și dozei de imunizare și evaluarea perspectivelor de aplicare a uneia sau alteia metode. pentru a corecta situația. Prin urmare, după imunizare, testul pentru SCL trebuie repetat.

A doua parte a emisiunii din 2 iulie.
Genele HLA și imunologia reproducerii. Lambou de piele. Imunizarea cu limfocite (LIT). SKL - cultura mixta de limfocite. Factorul imunologic în avortul spontan.

Genele HLA și imunologia reproductivă
Deci, care este cel mai divers sistem din organism și ce oferă protecție împotriva infecțiilor? Acesta este un sistem de gene ale imunității - genele HLA. Toate aceste gene sunt situate pe cromozomul 6 și determină individualitatea răspunsului imun, sensibilitatea la anumiți stimuli.
Aici se rezumă imunologia reproducerii despre ceea ce face Centrul nostru. Dacă te uiți pe site-ul nostru, poți vedea că există un așa-numit aloimună factor de infertilitate și avort spontan. Este asociat cu un antigen de compatibilitate tisulară, cu asemănare sau nesimilaritate în antigenele de compatibilitate tisulară. Riscuri în procesul reproductiv de profesorul-imunolog Valentin Ivanovich Gavallo, care este fondatorul imunologiei reproductive în țara noastră.
Imunologia reproducerii nu sa dezvoltat imediat ca zonă separată. Imunologii au fost întotdeauna interesați de multe alte lucruri, iar imunologia reproducerii a fost cea mai puțin interesantă. Dar totuși, în procesul de dezvoltare în acest domeniu al medicinei, imunologia reproducerii s-a format într-o direcție separată. La un moment dat, s-a constatat că există anumite substanțe care se numesc antigeni de compatibilitate tisulară sau complex major de histocompatibilitate, sau sistemul antigen leucocitar uman. Dacă aceste componente se potrivesc la oameni, atunci organele pot fi transplantate și vor prinde rădăcini într-un nou corp.

lambou de piele
Se dovedește că, dacă în timpul sarcinii există o diferență între făt și mamă în ceea ce privește antigenele de compatibilitate tisulară, atunci în corpul mamei apare un răspuns la acești antigeni. Apoi în sângele mamei (și în general, în sângele femeilor care naște) se poate găsi o cantitate mare anticorpi împotriva antigenelor de compatibilitate tisulară pe care fătul i-a moștenit de la tată. Și fiind în utero, fătul a provocat un răspuns imun al corpului mamei.
Cercetătorii au sugerat că efectul acestor anticorpi asupra fătului este foarte dăunător, deoarece în unele cazuri l-au deteriorat și l-au ucis. Astfel de cazuri se numesc „avort spontan recurent”.
Pentru a trata aceste cazuri și complicațiile aferente, au găsit următoarea metodă: i s-a luat un lambou de piele de la soț și i s-a pus femeii astfel încât acest lambou să fie imunosorbent anticorpi nocivi formați în timpul sarcinilor anterioare. Atunci fătul a avut ocazia să se dezvolte calm. Acest tratament pentru avort spontan a fost început în America, în Cehoslovacia și mai departe în Europa și a funcționat cu adevărat.
La un moment dat, în Rusia, la Moscova, au decis să se angajeze într-un astfel de tratament. La Institutul de Obstetrică și Ginecologie a fost creat un laborator de imunologie clinică, condus de Lidiya Sergeevna Volkova. Ea l-a abordat pe atunci tânărul Valentin Ivanovici Govallo cu o propunere de cooperare, care a fost prostazhirovanie în Cehoslovacia cu Hasek, un cunoscut imunolog-transplantolog; și a vizitat laboratorul lui Dasse din Paris. Gavallo a început să dezvolte sisteme de tipare a țesuturilor încă la Institutul de Traumatologie și Ortopedie și a efectuat experimente privind transplantul de lambouri de piele la șoareci.
Unul dintre primii pacienti a fost o femeie care a avut anterior 15 avorturi spontane. Sarcina în sine a fost ușoară pentru ea, dar apoi nu a suportat-o. Și a urmat tratamentul descris mai sus cu altoirea lamboului de piele al soțului ei, care a avut și succes. Și după această sarcină, pacienta a avut două sarcini ulterioare reușite. Și în acel moment acest caz pur și simplu i-a șocat pe medicii care au efectuat acest tratament. De atunci, această tehnică a fost utilizată pe scară largă în Rusia și în țările vecine.

Imunizarea cu limfocite
Iar imunologia reproducerii a continuat să evolueze. Curând a devenit clar că lambourile de piele menționate nu erau absorbanți, ci imunostimulante, provocând o reacție de respingere. Și această tehnică este exact aceeași imunizare în timpul căreia se formează anticorpii. Și acești anticorpi nu sunt dăunători, ci protectori. Ele ajută la recunoașterea sarcinii în interiorul cavității uterine în timp și includ un răspuns adecvat la această sarcină, care vizează conservarea și supraviețuirea fătului. Au urmat îmbunătățiri suplimentare ale acestei tehnici. Undeva, la începutul anilor 1970 și 1980, la o conferință la Novosibirsk, V.I. Govallo și-a pus întrebarea despre necesitatea unui transplant de lambou de piele. Mult mai ușor, a spus el, să se ia din sângele soțului limfocite(celule care au concentrație mare antigene de compatibilitate tisulară de clasa a doua) și pur și simplu să le introducă unei femei. Și rezultatul final va fi același. După conferință, profesorul Sidelnikova, șeful secției de avort spontan, l-a contactat și s-a oferit să înceapă imunizarea pacienților folosind metoda propusă de el.
Și au început să efectueze astfel de proceduri, iar pacienții lor au început să aibă o sarcină cu succes. Și apoi s-a întâmplat că Valentin Ivanovici s-a certat cu profesorul Sidelnikova, au început să lucreze separat și au apărut două metode de limfocitoimunizare.
La Centrul de Obstetrică și Ginecologie, procedura a fost efectuată prin injectarea repetată a medicamentului în cantități mici.
Și conform metodei Govallo, suspensia limfatică a fost injectată o dată în cantitate de 200-250 de milioane de celule, iar Centrul nostru a ales această metodă, deși ambele metode funcționează bine.

SKL - cultura mixta de limfocite
Valentin Ivanovici a fost consultantul nostru principal la crearea și deschiderea clinicii, a ajutat la lansarea metodologiei sale alături de noi. Acum tastăm pacienții pentru genele de compatibilitate tisulară clasa 2. Dacă se găsește o asemenea asemănare, imunizăm cu limfocitele soțului, doar că am adăugat și aici cultura mixta de limfocite (MLC).
O să explic de ce. Când încă lucram la catedră și studiam la liceu, undeva la sfârșitul anilor 80, baza noastră clinică era a 7-a maternitate, cea mai apropiată de Kremlin, de pe Vozdvizhenka. După cursuri, m-am dus la Biblioteca Lenin și am căutat toate știrile din publicațiile din tari diferite pace.
Unul dintre ele a fost un interesant „Ghid de obstetrică și ginecologie” în mai multe volume din Germania, unde un volum separat a fost dedicat avortului spontan. Și a existat un întreg capitol în volumul respectiv despre imunologia avortului spontan, care sugera folosirea culturilor mixte de limfocite pentru a identifica cuplurile care aveau cu adevărat nevoie de imunizare și pentru a le tăia pe cei care nu au avut nevoie. Astfel, știam despre această tehnică suplimentară și am început să o folosesc în clinicile noastre, deși mulți nu o folosesc din cauza unei anumite complexități. La Centrul nostru, acesta este un program separat pentru infertilitatea aloimună.

Factorul imunologic în avortul spontan: rolul potrivirilor HLA
Dar observ că nu trebuie să exagerați problema factorului imunologic în avortul spontan. Da, este semnificativ, dar nu este singura problemă a avortului spontan.
Să ne întoarcem puțin la originile geneticii. La un moment dat în dezvoltarea teoriilor despre reproducerea sexuală, a apărut această idee de compatibilitate pentru antigenele tisulare. Deoarece reproducere sexuală dă diversitate în primul rând în ceea ce privește antigenele de compatibilitate tisulară, în ceea ce privește antigenele proteinelor sistemului imunitar. Și atunci am decis să găsim o populație în care familiile numeroase să fie binevenite, unde să nu se folosească contracepția și unde stil de viata sanatos viaţă. Pentru a facilita identificarea factorilor care afectează debutul și evoluția sarcinii. Și au găsit o populație potrivită sub forma comunității creștine a Hatteriților (Frăția Hutter).
Într-o astfel de populație, există o asemănare completă a soților în ceea ce privește antigenele de compatibilitate tisulară din clasa a doua. Și printre ei cupluri s-a constatat că între debutul activității sexuale și nașterea primului copil există o perioadă crescută; creșterea numărului de cazuri de avort spontan; și intervale crescute între nașteri. Nu există cazuri de infertilitate. Și aproape toate astfel de cupluri căsătorite au mai mult de 10 copii.
Din acest studiu, putem concluziona că influența factorului de compatibilitate tisulară este încă limitată. Prin urmare, atunci când avem un cuplu cu asemănarea genelor de compatibilitate tisulară (și există doar aproximativ 15% dintre astfel de cupluri) în combinație cu avortul spontan, trebuie să efectuăm examinări mai aprofundate în toate domeniile legate de avortul spontan. Apoi, necesitatea unei proceduri de limfocitoimunizare poate fi identificată cu precizie.

În prezent, se acordă multă atenție studiului rolului mecanisme imunitareîn procesul de reproducere, deoarece încălcarea lor duce la dezvoltarea infertilității și întreruperea timpurie a sarcinii. Studiile parametrilor imunologici și relația acestora cu procesele de reproducere au condus la concluzia că este necesară restructurarea sistemului imunitar în pregătirea organismului mamei pentru sarcină, începând din perioada ovulației, în momentul implantării embrionului și în perioada timpurie sarcina.

Una dintre cele mai complexe și dificil de diagnosticat cauze ale infertilității și avorturilor spontane recurente este disfuncția imunitară.

În scopul detectării în timp util a infertilității imunologice în laboratorul de imunologie a reproducerii, se efectuează un sondaj asupra cuplurilor căsătorite folosind următoarele metode diagnosticare:

• studiul nivelului de răspuns proliferativ al limfocitelor unei femei la antigenele partenere (într-o cultură mixtă de limfocite)
• determinarea activității factorilor de blocare în serul sanguin al unei femei.
• evaluarea conținutului cantitativ al subpopulațiilor de celule citotoxice naturale din sângele periferic al unei femei.
• imunograma extinsă
• studiul conținutului de celule reglatoare cu activitate supresoare din sângele periferic.
• la identificarea clinică şi semne de laborator infertilitate imunologică, pacienților li se recomandă să se supună procedura medicala- aloimunizarea cu limfocitele soțului, care se efectuează în conformitate cu un program individual.

Consultatie necesara:

• dacă în absenţa ginecologică şi boli endocrine cu viata sexuala regulata pe parcursul anului nu exista sarcini.
• în cazul avorturilor spontane repetate (mai mult de 1 dată) (avort spontan).
• la FIV nereușită in istorie.
• cu ameninţarea întreruperii unei sarcini reale.

Dacă sunt detectate încălcări, este prescrisă o procedură în scopul imunocorecției încălcărilor. aloimunizare cu limfocite partenere (AIL). Aceasta metoda tratamentul este aprobat pentru utilizare de către Serviciul Federal de Supraveghere în Sănătate (licență FS nr. 2009/179 din 02.07.2009)

Procedura se efectuează numai dacă partenerul are rezultate negative testarea pentru infecția HIV, sifilis și hepatita virala(B, C). Complicațiile în AIL nu au fost identificate. Metoda AIL are un efect imunocorector pronunțat, crește eficacitatea tratamentului infertilității, ca în ciclu natural, precum și fertilizare in vitro(ECO). De asemenea, atribuit încercări nereușite fertilizare in vitro.

AIL se efectuează 1 dată în 28-30 de zile (în conformitate cu ciclu menstrual femei) în prima fază a ciclului. Primul curs include 3 proceduri AIL. După a 2-a procedură, cuplul reia analiza de control. În prezența unei dinamici pozitive, a treia procedură AIL este ultima. În absența dinamicii, doza de celule pentru imunizare este crescută și se efectuează al 2-lea curs, care include 2 proceduri. După o analiză de control, în unele cazuri, este necesar să se prescrie un al treilea curs de imunizare cu o creștere a dozei de celule. După atingerea valorilor standard, efectul pozitiv durează în decurs de 6-8 luni.

Pentru perioada 2003-2013. în laboratorul de imunoterapie celulară au fost efectuate circa 3000 de proceduri de aloimunizare cu limfocite ale partenerilor. Pentru această procedură, din sângele partenerului sunt izolate doar limfocitele, care sunt întotdeauna prezente în spermă. În alte țări*, de 20 de ani se desfășoară și procedura de aloimunizare, care ajută o femeie să poarte și să nască un copil sănătos.